小麥TaLTR基因的克隆及初步表達分析

摘要：以小麥山融3號為試驗材料，克隆了TaLTR cDNA序列（Low temperature-responsive RNA-binding protein）。序列分析表明，TaLTR序列包含完整的ORF區，編碼蛋白含有162個氨基酸，其氨基端包含一個RRM（RNA recognition domain）超家族保守的結構域，羧基端則富含甘氨酸；經半定量RT-PCR分析，表明TaLTR參與低溫、干旱、鹽脅迫逆境反應。

關鍵詞：小麥；TaLTR基因；RT-PCR；逆境脅迫

中圖分類號：Q785文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2013）01-0025-05

小麥是約35%世界人口的主要糧食，其種植面積約占谷類作物種植總面積的三分之一。低溫、干旱是影響小麥生產的主要非生物脅迫因子，研究小麥對干旱、低溫等脅迫的響應機制，發掘逆境應答相關蛋白基因，對于研究小麥抗逆分子機制及增強抗逆性具有重要的理論和實踐意義。

非生物逆境脅迫下，涉及離子轉運與平衡、細胞生長和分裂、細胞防御和解毒、能量產生與運輸以及滲透調節等生理代謝的大量基因的表達都會發生變化[1]。為此，山東大學夏光敏實驗室利用SSH、基因芯片及雙向電泳-質譜分析等方法，對耐鹽抗旱小麥新品種山融3號鹽或干旱脅迫前后的表達譜進行了分析，獲得了大量表達模式發生變化的基因或ESTs信息[2～4]。本研究從山融3號鹽脅迫前后的表達譜芯片結果中選取1個表達變化的EST（EST ID：WL403），對其進行了基因克隆、初步表達分析。

1材料與方法

11實驗材料

111材料小麥（Triticum aestivum L）品種山融3號，由山東大學夏光敏實驗室提供；菌株：大腸桿菌（Escherichia coil） DH5α（北京全式金生物技術有限公司）。

112試劑Trizol為Invitrogen公司產品；常用內切酶、RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit為Fermentas公司產品；Taq酶使用寶生物工程（大連）有限公司產品Mighty Amp DNA Polymerase （hot start）；pEASY-T3載體為北京全式金生物技術有限公司產品。……