流式細(xì)胞儀檢測(cè)微波療法對(duì)基底細(xì)胞癌患者的T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的影響

[摘要]目的：研究微波療法對(duì)基底細(xì)胞癌患者的細(xì)胞免疫功能的影響。方法：用流式細(xì)胞儀檢測(cè)32例基底細(xì)胞癌患者微波治療前后外周血T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞。結(jié)果：基底細(xì)胞癌患者CD3、CD4細(xì)胞下降，CD8細(xì)胞增高，NK細(xì)胞降低，與對(duì)照組相比差異均有顯著性；微波治療后基底細(xì)胞癌患者CD4細(xì)胞上升，CD8細(xì)胞降低，NK細(xì)胞增多，與治療前相比差異均有顯著性。結(jié)論：基底細(xì)胞癌患者存在細(xì)胞免疫功能缺陷；微波療法能提高基底細(xì)胞癌患者的細(xì)胞免疫功能。

[關(guān)鍵詞]基底細(xì)胞癌；T淋巴細(xì)胞亞群；NK細(xì)胞；流式細(xì)胞儀；微波治療

[中圖分類(lèi)號(hào)]Q813.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2013）01-0075-02

Detection of the influence of T-cell subpopulation and Natural killer cells activity of microwave treatment for patients with basal cell carcinoma by flow cytometry

ZHANG Yuan，ZHONG Yi-ping，SUN Le-dong

（Department of Dermatology，Zhujiang Hospital，Southern Medical University，Guangzhou 510515，Guangdong，China）

Abstract： Objective To study the influence of the cellular immune function on The microwave therapy for patients with basal cell carcinoma（BCC）. Methods T-cell subpopulation and percentage of NK cells in peripheral blood of 32 cases with BCC were tested by flow cytometry before and after microwave therapy. Results The percentage of CD3 cells，CD4 cells and NK cells decreased and that of CD8 cells increased in BCC patients，with significant difference from those of controls. After microwave therapy，the percentage of CD4 cells and NK cells in patients with BCC were higher than that of before treatment，the percentage of CD8 cells were lower than that of before treatment. Conclusion BCC patients exist cellular immune function defect，Microwave therapy can enhance the immune function of the BCCpatients.

Key words：basal cell carcinoma；T-cell subpopulation；natural killer cells；flow cytometry；microwave therapy

基底細(xì)胞癌（basal cell carcinoma， BCC）是最常見(jiàn)的皮膚癌之一，以往多采用手術(shù)、放療、化療及免疫治療等傳統(tǒng)治療方法，雖然這些方法效果尚可，但在美容和副作用方面存在一定的局限性。微波治療BCC效果滿(mǎn)意，復(fù)發(fā)率低，副作用少[1]，但其治療機(jī)制尚未完全明了。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)，我們以前的研究證實(shí)BCC患者存在細(xì)胞免疫功能受損，并與BCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸有關(guān)，提示可從提高機(jī)體的免疫功能來(lái)尋找有效的治療方法[2]。為了進(jìn)一步了解微波治療BCC癌的機(jī)制，我們應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)了32例BCC患者微波治療前后的T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料：32例患者均經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)為基底細(xì)胞癌并接受微波治療，其中男20例，女12例，平均年齡56.8歲（15～68歲），平均病程3.7年（2個(gè)月～18年），但具有下列情況之一者不列入研究范圍：①伴有自身免疫性疾病、過(guò)敏性疾病、嚴(yán)重的系統(tǒng)性疾病、病毒感染性疾病者；②1年內(nèi)用過(guò)免疫增強(qiáng)劑或免疫抑制劑者。微波的具體治療方法為先將局部清潔、消毒，予2%利多卡因局部麻醉后，選用雙極觸頭對(duì)準(zhǔn)癌組織進(jìn)行多點(diǎn)熱化凝固，然后清除已凝固的壞死組織，反復(fù)多次對(duì)癌組織進(jìn)行熱化凝固，直到暴露出基底正常組織。治療范圍超出癌灶邊緣5 mm。對(duì)范圍特別大的基底細(xì)胞癌，可分次治療。經(jīng)過(guò)上述方法治療后，接著按下微波機(jī)的熱療檔，選用直徑為7 cm的圓形發(fā)熱器對(duì)準(zhǔn)創(chuàng)面進(jìn)行照射，輸出功率為40～50W，發(fā)熱器距創(chuàng)面10～15 cm，以患者有溫?zé)岣袨槎取Ｕ丈鋾r(shí)注意充分暴露創(chuàng)面，照射完畢局部外涂復(fù)方紅汞溶液。每日1次，每次20min，1個(gè)療程為7～10天[1]。對(duì)照組32例，均為我院健康體檢者，其中男19例，女13例，平均年齡57.3歲（16～69歲）。兩組年齡和性別方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

