黃芩莖葉總黃酮對Hela細胞增殖的影響

郭慧芳，徐 倩

(承德醫學院，河北承德 067000)

黃芩莖葉總黃酮對Hela細胞增殖的影響

郭慧芳，徐 倩

(承德醫學院，河北承德 067000)

目的:探討黃芩莖葉總黃酮對宮頸癌Hela細胞增殖的影響。方法:Hela細胞分為實驗組和對照組，實驗組細胞加入不同濃度的黃芩莖葉總黃酮(0.04、0.06、0.08、0.1、0.14、0.16mg/ml)。四甲基偶氮唑鹽法(MTT法)檢測細胞的增殖情況，倒置顯微鏡觀察Hela細胞形態的變化。結果:黃芩莖葉總黃酮能顯著抑制Hela細胞增殖(P＜0.01);且在一定范圍內隨著藥物濃度的增加抑制率逐漸升高。形態學觀察顯示，實驗組Hela細胞數量明顯減少，形態發生改變，懸浮的細胞增多。結論:黃芩莖葉總黃酮對Hela細胞增殖具有明顯的抑制作用。

黃芩莖葉總黃酮;宮頸癌;Hela細胞;增殖

黃芩是我國一種傳統中草藥，始載于《神農草本經》，傳統用根入藥，但野生資源十分有限，近年來國內外研究學者開始對黃芩莖葉進行研究。黃芩莖葉總黃酮是從黃芩的莖葉中提取的有效成分。研究表明，黃芩莖葉總黃酮具有較強的抗氧化、抗炎、降壓、降血脂、解熱、鎮痛、提高機體免疫力等功效，但對其抗腫瘤功效的研究很少[1-4]。國內有研究報道，黃酮類化合物可以抑制腫瘤細胞增殖，可能發展成為抗腫瘤藥物[5]。本研究采用MTT法觀察了不同濃度黃芩莖葉總黃酮對宮頸癌Hela細胞增殖的影響，以期為黃芩莖葉總黃酮用于治療宮頸癌提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料黃芩莖葉總黃酮:由承德醫學院中藥研究所提供(含量98%);宮頸癌Hela細胞株:購自上海細胞庫。

1.2 儀器和試劑CO2孵育箱:德國Heraeus公司;凈化工作臺:上海新苗醫療器械制造有限公司;Multiskan MK3酶聯儀:芬蘭Thermo公司;顯微鏡及攝像裝置:日本Olympus公司;6孔、96孔細胞培養板:無錫Biousing生物科技有限公司;DMEM培養基:美國GIBCO公司;MTT及胰酶:美國Sigma公司;二甲基亞砜(DMSO):天津市標準科技有限公司;無支原體胎牛血清:杭州四季青生物工程材料有限公司。

1.3 方法

1.3.1 細胞培養:宮頸癌Hela細胞貼壁生長于DMEM完全培養基中(含10%胎牛血清，青霉素和鏈霉素各100U/ml)，置于37℃、飽和濕度、5% CO2培養箱中培養。細胞分為實驗組和對照組:實驗組細胞加入用DMEM配制的不同濃度的黃芩莖葉總黃酮，終濃度分別為0.04mg/ml、0.06mg/ ml、0.08mg/ml、0.1mg/ml、0.14mg /ml、0.16mg/ml，每組設6個平行孔;對照組細胞只加培養液。

1.3.2 MTT法檢測Hela細胞的增殖情況:取對數生長期Hela細胞，用胰酶消化后接種于96孔培養板，每孔加入細胞5×103個，培養液200μl。常規培養，細胞貼壁后加藥。加藥培養24h后，每孔加入MTT(5mg/ml)溶液20μl，繼續培養4h后終止培養，小心吸去孔內培養液。每孔加入150μl二甲基亞砜，低速振蕩10min，使結晶物充分溶解。在酶聯檢測儀上測定490nm處各孔的吸光值(OD值)，并按照下列公式計算各組細胞的生長抑制率，其中加藥組細胞的OD值為同一濃度處理的不同樣品的平均值。

1.3.3 形態學觀察:取對數生長期的Hela細胞接種于6孔細胞培養板，細胞貼壁后，實驗組加入黃芩莖葉總黃酮(終濃度為0.1mg/ml)，對照組不加藥物，加相應體積的培養基，培養24h后在倒置顯微鏡下觀察Hela細胞形態的變化。

1.4 統計處理采用SPSS 15.0統計軟件進行統計分析，計量資料以(±s)表示，多個樣本的比較采用單因素方差分析(LSD法)，兩兩比較采用q檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 黃芩莖葉總黃酮對Hela細胞生長的抑制作用不同濃度的黃芩莖葉總黃酮處理后，Hela細胞的增殖被明顯抑制，黃芩莖葉總黃酮各劑量組Hela細胞的抑制率均明顯高于對照組(P＜0.01)。隨著黃芩莖葉總黃酮劑量的增加，Hela細胞的抑制率逐漸升高(P＜0.01，P＜0.05);但黃芩莖葉總黃酮0.1mg/ml、0.14mg/ml、0.16mg/ml組Hela細胞的抑制率比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。見附表。

附表 MTT法檢測黃芩莖葉總黃酮對Hela細胞增殖的影響(±s，n=6)

