p21和Survivin在胃癌組織中的表達及臨床意義

仰麗麗 文 劍

胃癌(gastric carcinoma)是指源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國，胃癌新發病例數和死亡率居惡性腫瘤的首位。近年來，大量研究已證實胃癌的發生、發展和預后是多基因改變的結果，因此研究胃癌相關基因及其蛋白改變不僅有助于了解胃癌的發病機制，而且也可發現在胃癌診斷和預后評估中有臨床意義的分子標記物。p21蛋白是目前已知的具有廣泛抑制激酶活性的細胞周期抑制蛋白，是細胞周期內具有雙重特征的通用抑制物，是CKI家族中的重要一員。Survivin是近來發現的腫瘤特異性的凋亡抑制因子，它不僅在各種腫瘤中發揮著重要作用，而且是影響腫瘤預后的重要因素之一。本研究采用免疫組化法檢測p21和Survivin在胃癌及癌旁組織中的表達，并分析它們與各臨床病理指標的相互關系，探討p21和Survivin蛋白表達在胃癌發生、發展、轉移及預后中的作用及相關性，從而為胃癌的預防、診斷、治療和預后判斷提供新的途徑。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2006年5月-2010年5月南京市第二醫院手術及內鏡下切除標本90例，分為2組。胃癌組50例，男性33例，女性17例，≥60歲32例，＜60歲18例，平均年齡67.82歲。所有胃癌患者術前均未接受放療和化療處理，臨床資料完整，其中高分化腺癌4例，中分化癌17例，低分化腺癌29例;根據國際抗癌聯盟(UICC)TNM分期標準進行臨床分期，Ⅰ期9例，Ⅱ期13例，Ⅲ期17例，Ⅳ期11例。正常對照組40例，男性27例，女性13例，平均年齡61.54歲。2組間性別和年齡具有可比性(P＞0.05)。

1.2 免疫組化方法

鼠抗人p21、鼠抗人Survivin單克隆抗體和SP試劑盒由美國Santa Cruz公司生產，將入選病例的原發灶病理蠟塊進行常規切片，制成4 μm厚的切片，0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液微波抗原修復，SP免疫組化染色。染色步驟嚴格按照說明書進行，DAB顯色，蘇木精復染細胞核，PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判定

p21主要表達于癌細胞胞核，Survivin主要表達于癌細胞胞質，呈棕黃色或棕褐色顆粒。采用染色指數法計算陽性結果，綜合考慮陽性細胞百分數和染色強度。陽性細胞數計分方法:0% ～5%為0分，≥6% ～25%為1分，≥26% ～50%為2分，≥51% ～75%為3分，≥76%為4分;染色強度計分方法:腫瘤細胞不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。如在同一病變中存在不同評分標準的視野，則取最大值和最小值的平均值作為評分結果。上述兩項之和即為該腫瘤細胞的染色指數評分，染色指數0～2分定義為陰性表達，3～7分定義為陽性表達。

1.4 統計學方法

應用SPSS 13.0軟件進行統計學分析。計數資料采用χ2檢驗;配對資料采用Spearman等級相關分析。P＜0.05表明差異有統計學意義。

2 結果

2.1 p21和Survivin蛋白的表達

免疫組織化學檢測結果顯示:胃癌組織中p21和Survivin 的陽性表達率分別為 46.0%(23/50)、56.0%(28/50)，正常對照組中p21和Survivin的陽性表達率分別為77.5%(31/40)、0%(0/40)，組間差異均有統計學意義(χ2=9.188，P=0.002;χ2=20.522，P=0.000)。

2.2 p21和Survivin表達與胃癌臨床病理特征的關系

在胃癌組織中，p21蛋白陽性表達率與分化程度、TNM分期及淋巴結轉移有關(P＜0.05)，與性別、年齡、浸潤深度無關(P＞0.05)。Survivin的陽性表達與分化程度、淋巴結轉移有關(P＜0.05)，但在不同性別、年齡、TNM分期中差異不顯著(P＞0.05)。見表1。

表1 p21、Survivin的陽性表達與胃癌臨床病理參數之間的關系

2.3 p21和Survivin在胃癌組織中表達的相關性

p21和Survivin在胃癌組織中的表達呈負相關，χ2=11.298，P=0.001，相關系數 γ =-0.475。見表2。

表2 p21和Survivin在胃癌組織中表達的相關性(例)

