妊娠期高血壓疾病患者胎盤中MMP-9、TIMP-1和EMMPRIN的表達及意義

徐 虹，劉 芳

（1.浙江省紹興縣中心醫院婦產科，浙江紹興312030；2.浙江省紹興市人民醫院病理科，浙江紹興312000）

·論 著·

妊娠期高血壓疾病患者胎盤中MMP-9、TIMP-1和EMMPRIN的表達及意義

徐 虹1，劉 芳2

（1.浙江省紹興縣中心醫院婦產科，浙江紹興312030；2.浙江省紹興市人民醫院病理科，浙江紹興312000）

目的研究妊娠期高血壓疾病患者胎盤中基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）9、基質金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of matrix metalloproteinase，TIMP）1以及細胞外基質金屬蛋白酶誘導劑（extracellularmatrixmetalloproteinase inducer，EMMPRIN）的表達，探討其與疾病的關系。方法采用免疫組織化學SP法和二步法對40例正常足月妊娠婦女以及55例妊娠期高血壓疾病患者（其中妊娠期高血壓患者15例，輕度子癇前期患者25例，重度子癇前期患者15例）胎盤中MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN的表達進行檢測。結果MMP-9的表達，輕度子癇前期組明顯低于正常妊娠組，重度子癇前期組低于高血壓組，輕度子癇前期組低于正常妊娠組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。TIMP-1的表達，子癇前期組高于正常妊娠組和高血壓組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。EMMPRIN的表達，子癇前期組明顯低于正常妊娠組，重度子癇前期組低于輕度子癇前期組及高血壓組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論妊娠期高血壓疾病患者胎盤中滋養細胞MMP-9、EMMPRIN表達下降，TIMP-1表達升高，且其表達水平的高低可能與病情嚴重程度有關。

高血壓，妊娠性；胎盤；基質金屬蛋白酶9

妊娠高血壓疾病是妊娠期特發的疾病，嚴重危及母嬰安全，其病因和發病機制至今尚不明確。近年來研究［1］認為，妊娠期高血壓疾病與胎盤生理性血管重鑄障礙有關。在胎盤的形成過程中，降解細胞外基質是滋養細胞向母體子宮內膜有節制的浸潤的重要環節，降解細胞外基質的一類重要酶便是基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）。本研究通過檢測MMP-9、基質金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of Matrix metalloproteinase，TIMP-1）和細胞外基質金屬蛋白酶誘導劑（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN，又稱CD147）在正常妊娠和妊娠高血壓疾病患者胎盤組織中的表達，探討這3種因子與該疾病的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2010年8月—2011年8月浙江省紹興縣中心醫院住院行剖宮產術的妊娠高血壓疾病患者55例（診斷標準按照人民衛生出版社出版的第7版《婦產科學》［2］），其中，妊娠高血壓患者15例，輕度子癇前期患者25例，重度子癇前期患者15例。同時收集同期住院的正常孕婦40例為對照組。2組孕婦均為初產、單胎，其年齡及平均孕周等一般情況差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 標本采集：胎盤娩出后，立即取胎盤母面兩母體葉之間組織約1.5cm3大小，避開出血及鈣化區，立即置于福爾馬林液中固定，石蠟包埋，5μm連續切片。

1.3 指標檢測：采用免疫組織化學二步法測定胎

盤組織中MMP-9、TIMP-1的表達，鼠抗人MMP-9免疫組織化學單克隆抗體和兔抗人TIMP-1免疫組織化學多克隆抗體購自福州邁新生物技術開發有限公司。采用SP法檢測EMMPRIN，鼠抗人EMMPRIN免疫組織化學單克隆抗體購自SANTA CRUZ生物技術公司。

1.4 結果判定：在顯微鏡下全面觀察每張切片，以細胞漿內出現棕黃色顆粒為陽性細胞，并攝影保存，利用Image pro-plus6.0圖像分析軟件，進行圖像分析。以胎盤組織中滋養細胞作為目標染色區域，測定這個區域的累積吸光度和這個區域的面積，兩者相除，即得平均吸光度。將平均吸光度作為評估蛋白表達的強度。每例對象選1張切片，每張切片隨機選3個視野，每個視野測定3次，取均值。

