環(huán)境激素及其檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

馮敘橋 ， 肖 琳 ， 李 樂(lè) ， 孫炳新 ， 薛 強(qiáng) ， 鄒明強(qiáng)

（1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110866；2.渤海大學(xué) 食品科學(xué)研究院，遼寧省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 錦州 121013；3.中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院，北京100123；4.商務(wù)部流通產(chǎn)業(yè)促進(jìn)中心，北京 100070）

隨著工業(yè)的發(fā)展，以及藥品、塑料制品和除草劑等的廣泛使用，產(chǎn)生了大量環(huán)境激素，而這些激素正在影響著人們的生產(chǎn)生活和身體健康。環(huán)境激素能導(dǎo)致生物及人體的性激素分泌量及活性下降，生殖器官異常，引發(fā)癌癥，并且可以影響后代的健康。環(huán)境激素是繼臭氧層破壞、溫室效應(yīng)之后的又一全球性環(huán)境問(wèn)題，也是國(guó)際上環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域中的熱門(mén)研究課題。本文中主要介紹了環(huán)境激素分析的前處理方法及檢測(cè)手段等的研究進(jìn)展。

1 環(huán)境激素

早在20世紀(jì)30年代，就曾有學(xué)者提出有關(guān)雌激素效應(yīng)的報(bào)道。1977年，日本學(xué)者提出了“環(huán)境激素”這一名詞，但以上兩者都沒(méi)有引起人們的關(guān)注。隨后，在1991年，英、美、日等國(guó)先后召開(kāi)了有關(guān)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的科學(xué)研討會(huì)[1-2]。1995年，美國(guó)政府設(shè)立了由環(huán)保局（EPA）領(lǐng)導(dǎo)的內(nèi)分泌干擾物工作組，進(jìn)行環(huán)境內(nèi)分泌干擾物 （endocrine disrupting chemicals disruptors，EDCs/EDs）的研究[1，3]。 1996 年，美國(guó) 《波士頓環(huán)境》報(bào)的記者戴安·達(dá)瑪諾斯基（D.Dumanoski）在與另 2 人（T.Colborn 和 J.P.Myers）所著的《被奪去的未來(lái)》（Our Stolen Future）[4]一書(shū)中正式提出“環(huán)境激素”（Environmental Hormones）這個(gè)名詞，立即引起全球有識(shí)之士的重視。進(jìn)入21世紀(jì)之后，隨著人們生活水平的提高，人們更注重環(huán)境保護(hù)和身體健康，環(huán)境激素的危害理所當(dāng)然受到了更多的關(guān)注。

環(huán)境激素也稱環(huán)境荷爾蒙、環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，是指一類可以通過(guò)與雌激素受體結(jié)合或者干擾細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等方式模擬或部分模擬雌激素作用的化合物[5]，可分為天然雌激素、植物性和真菌性雌激素、人工合成的雌激素和環(huán)境化學(xué)污染物[5-6]。隨著人口數(shù)量的增長(zhǎng)和工業(yè)化的發(fā)展，大量的環(huán)境激素被釋放到環(huán)境中，而且其化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不易降解，能在環(huán)境中持久存在，可以通過(guò)食物鏈的富集作用進(jìn)入機(jī)體內(nèi)，從而在體內(nèi)長(zhǎng)期而緩慢地發(fā)揮作用。由于環(huán)境激素的種類較多，結(jié)構(gòu)上也存在著一定的差異，因此它們?cè)跈C(jī)體內(nèi)發(fā)揮的效應(yīng)也不同。其效應(yīng)與作用主要體現(xiàn)在以下3方面:一是拮抗和模仿內(nèi)源性激素；二是破壞機(jī)體內(nèi)正常內(nèi)源性激素的生成和代謝；三是可以破壞雌激素受體的生成、代謝等功能[7]。圖1為環(huán)境激素的作用機(jī)制及對(duì)機(jī)體的影響。環(huán)境激素對(duì)人類的影響主要是通過(guò)影響蛋白質(zhì)合成、編碼DNA及激素的合成來(lái)使人體生殖系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)變得異常。環(huán)境激素已經(jīng)成為繼臭氧層破壞、全球變暖后的第三大環(huán)境問(wèn)題，并被喻為威脅人類生存的定時(shí)炸彈[6]，所以對(duì)環(huán)境激素的檢測(cè)尤為重要。

2 環(huán)境激素的檢測(cè)

