相同產地黃芩HPLC指紋圖譜研究

劉素麗，趙勝男，李守拙(承德醫學院中藥研究所，河北承德 067000)

相同產地黃芩HPLC指紋圖譜研究

劉素麗，趙勝男，李守拙△
(承德醫學院中藥研究所，河北承德 067000)

目的:建立相同產地黃芩藥材的HPLC指紋圖譜，以探討相同產地黃芩藥材的個體差異。方法:采用HPLC法測定20個采自內蒙古赤峰的黃芩樣品的HPLC指紋圖譜，色譜條件:Agilent TC-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，乙腈與0.1%冰醋酸溶液進行梯度洗脫，檢測波長276nm，流速1ml/min，柱溫25℃。運用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統分析各個樣品的相似度。結果:20個黃芩藥材樣品的HPLC指紋圖譜主要有6個共有峰，樣品相似度均達到0.9以上，但共有峰相對面積有一定的差異。結論:相同產地黃芩HPLC指紋圖譜分析方法可靠，可為以后研究不同產地黃芩藥材HPLC指紋圖譜奠定基礎。

黃芩;高效液相色譜;指紋圖譜

1 材料與方法

1.1 儀器Agilent 1200Series高效液相色譜儀，美國安捷倫公司;DAD檢測器，Agilent Chemstation System色譜工作站;梅特勒-托利多AG245分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 實驗材料20個藥材樣品，均采自內蒙古赤峰，由中國科學院植物研究所系統與進化植物學國家重點實驗室周世良研究員鑒定為正品黃芩。對照品:黃芩苷(批號:715-9506)、黃芩素(批號:111595-200604)、漢黃芩素(批號:111514-200403)，購自中國藥品生物制品檢定所;漢黃芩苷(批號:20090319)、千層紙素A(批號:20091124)、白楊素(批號:090518)，購自上海順勃生物工程技術有限公司。試劑:甲醇、乙腈為色譜純，冰醋酸、乙酸乙酯等試劑為分析純。

1.3 色譜條件色譜柱:Agilent TC-C18柱(4.6mm× 250mm，5μm);流動相:0.1%冰醋酸水溶液(A)-乙腈(B)是;線性梯度洗脫:0-5min(79%A-21%B)，5-12min (78%A-22%B)，12-30min(70%A-30%B)，30-60min(60%A-40%B);柱溫:25℃，流速:1.0ml/min，檢測波長:276nm，進樣量:10μl。

1.4 溶液的制備

1.4.1 供試品溶液的制備:精密稱取藥材粉末0.25g，加入25ml溶劑(水:乙醇:乙酸乙酯:冰醋酸=50:49:5:1)，置于60ml圓底燒瓶中，回流1.5h，過0.45μm微孔濾膜，即得。

1.4.2 對照品溶液的制備:精密稱取黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、千層紙素A、漢黃芩素、白楊素對照品適量，分別用甲醇配制成濃度為35.0、22.6、19.0、20.2、20.2、38.8、28.2μg/ml的溶液。

1.5 方法學考察

1.5.1 精密度試驗:取黃芩苷對照溶液10μl，連續進樣6次，記錄色譜圖。測得黃芩苷的保留時間和峰面積的RSD均＜2.0%，表明儀器精密度良好，分析結果穩定、可信。

1.5.2 重現性試驗:精密稱取同一個黃芩樣品粉末6份，按“1.4.1”的方法制備供試液，記錄指紋圖譜。測得各共有峰相對峰面積和相對保留時間的RSD＜3%，符合色譜指紋圖譜研究要求。

1.5.3 穩定性試驗:取同一供試液，每2h進樣分析，至48h為止，測得各共有峰相對峰面積和相對保留時間的RSD＜1.5%，表明供試液在48h內穩定。

1.6 HPLC指紋圖譜的建立

1.6.1 指紋圖譜的建立:將20個相同產地黃芩藥材按“1.4.1”的方法制備供試品溶液，按照1.3的色譜條件測定，記錄色譜圖。將藥材指紋圖譜導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件2004A，設定S1為參照圖譜，將譜峰自動匹配，采用平均法生成對照譜，得到指紋圖譜色譜匹配圖，見附圖。

附圖 20個相同產地黃芩匹配結果

1.6.2 共有峰的確定:將所得指紋圖譜進行比較分析，選定吸收較強、峰形較好的色譜峰為共有峰，得到6個共有峰。通過與對照品比較，6個共有峰分別為1號黃芩苷、2號漢黃芩苷、3號黃芩素、4號漢黃芩素、5號白楊素、6號千層紙素A。其中黃芩苷色譜峰含量較高，分離度較好，因此將黃芩苷色譜峰作為參照峰(S峰)，計算各個共有峰與參照峰的峰面積比值。