1.5 統計學方法：應用SPSS16.0統計軟件進行數據處理，計量資料以±s表示，分別采用單因素方差分析和q檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN的表達，主要分布在滋養細胞和絨毛間質血管壁中。MMP-9的表達，子癇前期組明顯低于對照組，重度子癇前期組低于高血壓組，輕度子癇前期組低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。TIMP-1的表達水平，子癇前期組高于對照組和高血壓組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。EMMPRIN的表達水平，子癇前期組明顯低于對照組，重度子癇前期組低于輕度子癇前期組及高血壓組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組產婦胎盤滋養細胞MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN的表達水平Table 1 The expression of MMP-9，TIMP-1 and EMMPRIN in placenta of each group（xˉ±s）

3 討 論

妊娠高血壓疾病的病因研究，近來多認為系胎盤源性，繼發于胎盤著床過淺，即滋養細胞侵蝕過淺導致的胎盤灌注不足、缺血［3］。人類胎盤的形成是滋養細胞黏附于蛻膜化的子宮內膜，與子宮螺旋小動脈接觸，繼而侵入血管腔，分化并替換血管內皮細胞，促成血管低阻高流量的形態變化，從而保證胎兒的營養需要，即所謂的“螺旋小動脈生理重鑄”。有研究［3］表明，妊娠高血壓疾病患者螺旋動脈生理變化僅限于動脈的蛻膜段，30%～50%胎盤蛻膜段螺旋動脈內甚至沒有滋養細胞的侵入，由此致子宮動脈管徑較小，胎盤灌注不足，從而發病［4］。有學者［5］認為正常妊娠有賴于促進侵蝕性基因和抑制侵蝕性基因對滋養細胞的調控平衡，如果平衡被打破，則導致滋養細胞侵蝕能力下降，子宮螺旋小動脈重鑄障礙，胎盤缺血缺氧，最后導致妊娠高血壓疾病。

組織或細胞的侵蝕性主要表現為降解細胞外基質的能力大小，MMP是一組結構和功能相關的鋅離子依賴性內肽酶，至少由20種能降解細胞外基質的酶類組成。它幾乎能降解細胞外基質的所有成分，如膠原蛋白、蛋白多糖、纖維結合蛋白等。MMP-9是MMP家族中的重要一員，它主要參與降解Ⅳ型膠原，而Ⅳ型膠原是細胞外基質最主要的成分，所以，MMP-9是常被用來作為組織細胞侵蝕性的標志物之一。本研究結果發現MMP-9在子癇前期組的表達明顯低于正常妊娠組，重度子癇前期組的表達明顯低于高血壓組，這表明妊娠期高血壓疾病患者胎盤中滋養細胞MMP-9表達下降，其表達的高低還可能與病情嚴重程度有關。

TIMP是近年來發現的MMP的天然抑制劑。迄今發現有TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4共4種。TIMP-1與MMP-9有很強的親和力，它能與MMP-9以1∶1的比例形成復合物，從而抑制其活性。最早的Kolben等［6］用 ELISA法檢測胎盤提取液中TIMP-1含量明顯高于正常孕婦。本研究子癇前期組TIMP-1的表達水平高于正常妊娠組，這與國內張弘等［7］的研究相一致，表明妊娠期高血壓疾病患者胎盤中滋養細胞TIMP-1表達升高。

EMMPRIN則是一類屬于免疫球蛋白的超家族跨膜糖蛋白，它是一種多功能蛋白，不僅能上調MMP的表達，還能促進血管生長，參與免疫調節和組織重建等［8］。本研究中EMMPRIN在子癇前期組的表達明顯低于正常妊娠組，重度子癇前期組的表達低于高血壓組，這表明妊娠高血壓疾病患者胎盤中滋養細胞EMMPRIN表達下降，其表達的高低可能與病情嚴重程度有關。

綜上所述，妊娠高血壓疾病的發生可能與滋養細胞侵蝕性相關蛋白MMP-9、TIMP-1、EMMPRIN的表達水平高低有關，而且表達水平的高低可能與病情的嚴重程度有關。

［1］林其德.妊娠高血壓綜合征病因學研究進展和展望［J］.中華婦產科雜志，2003，38（8）：471-473.