2.1 環(huán)境激素檢測(cè)的前處理方法

目前，環(huán)境激素主要利用儀器分析方法進(jìn)行檢測(cè)，故需要對(duì)樣品進(jìn)行前處理。常規(guī)的前處理方法有索氏提取法和液液萃取法，而固相萃取、固相微萃取等新方法正以其省時(shí)省力、回收率高等優(yōu)點(diǎn)逐步發(fā)展起來(lái)并受到關(guān)注[8]。

圖1 環(huán)境激素作用機(jī)制及影響Fig.1 Mechanism and effect of evironmental hormone

2.1.1 索氏提取法 索氏提取法（Soxhlet）主要針對(duì)固體、半固體樣品進(jìn)行前處理，是一種液固萃取方法。該方法是利用在沸騰時(shí)冷凝下來(lái)的萃取溶劑對(duì)被萃取樣品進(jìn)行反復(fù)萃取，從而使萃取溶劑的用量大大減少，比傳統(tǒng)的液固萃取節(jié)省溶劑。楊偉球[9]等在測(cè)土壤中六六六殘留時(shí)用索氏提取法加標(biāo)回收率可達(dá)93%～124%。該方法可提取的樣品量大，回收率高，但提取物的干擾組分較多，需要進(jìn)一步純化，且提取時(shí)間長(zhǎng)、操作步驟繁瑣[10]。

2.1.2 液液萃取法 液液萃取法 （Liquid-liquid Extraction，LLE）主要針對(duì)液體樣品進(jìn)行前處理。液液萃取是利用兩種不相溶的液相之間物化性質(zhì)的差異來(lái)進(jìn)行物質(zhì)的差別分配，從而使溶質(zhì)從一相轉(zhuǎn)移至另外一相[11]。孫玉梅等[12]測(cè)地下水中半揮發(fā)性有機(jī)物時(shí)液液萃取法的加標(biāo)回收率普遍低于65%。該方法雖然操作簡(jiǎn)便，但在操作過(guò)程中需要大量的有機(jī)溶劑且樣品易乳化，對(duì)環(huán)境的污染較大，且回收率很低[13]。

2.1.3 固相萃取法 固相萃取 （Solid Phase Extraction，SPE）產(chǎn)生于20世紀(jì)70年代后期，是由液-固萃取和液相色譜技術(shù)相結(jié)合而發(fā)展起來(lái)的一種樣品前處理方法。圖2為SPE柱的基本結(jié)構(gòu)。圖3為固相萃取基本原理，它是利用固體吸附劑吸附液體樣品中的目標(biāo)化合物，使之與樣品的基體和干擾物分離，再通過(guò)洗脫液洗脫或加熱解吸附，達(dá)到分離和富集目標(biāo)物的目的[14]。雖然SPE的操作步驟稍為繁瑣，但隨著自動(dòng)化儀器的應(yīng)用，可以實(shí)現(xiàn)幾十個(gè)樣品同時(shí)處理，自動(dòng)加液，全部實(shí)現(xiàn)計(jì)算機(jī)操作。目前，SPE技術(shù)在環(huán)境分析、食品分析及藥物分析中的應(yīng)用比較廣泛。戴樹(shù)桂[15]等采用C18固相萃取柱，系統(tǒng)地研究了環(huán)境水樣中鄰苯二甲酸酯類化合物的固相萃取預(yù)富集方法，回收率在96.5%～120%之間。Surong Mei[16]等采用分子印跡固相萃?。∕olecular imprinted solid phase extraction，MISPE）技術(shù)檢測(cè)痕量雙酚A，在最優(yōu)條件下，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于5.8%，不同樣品的回收率在71.2%～86.23%之間。SPE技術(shù)克服了液-液萃取易乳化、相對(duì)分離慢等缺點(diǎn)，并且具有有機(jī)溶劑消耗少、環(huán)境污染小、富集倍數(shù)高[17]等優(yōu)點(diǎn)，符合綠色化學(xué)要求。

