五味子多組分含量測定方法研究

摘要：目的：建立五味子中的五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，C18色譜柱，以乙腈-水系統梯度洗脫，檢測波長210 nm，柱溫35 ℃，流速1 mL/min。結果：五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素分別在0.234～1.172 ug（r=0.99974）、0.255～1.276 ug（r=0.99996）、0.280～1.400 ug（r=0.99996）的范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

關鍵詞：五味子 五味子甲素 五味子乙素 五味子醇甲 含量測定

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2013）01（b）-0-01

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinens（Turcz.）Baill.的干燥成熟果實。具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心的功效。用于久嗽虛喘、夢遺滑精、遺尿尿頻、久瀉不止、自汗盜汗、津傷口渴、內熱消渴、心悸失眠等癥[1]。

五味子在《神農本草經》中列為上品，應用廣泛。在2010版藥典一部[2]中僅對五味子醇甲進行高效液相測定，只通過單一成分含量測定來控制藥材的質量已經明顯不能滿足要求，為進一步控制藥材質量，特采用HPLC法測定五味子中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量，方法準確、快速、重現性好。

1 儀器與試藥

島津2010A液相色譜儀；電子天平（賽多利斯BP211D）；電子天平（賽多利斯AE200）；KT-300Y超聲波藥品處理機。

五味子甲素（批號110764-200107）；五味子乙素（批號110765-200205）；五味子醇甲（批號110857-200507）。均來自中國藥品生物制品檢定所。

乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Thermo C18-2 HYPERSIL柱250 mm×4.6 mm，5 um；流動相：0～8 min，乙腈-水體積比10∶90；8～50 min，乙腈-水體積比47∶53；50～60 min，乙腈-水體積比60∶40；60～80 min，乙腈-水體積比100∶0。檢測波長210 nm；柱溫35 ℃；流速1 ml/min；進樣量10 ul；分析時間為85 min。

2.2 樣品溶液制備

稱取五味子藥材粉末約0.5 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲處理30 min，取出，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 對照品溶液制備

精密稱取五味子醇甲2.93 mg、五味子甲素3.19 mg、五味子乙素3.50 mg，置于25 ml容量瓶中，加甲醇20 ml，超聲10分鐘，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成混合對照品溶液。

2.4 方法學考察

2.4.1 標準曲線制備：

取對照品溶液，分別進樣2 uL、4 uL、6 uL、8 uL、10 uL，以峰面積為縱坐標Y，進樣量為橫坐標X，做回歸得標準曲線，結果表明五味子醇甲在進樣量0.234～1.172 ug范圍內，Y=1.41404×10-7X

+0.0347486，r=0.99974；五味子甲素在進樣量0.255～1.276 ug范圍內，Y=1.4857×10-7X-0.018932，=0.99996；五味子乙素在進樣量0.280～1.400ug范圍內，Y=1.58044×10-7X-0.00864332，r=0.99996。

2.4.2 精密度試驗

精密量取對照品溶液10 uL，注入液相色譜儀，重復測定5次，測定五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的峰面積積分值，RSD分別為0.49%、1.51%、0.55%。

2.4.3 穩定性試驗

取同一供試品溶液，在同樣條件下分別間隔0、4、8、12、16、24 h6個不同時間點吸取10 ul注入液相色譜儀，記錄峰面積，RSD范圍為0.77%、1.45%、0.86%。說明供試品溶液在24 h內比較穩定。

2.4.4 重現性試驗

取同一批樣品，按供試品溶液制備方法處理，所得溶液注入液相色譜儀，測定五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的峰面積積分值，RSD分別為0.27%、0.29%、0.66%。

2.5 含量測定

精密稱取三批五味子藥材，按供試品溶液制備方法處理，用標準曲線法測得各組分含量，結果見下表：

3 討論

（1）本實驗考察了甲醇-水、甲醇-0.05%磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-0.05%磷酸溶液四種流動相，最后確定了乙腈-水梯度洗脫，整體分離效果較好，保留時間適中，且基線較為平穩；本分別對210 nm、230 nm、240 nm、250 nm、254 nm、260 nm6個波長進行了考察，結果表明，210 nm波長下的色譜峰的數目、峰形和響應值均較好，整體色譜分離效果較好。

（2）通過本實驗建立五味子中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素含量測定方法，可用于五味子含量測定分析，為五味子制劑的質量控制提供參考。

4 結語

本法準確、靈敏度高、重現性好，可用于五味子多組分含量測定。

參考文獻

[1]明延波，趙華，周麗，等.五味子的研究進展[J].實用藥物與臨床，2007，10（6）：365-367.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：61-62.