3 討論

抑癌基因p21是細胞周期負性調節因子，正常組織中均可檢測到p21蛋白表達，而腫瘤組織多為低表達或表達缺失［1］。p21蛋白是目前已知的具有廣泛抑制激酶活性的細胞周期抑制蛋白，是細胞周期內具有雙重特征的通用抑制物，是CKI家族中的重要一員。如果p21蛋白發生異常，則失去對細胞周期素、CKD及其復合物蛋白激酶活性的正常調節，影響細胞增殖與分化的調控，導致惡性腫瘤的發生。

本實驗發現在正常胃組織及胃癌中p21陽性表達率分別為77.5%與46.0%，隨著病變惡性程度的增高，p21陽性率逐漸下降，與文獻報道一致［2-3］。本實驗亦提示，高中分化胃癌p21表達率明顯高于低分化胃癌，隨著TNM分期的增高，分化程度降低及淋巴結轉移p21表達亦逐漸下降。提示p21蛋白低表達可能參與胃癌的發生和發展，可作為評估胃癌細胞惡性程度以及預后的指標之一。有研究顯示，p21基因轉染可以抑制人食管鱗癌細胞系EC109細胞增殖，并能誘導其發生細胞凋亡［4］。因此，p21既可以作為內源性分子標記，了解胃癌的發生發展的生物學特性，也可能成為胃癌基因治療的新靶點。

凋亡抑制基因Survivin的主要作用是抑制腫瘤細胞凋亡，除了具有抗凋亡作用外，還有促細胞增殖、促血管生成的作用，這可能同腫瘤具有侵襲性及轉移性有關［5］。研究發現Survivin除可在胚胎組織和正常胸腺組織中表達外，在正常成熟組織中幾乎不表達，但在多種腫瘤組織中高表達［6］。本實驗中胃癌組織中Survivin表達陽性，而正常組織中則無表達，也進一步印證了上述結果。本研究結果顯示，Survivin蛋白表達與胃癌患者的年齡、性別、病理分期無關(P＞0.05)，與分化程度及淋巴結轉移有關(P＜0.05)，考慮Survivin的異常表達導致胃癌細胞的凋亡抑制，同時Survivin通過抗凋亡保護腫瘤血管內皮細胞的生長增殖，造成腫瘤鄰近和遠處部位轉移灶形成。在胃癌組織中，Survivin蛋白的陽性表達率隨組織分化程度降低、局部淋巴結轉移出現而增高，提示Survivin蛋白的表達強度與腫瘤的惡性程度及發展趨勢明顯相關，可以作為預后不良的一項參考指標。

關于p21和Survivin在胃癌中表達的相互關系，目前鮮見報道。有研究顯示［7］，外源性p21的高表達可能會抑制HepG2細胞中Survivin的表達，而且該抑制機制可能與p21導致的G0/G1期阻滯有關。本研究結果顯示，在胃癌組織中p21和Survivin的表達呈高度負相關，我們推測p21可能通過下調Survivin的表達，促進胃癌發生、發展、侵襲和轉移。

綜上所述，對p21和Survivin研究的不斷深入，將對胃癌的預防、診斷、治療和預后判斷等都有積極的臨床意義，為制定更有效的基因治療方案提供有效的幫助。

［1］金建云，王海波.Cyclin D1、p21 WAF1在結直腸癌中的表達及其臨床意義〔J〕.山東醫藥，2011，51(49):609.

［2］Sun Y，Li JY，He JS，et al.Tissue microarray analysis of multiple gene expression in intestinal metaplasia，dysplasia and carcinoma of the stomach〔J〕.Histopathology，2005，46(5):505.

［3］楊蘭澤，高 靜，米建強，等.胃癌及癌前病變組織中幽門螺桿菌感染與p53、p21 WAF1、PCNA、cyclinA蛋白表達的相關性研究〔J〕.實用癌癥雜志，2007，22(2):129.

［4］張學彥，景德懷，劉志強，等.p21～(WAF1)基因對人食管鱗癌細胞增殖的抑制作用〔J〕.世界華人消化雜志，2009，17(14):1384.

［5］Sun DW，Chen Q.Expression of Survivin protein and its relationship with expression of PTEN protein in the precancerous lesions and early gastric cancer〔J〕.Pract J Cancer，2008，23(1):28.

［6］Cho GS，Ahn TS.Expression of the survivin-2B splice variant related to the progression of colorectal carcinoma〔J〕.J Korean Surg Soc，2011，80(6):404.

［7］熊 娟，李一榮，湯兆明，等.p21對肝癌細胞中survivin轉錄的影響及調控機制的探討〔J〕.中華腫瘤雜志，2008，30(8):583.