單子葉植物表達載體pUN3300的構建

摘要：植物雙元表達載體在植物基因工程研究中具有重要作用，表達載體所包含的結構元件，如啟動子、多克隆位點、篩選標記等，對植物遺傳轉化效率、外源基因表達強度及遺傳穩定性等具有重要影響。本研究中，為提高目的基因對單子葉植物的遺傳轉化效率，對植物表達載體pCAMBIA3300進行改造，在原有以bar基因作為選擇標記的基礎上，采用不完全酶切的方法添加了Ubiquitin啟動子，經酶切、測序表明，植物雙元表達載體pUN3300構建成功。該載體對于研究外源基因功能、植物性狀改良及新品種的培育，具有重要的價值。

關鍵詞：單子葉植物；表達載體；pUN3300；Ubiquitin啟動子；bar基因

中圖分類號：Q781文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2013）01-0034-04

植物雙元表達載體是植物基因工程研究的重要組成部分。通過植物表達載體，外源目的基因可進入宿主細胞并高效表達，為闡明基因功能、利用基因資源改良作物種質奠定了基礎[1～3]。獲得穩定、高效的植物雙元表達載體是進行遺傳轉化研究的重要內容之一。目前，雖已有pBR121、pCAMBIA等系列的商業化表達載體出售，但并不能完全滿足實驗需求，因此，必須根據實際需要對表達載體進行改造。表達載體上攜帶的抗性標記基因是篩選轉化體的有效手段，但同時也帶來了生態環境及食品安全方面的潛在隱患，影響了大眾對轉基因植物的接受。而以除草劑抗性bar 基因作為篩選標記，具有一定的生物安全性，客觀上可消除人們的顧慮[4]。因此本研究中，選取以bar 基因為篩選標記……