圖2 SPE柱Fig.2 SPE column

圖3 固相萃取的基本步驟Fig.3 Basic SPE procedures

2.1.4 固相微萃取法 固相微萃取 （solid-phase microextraction，SPME）技術(shù)是 1989年由加拿大Waterloo大學(xué)Pawliszyn教授的研究小組以固相萃取為基礎(chǔ)研發(fā)出的一種非溶劑萃取方法[14，18]。固相萃取裝置由萃取頭和手柄組成，核心部分是萃取頭的涂層部分，涂層的厚度和種類在很大程度上決定了方法的靈敏度和選擇性。該方法通過(guò)涂層對(duì)樣品中的有機(jī)成分進(jìn)行萃取、富集，再通過(guò)氣相色譜的進(jìn)樣器直接將其熱解吸，使樣品前處理的過(guò)程極大地簡(jiǎn)化，提高了工作效率。圖4即為固相微萃取裝置。SPME有3種基本的萃取模式:直接萃?。―irect Ectraction SPME）、 頂 空 萃 取 （Headspace SPME）和膜保護(hù)萃取（membrane-protected SPME）。直接萃取主要用于干凈基體的液體樣品和氣態(tài)樣品，是將纖維頭直接插入液體樣品或直接暴露在空氣中，使樣品被吸附在涂層上從而實(shí)現(xiàn)樣品的萃取過(guò)程。頂空取樣適用于易揮發(fā)及半揮發(fā)的物質(zhì)。而膜保護(hù)SPME的主要目的是為了在分析很臟的樣品時(shí)保護(hù)萃取固定相，避免其受到損傷，與頂空萃取SPME相比，該方法對(duì)難揮發(fā)性物質(zhì)組分的萃取富集更為有利。另外，由特殊材料制成的保護(hù)膜對(duì)萃取過(guò)程提供了一定的選擇性。該項(xiàng)技術(shù)易于自動(dòng)化并且可以與其他技術(shù)如液相色譜、氣相色譜、傅里葉變換紅外光譜（FTIR）、電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（ICP-MS）等在線聯(lián)用。王超英[19]等采用固相微萃取/高效液相色譜聯(lián)用分析水樣中鄰苯二甲酸酯，回收率可達(dá)到82%～128%。SPME法并不是將待測(cè)物全部分離出來(lái)，而是通過(guò)樣品與固相涂層之間的平衡來(lái)達(dá)到分離目的。該技術(shù)自20世紀(jì)90年代問(wèn)世至今，以其用量少、操作方便快速，集采樣、萃取、濃縮和進(jìn)樣為一體等優(yōu)點(diǎn)得到廣泛關(guān)注。

圖4 固相微萃取裝置Fig.4 Basic SPME device

2.1.5 超臨界流體萃取法 超臨界流體萃取（Supercritical Fluid Extraction，SFE） 是利用處于超臨界狀態(tài)的流體為萃取劑，對(duì)液體或固體樣品中待測(cè)組分進(jìn)行萃取的方法。該方法是在較低溫度下，不斷增加氣體的壓力時(shí)，氣體會(huì)轉(zhuǎn)化成液體。當(dāng)溫度增高時(shí)，液體的體積增大。對(duì)于某一特定的物質(zhì)而言總存在一個(gè)臨界溫度和臨界壓力，高于臨界溫度和臨界壓力后，物質(zhì)不會(huì)成為液體或氣體，這一點(diǎn)就是臨界點(diǎn)。在臨界點(diǎn)以上的范圍內(nèi)，物質(zhì)狀態(tài)處于氣體和液體之間，這個(gè)范圍之內(nèi)的流體稱為超臨界流體（Supercritical Fluid，SCF）。 超臨界流體具有類似氣體的較強(qiáng)穿透力和類似于液體的較大密度和溶解度，具有良好的溶劑特性，可作為溶劑進(jìn)行萃取、分離單體。圖5為超臨界流體萃取結(jié)構(gòu)與流程圖:由鋼瓶提供高純度液體CO2經(jīng)高壓泵系統(tǒng)流入保持在一定溫度（高于臨界溫度TC）的萃取池中。在萃取池中可溶于SCF的溶質(zhì)擴(kuò)散分配溶解在SCF中，并隨SCF一起流出萃取池，經(jīng)阻尼器減壓獲升溫后進(jìn)入收集器，多余的SCF排空或循環(huán)使用。崔兆杰[20]等采用超臨界流體萃取測(cè)定環(huán)境中多環(huán)芳烴，利用正交試驗(yàn)選擇最佳萃取條件，回收率都在95%以上。

