ELISA一步法和二步法檢測HBsAg結果的對比分析

熊陽瓊，楊雨文，黃丁能

(豐城市中醫院，江西豐城331100)

ELISA一步法和二步法檢測HBsAg結果的對比分析

熊陽瓊，楊雨文，黃丁能

(豐城市中醫院，江西豐城331100)

乙型肝炎；ELISA；HBsAg；一步法；二步法

乙型肝炎病毒(HBV)傳播途徑廣，傳染性強，發病率高，我國在世界上屬于乙型肝炎病毒感染的高度流行區。HBV表面抗原(HBsAg)在HBV感染檢測中一直為最重要的標志物，是乙肝的早期診斷指標之一。因此，準確地檢測HBsAg對于HBV感染的臨床診斷和治療有著重要的意義。為驗證ELISA法檢測試劑盒的質量與性能，筆者通過對2154例江西省豐城市中醫院體檢者血清及質控血清同時用兩種方法進行HBsAg檢測并對結果進行對比分析，現分析報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源2154例健康體檢者血液樣本選自2012年3月至2012年10月江西省豐城市中醫院體檢科健康體檢者，其中男1071例，女1083例，年齡20～35歲，平均年齡25歲。

1.2 儀器德國MAGLUMI-2000全自動化學發光儀;雷勃MULTISKAN-MK3自動酶標儀；北京普朗DNX-9620A自動洗板機。

1.3 試劑與方法ELISA一步法檢測HBsAg試劑采用北京萬泰生物藥業股份有限公司；二步法HBsAg試劑采用北京萬泰生物藥業股份有限公司。血清樣本均采用一步法和二步法平行檢測HBsAg，其操作嚴格按照試劑說明書進行。檢測陽性樣本均用上述二種方法復檢，其結果不一致樣本再用MAGLUMI-2000全自動化學發光儀進行HBsAg的定量檢測。質控血清購自北京康徹思坦生物技術有限公司生產的HBsAg(1.0IU/ml)質控血清，并配制成0.5IU/ml、0.25IU/ml、0.125IU/ml待用。

1.4 結果判斷ELISA一步法和二步法結果判斷均為P/N值≥2.1(S/CO≥1)為陽性[1]。MAGLUMI-2000全自動化學發光儀檢測結果大于0.1IU/ml判為陽性。

1.6 統計學方法數據處理均采用SPSS 17.0統計軟件進行統計學處理。臨床計數資料用χ2檢驗分析，計量資料用t檢驗分析。

2 結果

2.1 兩種方法同時檢測HBsAg結果2154例HB-sAg樣本檢測結果顯示ELISA一步法檢測HBsAg陰性1978例，陽性176例，陽性率為8.17%；二步法檢測HBsAg陰性1953例，陽性201例，陽性率為9.33%。ELISA一步法檢測的1978例HBsAg陰性樣本中，有25例二步法檢測為陽性，并在化學發光儀上進行HBsAg定量檢測，23例檢測結果為(0.13～0.84)IU/ml、2例大于250IU/ml，均判定為陽性結果。一步法檢出率僅為二步法的87.56%(176/ 201)，而漏檢率為1.16%(25/2154)。二者檢出率的差異有統計學意義(P＜0.05)，結果見表1。

表1 ELISA一步法及二步法HBsAg檢測結果比較

2.2 二種方法對HBsAg質控血清1.0IU/ml、0.5IU/ ml、0.25IU/mLml和0.125IU/ml不同濃度進行檢測，一步法S/CO均值分別為1.46、0.85、0.52和0.24；二步法為3.68、2.25、1.77和1.10。一步法最低檢測濃度為1IU/ml，二步法為0.1～0.2IU/ml，二者靈敏度差異有統計學意義(P＜0.01)，見表2。

表2 不同濃度質控血清檢測結果比較

3 討論

乙型肝炎病毒存在于乙型病毒性肝炎患者的血液、汁液、唾液、經血、淚液及乳汁等分泌物中。HBV是一種嚴重危害人類健康的世界性傳染病[1]，我國更是乙肝高發區。而我國人群HBsAg攜帶率高達10%～15%[2,3]，HBsAg攜帶者總人數達1.2億左右，慢性乙肝患者多達1000萬人，造成嚴重的社會問題，其防治任務相當艱巨。

ELISA一步法檢測HBsAg雖然簡化了操作步驟,縮短了反應時間,已被各實驗室廣泛使用,其應用高親和力的單克隆HBsAb抗體,其敏感性和特異性也顯著提高。ELISA一步法[4]是將樣本和酶標記抗體同時加入反應孔中,因此反應孔對血清中乙肝病毒的非特異性吸附是最常見的干擾因素[5,6]。因此實際工作中經常會出現因樣本中HBsAg濃度過低或過高致假陰性結果。ELISA二步法[7]是將樣本加入37℃反應孔中60 min,洗滌后再加入酶標抗體,乙肝表面抗原雖然被吸附到反應孔,通過洗滌可以清除掉。本次對樣本2154例檢測HBsAg結果其中一步法檢出率為8.17%，二步法為9.33%。一步法1978例陰性樣本中二步法檢出陽性25例，漏檢率為1.16%。其23例經化學發光定量檢測為(0.13～0.84)IU/ml，提示樣本中HBsAg濃度極低，2例超過250IU/ml，顯示其樣本中HBsAg濃度過高，導致一步法因靈敏度較低和鉤狀效應的發生[8]而呈假陰性結果。分析其檢測原因[9]，一步法由于血清和酶標抗體同時加入，若HBsAg濃度過高，分別與酶標抗體和固相抗體形成免疫復合物，不形成夾心復合物，因而產生鉤狀效應而呈假陰性。二步法為向反應微孔先加血清，經長時間溫育，高濃度HBsAg與包被在固相乙肝表面抗體呈“飽和”性結合，洗滌后再與酶標抗體結合形成夾心復合物而呈陽性，同時，不同濃度質控血清檢測結果顯示一步法最低檢測濃度為1IU/ml，而二步法為0.125IU/ml，其靈敏度顯著提升，從而有效提高HBsAg檢出率，與文獻[6,9-11]報道基本一致。

實踐證明ELISA一步法檢測HBsAg確因濃度過高或過低有“帶現象”，從而出現假陽性和假陰性而誤檢。因此，ELISA一步法檢測HBsAg時，臨床醫生與病人反映結果有誤時；通常解決方法是采用樣品稀釋后重新檢測；如果結果仍有懷疑，筆者一般采用另一種不同試劑進行檢測，采用ELISA二步法檢測試劑為首選。由此筆者認為解決抗原抗體過高引起“帶現象”而出現誤檢最簡便實用方法是用ELISA二步法復查。以盡量減少誤診提高檢測的陽性率，有利于臨床診斷和治療。

綜上所述，ELISA一步法雖有許多優點，但存在靈敏度相對較低及鉤狀效應，造成檢驗結果一定程度的不可靠，建議使用ELISA二步法，雖二步法操作時間長，但可以明顯提高檢出率，減少漏檢率，為臨床提供更加客觀準確的HBsAg檢測結果。

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R446.61,R512.6+2

B

1674-1129(2013)01-0096-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.01.042