2 結果

2.1 黃芩指紋圖譜的分析與評價由附圖可知，20個黃芩樣品的HPLC指紋圖譜基本一致。由附表可見，各個峰的相對峰面積有差異性。

附表 黃芩指紋圖譜共有峰相對峰面積比較

2.2 黃芩指紋圖譜相似度評價采用HPLC對20個相同產地黃芩樣品進行處理分析，通過與對照指紋圖譜比較，得到20個黃芩樣品HPLC指紋圖譜的相似度，1-20號樣品的相似度分別為0.997、0.984、0.989、0.960、0.985、0.996、0.993、0.997、0.998、0.991、0.933、0.993、0.988、0.992、0.993、0.999、0.996、0.981、0.994、0.997。結果表明，20個黃芩藥材與對照圖譜的相似度均在0.9以上，即相似度較高。

3 討論

本研究采用HPLC指紋圖譜[2]進行分析，一方面通過圖譜的直觀比較，能夠反映各個共有峰的有無及大致比例關系;另一方面通過計算相對峰面積，判斷同產地黃芩質量是否一致。本研究的方法能綜合、宏觀的評價黃芩質量。HPLC指紋圖譜與現行的單一指標成分相比，所包含的信息是綜合的、多層次的，因此更為科學和合理。

黃芩指紋圖譜相似度評價結果雖然顯示藥材的相似度都在0.9以上，但各個藥材的相似度不盡相同，原因可能是黃芩在生長過程中受土壤、水分、陽光等多種不確定因素的影響所致。各峰相對峰面積的差異性表明，相同產地黃芩藥材的內在質量存在差異性。因此，在研究不同產地黃芩質量的過程中，建議考慮同一產地樣本的個體差異對結果的影響。

通過對相同產地黃芩的指紋圖譜進行研究，說明相同產地黃芩樣品之間存在個體差異，為以后研究不同產地的黃芩奠定了實驗基礎。

[1]肖蓉，袁志芳，王春英，等.不同產地黃芩藥材HPLC指紋圖譜的研究[J].中草藥，2005，36(5):743-747.

[2]Liu G, Ma J, Chen Y, et al. Investigation of fl avonoid pro fi le of Scutellaria bacalensis Georgi by high performance liquid chromatography with diode array detection and electrospray ion trap mass spectrometry [J]. J Chromatogr A, 2009, 1216(23): 4809-4814.

STUDY ON THE FINGERPRINTS OF SCUTELLARIA BAICALENSIS FROM SAME PRODUCTION PLACES

LIU Su-li, ZHAO Sheng-nan, LI Shou-zhuo
(Institute of Chinese Mateia Medica, Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To study the difference of Scutellaria baicalensis from same production places by establishing HPLC fi ngerprints of Scutellaria baicalensis.Methods:HPLC fi ngerprints of 20 Scutellaria baicalensis samples from Neimenggu Chifeng were analyzed by HPLC. The chromatographic condition: Agilent TC–C18Column (4.6mm×250mm, 5μm), mobile phase was acetonitrile and 0.1% glacial acetic acid in gradient elution program, detecting wave length 276nm, fl ow rate 1.0 ml/min, and column temperature 25℃. The similarity of each sample was analyzed by chromatographic fi ngerprint similarity evaluation system.Results:20 Scutellaria baicalensis samples had 6 common peaks. The similarity of 20 samples were all higher than 0.9, but there had some differences between the relative area of the common peaks.Conclusions:HPLC fi ngerprints of Scutellaria baicalensis from same production places will provide a reference standard for the study of Scutellaria baicalensis from different production places.

Scutellaria baicalensis Georgi; HPLC; Fingerprint黃芩為唇形科植物(Scutellaria baicalensis Georgi)，以根入藥，有清熱燥濕、涼血安胎、解毒的功效，產于河北承德、遼寧、陜西、山東、內蒙古、黑龍江等地。黃芩含有多種化學成分，其主要成分為黃酮類化合物。近年來，越來越多的學者開始研究不同產地黃芩質量的差異，但忽略了同產地、同批黃芩藥材間的差異[1]。由于受陽光、土壤、水分等的影響，相同產區、同批藥材的化學成分含量不盡相同。本研究采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法，對20個同產地黃芩樣品進行了HPLC指紋圖譜研究，以期為以后研究不同產地黃芩藥材的HPLC指紋圖譜奠定基礎。

R284.1

A

1004-6879(2013)04-0283-03

2012-12-21)

△ 通訊作者