附表 MTT法檢測黃芩莖葉總黃酮對Hela細胞增殖的影響(±s，n=6)

與對照組比較:aP＜0.01;與0.04mg/ml實驗組比較:bP＜0.01;與0.06mg/ml實驗組比較:cP＜0.01;與0.08mg/ml實驗組比較:dP＜0.05，eP＜0.01

組別 藥物濃度(mg/ml) OD值 抑制率(%)對照組 0 1.0347±0.02641 --0.04 0.8267±0.04174 20.02±5.25a0.06 0.6845±0.02365 33.78±3.49a0.08 0.3122±0.04806 69.83±4.63abc實驗組 0.1 0.2462±0.02915 76.20±2.88abcd0.14 0.2177±0.03213 78.94±3.28abce0.16 0.2078±0.03870 79.96±3.36abce

2.2 形態學觀察對照組宮頸癌Hela細胞呈多角形，核圓，細胞邊緣清楚，背景清晰;實驗組Hela細胞數量明顯減少，形態發生明顯變化，呈圓形或長條形，懸浮的細胞增多。

3 討論

本研究發現，一定濃度的黃芩莖葉總黃酮可明顯抑制Hela細胞的生長繁殖，且在一定范圍內隨著給藥劑量的增加，抑制作用逐漸增強。黃芩莖葉總黃酮抑制Hela細胞增殖的機制尚不明確，還需進一步研究。

目前，對黃芩莖葉總黃酮功效的研究主要集中在保護心肌缺血/再灌注損傷、對心血管及其功能的作用、調血脂作用、神經保護作用、保護肝組織損傷、解熱鎮痛、抗炎作用、抗病毒作用、對免疫系統的影響等方面，對其抗腫瘤功效的研究較少。但有研究表明，黃芩莖葉總黃酮具有抑制腫瘤轉移、侵襲等作用。如楊鶴松的研究發現[6]，黃芩莖葉總黃酮及野黃芩苷對體外培養的小鼠肺腺癌LA795細胞系有明顯的抑制作用;劉金霞等[7]應用W256引起的大鼠骨組織吸收和溶解動物模型，發現黃芩莖葉總黃酮能抑制腫瘤細胞增殖、侵襲和轉移，作用機制可能是雙向調節免疫功能。本研究以宮頸癌Hela細胞作為研究對象，證實黃芩莖葉總黃酮能夠抑制腫瘤細胞的增殖，為將黃芩莖葉總黃酮開發成為抗腫瘤藥物提供了實驗依據。

宮頸癌是最常見的女性生殖器官腫瘤，在女性惡性腫瘤中發病率僅次于乳腺癌，位居第二位。目前，宮頸癌的首選療法仍是手術和放療[1]。但放療的不良反應較大，部分患者難以堅持。本研究初步表明一定濃度的黃芩莖葉總黃酮對Hela細胞的生長具有明顯的抑制作用，可為黃芩莖葉總黃酮在宮頸癌治療中的應用提供一定的實驗依據。

[1]尤翠蘭，蘇佩清，周曉霞.黃芩莖葉總黃酮調血脂作用及其機制的研究[J].中國中藥雜志，2005，33(9):1064-1066.

[2]周曉霞，李素婷，周曉慧，等.黃芩莖葉總黃酮抗炎作用的實驗研究[J].中國中醫藥信息雜志，2000，7(4):27-28.

[3]李素婷，楊鶴梅，曹凱.黃芩莖葉總黃酮對小鼠組織GSHPX活性和LPO含量的影響[J].承德醫學院學報，1999，16(4):306.

[4]譚秦莉，劉冬，李玉寶，等.總黃酮化合物藥理作用研究進展[J].安徽中醫學院學報，2009，28(3):62-64.

[5]段迎春.宮頸癌的治療進展[J].國外醫學婦產科學分冊，2007，34(2):137-139.

[6]楊鶴松.黃芩莖葉總黃酮對LA795小鼠肺腺癌的抑制作用[J].承德醫學院學報，2008，25(4):139.

[7]劉金霞，王立平，徐小惠.黃琴莖葉總黃酮對W256瘤細胞引起大鼠骨侵襲抑制作用[J].中國藥理學通報，2005，21(1):125-126.

EFFECTS OF SCUTELLARIA BAICALENSIS STEM-LEAF TOTAL FLAVONOID ON PROLIFERATION OF HELA CELLS

GUO Hui-fang, XU Qian
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the effects of Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid on proliferation of cervical cancer cell line Hela cells.Methods:Hela cells were incubated with different concentration of Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid (0.04,0.06,0.08,0.1,0.14,0.16mg/ml). MTT assay was used to detect the proliferation of Hela cells, and inverted microscope to observe the morphology of Hela cells.Results:Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid could inhibit proliferation of Hela cells obviously (P＜0.01); Moreover, the inhibitory rate gradually increased with increasing of Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid concentration in a certain range. Observed under inverted microscope, the number of Hela cells reduced and morphology of Hela cells changed obviously, and suspension cells increased. Conclusions: Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid has obviously inhibitory effects on proliferation of Hela cells.

Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid; Cervical cancer; Hela cells; Proliferation

R285

A

1004-6879(2013)04-0275-03

2012-12-18)