［2］樂杰.婦產科學［M］.7版.北京：人民衛生出版社，2008：92-99.

［3］GALLERY ED，CAMPBELL S，ILKOVSKI B，et al.A novel in vitro co-culture system for the study of maternal decidual endothelial cell-trophoblast interaction in human pregnancy［J］.Br JObstet Gynaecol，2001，108（6）：651-653.

［4］MERVIEL P，EVAIN-BRION D，CHALLIER JC，et al.The molecular basis of embryo implantation in humans［J］.Zentralbl Gynakol，2001，123（6）：328-329.

［5］DE JAGER CA，LINTON EA，SPYROPOULOU I，et al.Matrix metalloprotease-9，placental syncytiotrophoblast and the endothelial dysfunction of pre-eclampsia［J］.Placenta，2003，24（1）：84-91.

［6］KOLBEN M，LOPENS A，BLASER J，et al.Proteases and their inhibitors are indicative in gestational disease［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，1996，68（1/2）：59-65.

［7］張弘，林其德，喬寵.子癇前期患者滋養細胞浸潤相關基因mRNA及蛋白表達的研究［J］.中華婦產科雜志，2006，41（8）：509-513.

［8］KAZUKI N，HIROSHI I，KAORI K，et al.Emmprin：matrix metalloproteinase modulator and multifunctional cell recognition molecule that plays a critical role in cancer progression［J］.Pathology International，2006，56（7）：359-367.

（本文編輯：趙麗潔）

EXPRESSION OF MATRIX METALLOPROTEINASE 9，TISSUE INHIBITOR OF MATRIX METALLOPROTEINASE 1 AND EXTRACELLULAR MATRIX METALLOPROTEINASE INDUCER IN PLACENTA W ITH HYPERTENSIVE DISORDER COMPLICATING PREGNANCY

XU Hong1，LIU Fang2
（1.Department of Obstetrics and Gynecology，Shaoxing County Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312030，China；2.Department of Pathology，Shaoxing People's Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China）

Objective To study the expression and significance of matrix metalloproteinase（MMP）-9，tissue inhibitor of matrix metalloproteinase（TIMP）-1 and extracellular matrix metalloproteinase inducer（EMMPRIN）in placenta with hypertensive disorder complicating pregnancy.M ethods Immunohistochemical method was used to detect the expression of MMP-9，TIMP-1 and EMMPRIN in placenta from 40 cases normal term pregnancy women and 55 cases of pregnancy women with hypertensive disorder complicating pregnancy（including 15 cases of pregnancy women with hypertension，25 cases of pregnancy women withmild preeclampsia and 15 cases of pregnancy women with severe preeclampsia）.Results The Expression of MMP-9 in placenta of preeclampsia was significantly lower than that in normal term pregnancy，which in severe preeclampsia group was significantly lower than in hypertension group，and in mild preeclampsia group was significantly lower than in the normal group（P＜0.05）.Expression of TIMP-1 in placenta of preeclampsia was significantly higher than normal term

hypertension，pregnancy-induced；placenta；matrixmetalloproteinase 9

R714.246

A

1007-3205（2013）03-0284-03

2012-07-31；

2012-08-21

徐虹（1976-），女，浙江紹興人，浙江省紹興縣中心醫院主治醫師，醫學碩士，從事婦產科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.03.013

pregnancy and hypertension group（P＜0.05）.Expression of EMMPRIN in placenta of preeclampsia was significantly lower than that in normal term pregnancy，which in severe preeclampsia group was significantly lower than that in mild preeclampsia group and hypertension group（P＜0.05）.Conclusion

The lower expression of MMP-9 and EMMPRIN，and higher expression of TIMP-1 in placenta may contribute to the development of hypertensive disorder complicating pregnancy.