圖5 超臨界流體萃取流程Fig.5 Basic SFE flow chart

2.1.6 加速溶劑萃取法 加速溶劑萃取（Accelerated Solvent Extraction，ASE）最早是由超臨界流體萃取發(fā)展而來(lái)，在SFE（超臨界流體萃取）的萃取二氧化碳中加入有機(jī)溶劑（如甲醇、二氯甲烷、甲烷等）可以提高萃取的回收率。它是使用有機(jī)溶劑或混合有機(jī)溶劑通過(guò)提高壓力和溫度的方法從固體基質(zhì)中萃取有機(jī)污染物的一種方法。提高溫度能極大地減弱由范德華力、氫鍵、目標(biāo)物分子和樣品基質(zhì)活性位置的偶極吸引所引起的相互作用力，提高萃取池中的壓力使溶劑沸點(diǎn)高于其常壓下的沸點(diǎn)，有助于在提高的溫度下仍保持溶劑為液態(tài)。另外，高壓力下，溶劑會(huì)迅速加到萃取池和收集瓶中，這樣就能提高溶劑萃取率。該方法的優(yōu)點(diǎn)是有機(jī)溶劑用量少、快速、基質(zhì)影響小、回收率高和重現(xiàn)性好。圖6為ASE的流程圖。溶劑通過(guò)泵進(jìn)入萃取池中，通過(guò)加熱加壓提高萃取效率。王本偉等[21]采用ASE萃取技術(shù)，并結(jié)合HPLC-TOF/MS（高效液相色譜法-飛行時(shí)間質(zhì)譜法），可以同時(shí)測(cè)定6種甾體皂苷類成分的含量，并且分析速度快、靈敏度高，回收率可達(dá)97.9%～103.1%。

圖6 加速溶劑萃取流程Fig.6 Basic ASE flow chart

2.1.7 微波萃取法 微波萃取法（microwave extraction，ME）是利用微波能加熱，從而提高萃取效率的技術(shù)。其原理是在微波場(chǎng)中，微波對(duì)介電性質(zhì)不同的物質(zhì)有選擇性加熱的特點(diǎn)，通過(guò)吸收微波能力的差異，使得基體物質(zhì)的某些區(qū)域或萃取體系中的某些組分被選擇性加熱，從而使得被萃取物質(zhì)從基質(zhì)或體系中分離，進(jìn)入到介電常數(shù)較小、微波吸收能力相對(duì)差的萃取劑中。圖7為微波萃取的基本步驟。該方法主要用于處理固體樣品。其優(yōu)點(diǎn)是耗時(shí)少，溶劑用量少而萃取率高。Hirsawa[22]和陳莎[23]等分別用微波萃取技術(shù)萃取海洋沉淀物和土壤中的鄰苯二甲酸酯，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了微波萃取的條件，萃取時(shí)間僅為幾分鐘，回收率可達(dá)到60%～120%。說(shuō)明此方法萃取時(shí)間短，效率高，可以在環(huán)境分析等領(lǐng)域應(yīng)用。

圖7 微波萃取基本步驟Fig.7 Basic ME procedures

2.2 環(huán)境激素的檢測(cè)方法

目前對(duì)于環(huán)境激素的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法 （GC）、液相色譜法（LC）、液-質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS）、毛細(xì)管電泳檢測(cè)（CE）和酶聯(lián)免疫法（ELISA）等。

2.2.1 氣相色譜（GC）及氣-質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS）檢測(cè)環(huán)境激素 GC法由于其選擇性高、分離效率高、速度快等特點(diǎn)，在檢測(cè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。GC法是一種適用于分離和分析在所有色譜系統(tǒng)中有相當(dāng)高揮發(fā)性物質(zhì)的方法，因此對(duì)揮發(fā)性太低的化合物不能用氣相色譜法。低揮發(fā)性化合物需要通過(guò)硅烷化、酯化、酰化、鹵化等衍生化方法變成其衍生物來(lái)應(yīng)用，這樣使其技術(shù)變得復(fù)雜，影響了應(yīng)用。而GC-MS（氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用）不僅可以分離組分復(fù)雜的痕量有機(jī)物，還可以增強(qiáng)質(zhì)譜鑒定能力，因此應(yīng)用廣泛。黃斌[24]等在對(duì)水中4種類固醇類環(huán)境內(nèi)分分泌干擾物雌酮（E1）、17β-雌二醇（E2）、17α-乙炔基雌二醇（EE2）、雌三醇（E3）測(cè)定時(shí)采用固相萃取-衍生化-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)比衍生劑N，O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）和N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺（MSTFA）的衍生條件及效果，并將BSTFA在不加熱，不加催化劑的條件下常溫反應(yīng)10 min，結(jié)果不同質(zhì)量濃度水平（5，50，300 ng/L）加標(biāo)平均回收率為 83.8%～94.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差3.2%～9.1%。Saravanabhavan G[25]等用氣相色譜（電子捕獲檢測(cè)器）-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC（iontrap）-MS/MS）測(cè)定自然與合成的海洋污染內(nèi)分泌干擾物，此方法的目標(biāo)分析物為貝類，檢出限在0.1～1.0 ng/g之間，水樣的檢出限在0.5～1.2 ng/L之間，說(shuō)明此方法在痕量檢測(cè)中是可行的。

