Smad4蛋白在胃癌中的表達及意義

劉海旺，李春輝，程 玉(承德醫學院附屬醫院病理科，河北承德 067000)

Smad4蛋白在胃癌中的表達及意義

劉海旺，李春輝△，程 玉
(承德醫學院附屬醫院病理科，河北承德 067000)

目的:觀察胃癌Smad4蛋白的表達情況及與胃癌臨床病理特征的關系。方法:應用免疫組織化學染色SP法檢測25例正常胃黏膜、60例胃癌組織Smad4蛋白的表達情況。結果:胃癌組織Smad4蛋白的陽性表達率(70.00%)明顯低于正常胃黏膜(92.00%，P＜0.05)。胃癌組織Smad4蛋白的表達與胃癌分化程度、淋巴結轉移和TNM分期有關(P＜0.01，P＜0.05)。結論:胃癌組織Smad4蛋白表達降低可能是胃癌發生發展的重要因素。

胃癌;Smad4蛋白;免疫組化

胃癌在我國發病率較高，在我國其發病率和死亡率居各類腫瘤的首位，嚴重威脅人們的健康。但胃癌的發病機制目前尚未完全明確，隨著分子生物學的發展，胃癌發病機制的研究成為了目前的研究重點。Smad4作為一種腫瘤抑制基因，是TGF-β1信號轉導通路必須的中介分子，對維持細胞的正常生長發育具有重要作用。Smad4功能失活或下調會使信號轉導中斷，胃腺上皮細胞失去TGF-β1/Smads信號通路的正常抑制性調節作用，細胞增殖和分化異常進而導致腫瘤的發生發展。本研究通過免疫組化法，觀察Smad4蛋白在胃癌組織的表達情況，探討Smad4在胃癌進展中的作用及其與胃癌臨床病理特征的關系，為臨床判斷胃癌預后提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 標本來源承德醫學院附屬醫院2010年9月-2012年2月手術切除經病理證實為胃癌的標本60例，以及25例胃癌遠端的正常黏膜。所有患者術前未經放療、化療。組織常規取材后固定于中性甲醛，常規石蠟包埋，連續切片，厚4μm。由2名有經驗的病理醫師進行雙盲獨立閱片，鏡檢胃癌組織學類型、分化程度及淋巴結轉移情況。

1.2 患者一般情況60例胃癌患者中，男48例、女12例，年齡45-77歲，平均年齡(58.5±10.0)歲;高中分化24例、低分化者36例，無淋巴結轉移者25例、有淋巴結轉移者35例，Ⅰ+Ⅱ期28例、Ⅲ+Ⅳ者32例。25例正常胃黏膜，男16例、女9例，年齡46-72歲，平均年齡(60.0±6)歲。

1.3 免疫組化染色檢測Smad4蛋白的表達及結果判定

小鼠抗Smad4單克隆抗體，購自福州邁新生物技術開發有限公司，采用SP免疫組化法，Smad4單克隆抗體稀釋倍數為1:200。實驗步驟按說明書進行，DAB顯色，蘇木素復染細胞核。以PBS代替一抗作為陰性對照，用已知正常胃黏膜組織的標準陽性切片作為陽性對照。以胞漿中出現棕色或棕褐色顆粒為Smad4陽性反應。每例標本隨機選取5個高倍鏡視野(×400)，每個視野計數200個細胞，以＞50%的細胞出現棕色或者棕褐色，作為Smad4蛋白陽性表達，＜50%判定為陰性[1]。

1.4 統計處理采用SPSS 17.0統計軟件進行統計分析，行卡方檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Smad4蛋白在不同胃組織中的表達正常胃黏膜可見Smad4蛋白陽性表達，以腺體頸部和底部較多，在胞漿內可見棕色顆粒，著色深淺不一。25例胃正常黏膜Smad4蛋白陽性表達率為92.00%(23/25)，60例胃癌組織Smad4蛋白陽性表達率為70.00%(42/60);胃癌組織Smad4蛋白陽性表達率明顯低于胃正常黏膜(P＜0.05)。見附表。

2.2 Smad4蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系胃癌組織Smad4蛋白的表達與胃癌分化程度、淋巴結轉移和TNM分期有關(P＜0.01，P＜0.05):高中分化明顯高于低分化，無淋巴結轉移高于有淋巴結轉移，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期高于Ⅲ+Ⅳ期。見附表。

