水中總大腸菌群檢測方法

摘 要：目的 本文對我站目前使用的酶底物法與過去使用的傳統方法多管發酵法進行對比，分析兩種方法的優缺點。結果 酶底物法與多管發酵法檢測結果具有一致性。結論 酶底物法具備特異性和敏感性的同時更省時省力。

關鍵詞：總大腸菌群；檢測方法；比較

[中圖分類號]：R378.2+1 [文獻標識碼]：A

[文章編號]：1002-2139（2013）-5--01

總大腸菌群是指一群需氧及兼性厭氧、在37℃生長時能使乳糖發酵、在24小時內產酸產氣的革蘭陰性無芽胞桿菌。是衛生監測中用以指示飲用水衛生狀況及安全的指示性微生物1，因此水中檢測總大腸菌群的方法必須具備特異、敏感性，同時還要省時省力并且低成本。

1、方法原理

1.1 酶底物法方法原理

酶底物法（enzyme substrate technique）利用大腸菌群β-半乳糖苷酶及大腸桿菌β-葡萄糖醛酸酶代謝的兩種營養劑─指示劑：鄰硝基苯-β-D-半乳派喃糖（ONPG）及甲基香豆基葡糖醛酸苷（MUG），作為 Colilert 試劑的主要碳源。①利用大腸菌群細菌能產生β-半乳糖苷酶分解ONPG使培養液呈黃色，檢測 大腸菌群 。②利用大腸埃希氏菌產生β-葡萄糖醛酸酶分解MUG使培養液在波長366nm紫外光下產生藍色熒光，檢測大腸埃希氏菌。③改變培養溫度，可檢測耐熱大腸菌群，因為大多數非─大腸桿菌屬菌類沒有這些酶，所以無法在 Colilert 試劑里生長及干涉這些物質。而有這些酶的少數非─大腸桿菌屬菌類會受到 Colilert 特殊配方的基質選擇性的抑制作用。

1.2 多管發酵法方法原理

多管發酵是根據大腸菌群細菌能發酵乳糖，產酸產氣以及具備革蘭氏染色陰性、無芽孢、呈桿狀等有關特性，通過培養、計數來檢測。

2、儀器設備及方法

2.1 酶底物法

2.1.1 儀器設備 ①程控定量封口機 ②酶底物24小時 Colilert試劑（愛德士公司提供） ③51孔定量盤（無菌）；97 孔定量盤（無菌） ④陽性51孔和97孔標準比色盤 ⑤100mL含硫代硫酸鈉無菌取樣瓶。

2.1.2 方法 取100mL水樣（污水處理廠出口）加入酶底物試劑1支混勻，使用封口機將水樣均勻分布于97孔定量盤每一小格，于36±1℃培養24h，觀察結果。結果判定：可見光下水樣變黃孔數，經查表《97孔定量盤法不同陽性結果的最可能數MPN及95%可信范圍》，報告檢出總大腸菌群。 取100mL水樣（地下水）加入酶底物試劑1支混勻，轉入97孔定量盤封口后，于36±1℃培養24h，觀察結果。結果判定：可見光下計數51孔定量盤內沒有黃色孔數，再查表《51孔定量盤法不同陽性結果的最可能數MPN及95%可信范圍》報告檢出大腸菌群<1（個/ml）。

2.2 多管發酵法

見《水與廢水監測方法》第四版增補版。

3、水樣檢測結果

使用兩種方法對鄂爾多斯市東勝區6個月的地下水與污水處理廠污水進行比較，經統計發現酶底物法與多管發酵法監測結果沒有統計學上的差別。

4、討論

通過以上實驗表明，酶底物法與多管發酵法相比從結果一致性和假陽性率方面無統計學意義是哪個的顯著差異2。酶底物法的優點：①具有更好的特異性，根據所檢測的酶類的不同，可以分辨出大腸菌群的群、屬、種。②實驗條件沒有要求在無菌條件下。③反應更加快速，省時省力。缺點是試劑花費較高。

多管發酵法是傳統檢測細菌的方法，優點是不需要昂貴的設備。缺點是耗時費力，實驗需要無菌條件，屬于半定量實驗，有時會低估水樣中大腸菌群的數目甚至漏檢3。

參考文獻：

1、趙金鎖.大腸菌群評價飲用水衛生安全的探討.浙江預防醫學，2009，21（8）.

2、孫宗科等，水中大腸菌群快速檢測方法-酶底物法與多管發酵法的比較，衛生研究，2006，35（4）497

3、劉京梅等，飲用水中大腸菌群檢測技術的研究發展，國外醫學衛生學分冊，2006，33（2）.