2.2.2 高效液相色譜法（HPLC）檢測(cè)環(huán)境激素 HPLC出現(xiàn)在20世紀(jì)70年代，是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的有關(guān)理論和技術(shù)而發(fā)展起來(lái)的一種現(xiàn)代分離分析技術(shù)。它是以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，因其分離效率高，分析速度快被廣泛應(yīng)用[26]。江潔[27]等采用HPLC法測(cè)定水產(chǎn)品中多種激素殘留，結(jié)果證明此方法能同時(shí)定量檢測(cè)6種激素，在0.1～10 μg/mL范圍內(nèi)，這 6種激素呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。通過(guò)回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的評(píng)價(jià)，此方法對(duì)雌二醇、睪酮、甲基睪酮及孕酮的測(cè)定準(zhǔn)確性可靠，回收率大于70%，可以應(yīng)用于實(shí)際檢測(cè)。Yeomin Yoon[28]等采用 HPLC檢測(cè)雙酚 A，17βestradiol，17α-ethynyl，結(jié)果表明，在生的飲用水中這幾種物質(zhì)的回收率高于90%。

在HPLC基礎(chǔ)上發(fā)展的RP-HPLC（反相高效液相色譜）是指固定相顆粒表面為非極性材料（如含C18鏈）、流動(dòng)相為極性的一種高效層析。通過(guò)這類反相層析柱的分子按其極性大小移動(dòng)，極性越大移動(dòng)越快。Shu-ying Han[29]等通過(guò)RP-HPLC檢測(cè)DTT相關(guān)的物質(zhì)，以甲醇-水為流動(dòng)相，通過(guò)雙點(diǎn)保留時(shí)間來(lái)校正色譜保留時(shí)間，結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）達(dá)到0.156，說(shuō)明用此方法檢測(cè)環(huán)境激素是可行的。

2.2.3 LC-MS法檢測(cè)環(huán)境激素 GC-MS衍生過(guò)程繁瑣，而LC-MS（液-質(zhì)聯(lián)用）法不需對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行衍生處理，操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，選擇性與特異性較好[30-31]，廣泛應(yīng)用于檢測(cè)動(dòng)物源性食品中類固醇激素殘留。它以LC作為分離系統(tǒng)，MS為檢測(cè)系統(tǒng)。樣品在質(zhì)譜部分和流動(dòng)相分離，被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開(kāi)，經(jīng)檢測(cè)器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢(shì)的互補(bǔ)，將色譜對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對(duì)分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來(lái)，在藥物分析、食品分析和環(huán)境分析等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。目前，該方法已被定為檢測(cè)環(huán)境激素的標(biāo)準(zhǔn)方法[32]。牛晉陽(yáng)等[33]等采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）測(cè)定豬肉中10種類固醇激素殘留，樣品經(jīng)甲醇提取、固相萃取柱凈化后再檢測(cè)，結(jié)果表明，這些激素物質(zhì)線性范圍為 0.5～100 μg/kg，低、中、高 3 種加標(biāo)水平的加標(biāo)回收率為71%～89%，最低檢出限0.2～2 μg/kg。Trevor M Penning[34]等采用LC-MS檢測(cè)類固醇激素，可測(cè)得5～2 000 pg/mL之間的類固醇激素，說(shuō)明此法可以足夠有效地檢測(cè)類固醇激素。

2.2.4 毛細(xì)管電泳檢測(cè) 毛細(xì)管電泳（capillary electrophoresis，CE）技術(shù) 1981 年創(chuàng)立，由 Jorgenson和Lukacs首先提出在75 μm內(nèi)徑毛細(xì)管柱內(nèi)用高電壓進(jìn)行分離，開(kāi)創(chuàng)立了現(xiàn)代毛細(xì)管電泳檢測(cè)[35]。它是以高壓直流電池為驅(qū)動(dòng)力，根據(jù)樣品中各組分間遷移速率的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一種分離技術(shù)。吳美劍[36]等采用CE快速分離8種農(nóng)藥類環(huán)境內(nèi)分泌干擾物，各組分在5 mim內(nèi)獲得完全分離，遷移時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.1%～2.1%之間。肖全偉[37]等采用非水毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光法測(cè)定食品包裝材料樣品浸出物中的雙酚A、烷基酚等環(huán)境激素，經(jīng)衍生劑DIB-CI衍生后，經(jīng)非水毛細(xì)管電泳分離后，分別與過(guò)氧草酸酯化學(xué)發(fā)光反應(yīng)體系作用，光信號(hào)經(jīng)過(guò)光電倍增管接收放大后被檢測(cè)。相對(duì)遷移時(shí)間和相對(duì)峰高的 RSD分別為 0.88%～2.96%和 6.54%～8.57%，加標(biāo)回收率為86.7%～98.8%。此方法簡(jiǎn)便，快捷，靈敏，適合檢測(cè)。