附表 胃癌組織Smad4蛋白表達與胃癌臨床病理特征的關系

3 討論

Smad4基因定位于染色體18q21，所編碼的Smad4蛋白是TGF-β1信號轉導通路所必須的中介分子，對維持細胞的正常生長發育起重要作用，使TGF-β1能在不同的環境下發揮多種功能產生各種效應，并可能與腫瘤的發生發展密切相關。有研究發現，多數胰腺癌存在Smad4基因的缺失或突變[2]，而Smad4的失活也可見于胃癌[3]、結直腸癌[4]等。

Smad4被認為是通用調節因子，它幾乎能與所有活化的受體調節型Smads蛋白結合形成低聚體復合物。Smad4基因通過TGF-β1信號通路抑制上皮細胞的生長，Smad4蛋白的缺乏或下調可能是胃癌細胞逃逸TGF-β系統生長抑制的原因之一[2-4]。目前認為，胃癌是正常胃黏膜細胞在各種致癌因素的作用下，通過腸上皮化生、不典型增生等癌前病變，逐漸演變而來。Smad4作為一種腫瘤抑制基因，突變后的Smad4蛋白構象發生改變，不能與磷酸化的Smad2和Smad3結合，從而不能發揮調控轉錄的作用[5]。

Leng等[6]報道，胃癌組織Smad4蛋白的表達明顯低于癌旁組織，并且Smad4蛋白表達與胃癌組織分化程度有關，分化程度低的胃癌組織Smad4的表達明顯低于分化程度高的胃癌組織，這與本研究結果一致。李強等[7]的研究表明，賁門癌Smad4表達與分化程度和年齡有關，而發生于胃其它部位的腫瘤Smad4表達與分化程度和年齡無關，因此表明Smad4蛋白表達下降是胃腺上皮細胞癌變過程中頻發的分子事件，并且與細胞惡變的進展程度和分化程度密切相關。

本研究發現，胃癌組織Smad4的表達明顯低于正常胃黏膜，并且胃癌組織Smad4蛋白的表達與胃癌分化程度、淋巴結轉移和TNM分期有關:低分化明顯低于高、中分化，有淋巴結轉移明顯低于無淋巴結轉移，TNMⅢ+Ⅳ期明顯低于Ⅰ+Ⅱ期。因此表明，Smad4蛋白表達降低在胃癌的發生發展過程中具有重要作用。

[1]徐巖，陳亞男，王振寧.胃癌癌變過程中Smad4表達的變化及其與臨床病理特征的關系[J].世界華人消化雜志，2007，15(13):1510-1515.

[2]劉成敏，張成仁，王秀梅.Smads介導的TGF-β信號通路與腫瘤關系的研究進展[J].中華腫瘤防治雜志，2010,17(8): 631-634.

[3]Kim JY, Park DY, Kim GH, et al. Smad4 expression in gastric adenoma and adenocarcinoma:frequent loss of expression in diffuse type of gastric gastric adenoma[J]. Histol Histopathol,2005, 20(2):543-549.

[4]IjichiH, IkenoueT, KatoN, et al. Systematic analysis of the TGF-bete-smad signaling pathway in gastrointestinal cancer cell [J]. Biochem Biophys Res Commun, 2001,289(2):350-357.

[5]顧紅兵，李繼坤.TGF-β/Smads信號通路與胃癌關系的研究進展[J].現代生物醫學進展，2010，10(3):574-577.

[6]Leng A, Liu T, He Y, et al. Smad4/Smad7 balance: a role of tumorigenesis in gastric cancer [J]. Exp Mol Pathol, 2009, 87(1):48-53.

[7]李強，周永寧，張志鎰.Smad4在賁門及非賁門癌中的表達及其與生存的關系[J].第四軍醫大學學報，2009，30(15):1413-1416.

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF SMAD4 PROTEIN EXPRESSION IN GASTRIC CARCINOMA

LIU Hai-wang, LI Chun-hui, CHENG Yu
(Pathology Department, the Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To observe the expression of smad4 protein in gastric carcinoma and investigate the relationships between Smad4 protein expression and clinical pathological features of gastric carcinoma.Methods:SP immunohistochemical staining was used to detect the expression of Smad4 protein in 25 cases normal gastric mucous membrane and 60 cases gastric carcinoma.Results:The positive rate of Smad4 in gastric carcinoma was 70.00%, which was obviously lower than that in normal gastric mucous membrane (92.00%, P＜0.05). The Smad4 protein expression in gastric carcinoma had relations with differentiated degree of gastric carcinoma, lymph node metastasis and TNM stage (P＜0.01, P＜0.05). Conclusions: The low expression of Smad4 protein may play an important role in development of gastric carcinoma.

Gastric carcinoma; Smad4 protein; Immunohistochemistry

R735.1

A

1004-6879(2013)04-0279-03

2012-12-31)