1.2 方法：用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)32例BCC患者微波治療前、療程結(jié)束后及32例健康對(duì)照組外周血T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞百分率。具體方法為：2只試管中各加入100μl EDTA抗凝靜脈血，再分別加入20μl的雙標(biāo)單克隆抗體CD3/CD16+56和CD4/CD8，室溫避光副孵育20min后，加500μl紅細(xì)胞溶解液溶解紅細(xì)胞15min，1 000r/min 離心5 min，棄上清，用PBS緩沖液沖洗2次，再以0.5ml PBS緩沖液懸浮細(xì)胞，流式細(xì)胞儀分析5 000個(gè)細(xì)胞（雙標(biāo)記單克隆抗體CD3/CD16+56，CD4/CD8及紅細(xì)胞溶解均購(gòu)自法國(guó)國(guó)際免疫公司）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：使用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

32例BCC患者與對(duì)照組比較，CD3、CD4細(xì)胞百分率、CD4/CD8的比值和NK細(xì)胞的百分率均明顯降低，CD8細(xì)胞百分率明顯增高，差異均有顯著性（P<0.01），見(jiàn)表1。微波治療后BCC患者與治療前比較，CD4細(xì)胞百分率、CD4/CD8的比值和NK細(xì)胞的百分率均明顯上升，CD8細(xì)胞百分率明顯下降，差異均有顯著性（P<0.01），而CD3細(xì)胞的百分率治療前后比較差異無(wú)顯著性（P>0.05）。

3討論

檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群及其比值是反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的重要參數(shù)之一[3]。我們應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了BCC患者的外周血T淋巴細(xì)胞亞群，并與健康正常對(duì)照組比較，發(fā)現(xiàn)BCC患者CD3、CD4、CD4/CD8值及NK細(xì)胞百分率明顯低于對(duì)照組，而CD8卻明顯高于對(duì)照組，差異均有顯著性。BCC患者CD3、CD4細(xì)胞降低和CD8細(xì)胞的增高，再次證實(shí)BCC患者細(xì)胞免疫功能有明顯下降，且以免疫抑制現(xiàn)象和自身免疫監(jiān)視能力下降為突出，與我們以前的研究結(jié)果相符[2]，其與BCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸有關(guān)。

微波治療BCC時(shí)，在微波能量較高時(shí)，可使蛋白質(zhì)變性、凝固、壞死，從而達(dá)到去除病灶的目的，且其能有效地解決創(chuàng)面出血的問(wèn)題，便于在治療過(guò)程中觀(guān)察病變組織是否清除“干凈”[3]。此外，熱療能加快局部血液循環(huán)及代謝，提高局部免疫力，有利于傷口愈合。值得我們關(guān)注的是微波治療后BCC患者的CD4細(xì)胞百分率、CD4/CD8的比值和NK細(xì)胞的百分率均明顯上升，CD8細(xì)胞百分率明顯下降。提示微波治療BCC除了物理治療作用外，還有可能是通過(guò)提高機(jī)體的免疫功能途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)治療效果。與以往采取的手術(shù)、放療、化療及免疫治療等傳統(tǒng)治療方法相比，微波療法具有經(jīng)濟(jì)、方便、安全、可靠、美觀(guān)及促進(jìn)創(chuàng)面恢復(fù)和增強(qiáng)患者細(xì)胞免疫功能等優(yōu)點(diǎn)，值得臨床推廣應(yīng)用[1，3]。

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