2.2.5 ELISA檢測(cè) ELISA是通過(guò)抗原與抗體的特異性結(jié)合來(lái)定性定量的一種檢測(cè)技術(shù)，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速、可同時(shí)檢測(cè)大量樣品、并且價(jià)格低廉等特點(diǎn)。ELISA的關(guān)鍵是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記，結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上，此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。在環(huán)境激素的檢測(cè)中，ELISA方法已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。馬德章等[38]建立以3α-HSD測(cè)定總甾體激素含量的雙抗夾心ELISA法，檢測(cè)限為0.5～600 μg/g，由于總甾體激素與3α-HSD酶表達(dá)量具有明顯的線性關(guān)系，故可通過(guò)此對(duì)多種水資源、飼料、肉等食品進(jìn)行檢測(cè)。

3 結(jié)語(yǔ)

環(huán)境激素種類繁多，對(duì)機(jī)體的危害也不盡相同。伴隨著工農(nóng)業(yè)的發(fā)展，環(huán)境激素問(wèn)題也將趨烈。目前，環(huán)境激素雖然已經(jīng)引起我國(guó)有關(guān)部門(mén)的關(guān)注，但對(duì)環(huán)境激素的研究尚屬起步階段，關(guān)于環(huán)境激素問(wèn)題對(duì)我國(guó)各方面影響的全面評(píng)價(jià)及其發(fā)展判斷還不是十分清楚。為了環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展和人類的健康，加強(qiáng)對(duì)環(huán)境激素的研究勢(shì)在必行，而環(huán)境激素的檢測(cè)是環(huán)境激素各項(xiàng)研究的基礎(chǔ)?，F(xiàn)階段對(duì)環(huán)境激素的檢測(cè)方法有很多，但都存在一定的不足。目前對(duì)于環(huán)境激素的檢測(cè)，主要以價(jià)格昂貴、步驟復(fù)雜的儀器分析方法為主，而這些方法不適宜大量全面推廣。因此，對(duì)于像環(huán)境激素這些痕量物質(zhì)的檢測(cè)方法，需要進(jìn)一步發(fā)展。建立前處理更加優(yōu)化、檢測(cè)更加靈敏快速的檢測(cè)方法，顯得尤為重要。

目前的環(huán)境激素的前處理方法由索氏提取法、液液萃取法發(fā)展到固相萃取、固相微萃取，逐步減少了樣品量，縮短了處理時(shí)間，提高了工作效率。在未來(lái)的環(huán)境激素檢測(cè)前處理中，需要更多可以同時(shí)進(jìn)行多組分檢測(cè)，滿足檢測(cè)時(shí)間短、操作方便、價(jià)格低廉的新技術(shù)，以保證對(duì)環(huán)境監(jiān)測(cè)快速、準(zhǔn)確、及時(shí)、方便的要求。前處理技術(shù)的發(fā)展是環(huán)境激素檢測(cè)的基礎(chǔ)，必須引起相關(guān)部門(mén)的足夠重視。

目前的環(huán)境激素化學(xué)分析方法具有儀器價(jià)格高、不易攜帶、操作繁瑣、不宜全面推廣等方面的缺點(diǎn)。因此，開(kāi)發(fā)研究一些新型方法在環(huán)境激素檢測(cè)上的應(yīng)用，十分必要。生物檢測(cè)方法如ELISA等，具有快速、高通量、高靈敏度、適宜現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，將其越來(lái)越多地應(yīng)用于環(huán)境激素現(xiàn)場(chǎng)快速檢驗(yàn)等方面，意義重大。此外，將熒光標(biāo)記物、量子點(diǎn)等應(yīng)用于環(huán)境激素檢測(cè)中，將有效提高檢測(cè)靈敏度、擴(kuò)大檢測(cè)范圍。這也是在將來(lái)環(huán)境激素及其檢測(cè)方法的研究中，值得關(guān)注的方面。

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