八角蓮洗液制備及其殺菌作用研究

[摘要] 目的 制備八角蓮洗液，并了解其殺菌效果及其毒性。 方法 提取八角蓮總黃酮和總木脂素，制成八角蓮洗液。對其采用懸液定量殺菌試驗、毒性試驗、真菌殺滅試驗、陰道黏膜刺激試驗和穩定性實驗進行觀察。 結果 用該產品對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作用2 min，殺滅率均達到100%；對白色念珠菌作用2 min，平均殺滅率為93.35%。對家兔陰道黏膜無刺激性。產品經36℃放置90 d后，殺滅效果幾乎不變。 結論 八角蓮洗液有殺菌作用，對試驗動物皮膚無刺激性。

[關鍵詞] 八角蓮；鬼臼毒素；山奈酚；殺菌

[中圖分類號] R284.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）01-46-02

八角蓮為小檗科植物八角蓮Dysosma versipellis（Hance）M. Cheng或六角蓮D. Pleiantha （Hance）Woods. 等八角蓮屬多種植物的根莖，別名鬼臼，是我國傳統的民間常用藥之一，具有清熱解毒、祛痰散結、祛淤消腫的功效[1]。八角蓮屬類植物普遍含有鬼臼毒素（Podophyllotoxin）等芳香四氫萘類木脂素，具有較強的抗腫瘤和抗病毒等活性。此外還有黃耆甙（Astragalin）、金絲桃甙（Hyperin）、槲皮素（ quercetin） 、山柰酚（Kaempferol）等多咱黃酮類成分[2]。研究者從八角蓮中提取出富集了總木脂素和總黃酮的提取物，制成八角蓮洗液，用于男女外陰部滅菌消毒。為探討其殺菌效果和毒性，在實驗室進行了有關試驗研究。

1 材料與方法

1.1 材料來源

1.1.1 藥材來源 八角蓮藥材（安徽產）購自成都荷花池中藥材專業市場，經西華大學生命科學院楊文宇教授鑒定為Dysosma versipellis（Hance）M.Cheng的根莖。

1.1.2 殺菌試驗[3] 材料：供試樣品：八角蓮洗液。大腸桿菌（8099）、金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、白色念珠菌

（ATCC10231）由中國普通微生物菌種保藏中心提供。中和劑：0.5%硫代硫酸鈉+0.5%卵磷脂+0.5%甘氨酸+0.5%吐溫80的0.03 mol/L的PBS溶液。動物：由四川省實驗動物專委會養殖場提供的健康、初成年的雌性家兔6只，體重2.0～2.3 kg，許可證號：SCXK[川]2008-14。普通級，動物采用單籠喂養。

1.2 提取工藝

八角蓮藥材，粉碎為粗粉，用8倍量95%乙醇滲漉，回收乙醇，浸膏用乙酸乙酯洗滌過濾，濾液回收溶劑，浸膏用混合有機溶劑（乙酸乙酯︰環已烷 2︰1）加熱回流洗滌，過濾，濾液回收溶劑，浸膏烘干粉碎，得八角蓮提取物A，備用。

1.3 含量測定

經HPLC法測定，提取物A中鬼臼毒素含量為33.2%[4]，山奈酚含量為4.5%。經紫外分光光度法測得總黃酮含量為10.8%[5]。

1.4 樣品制備

取八角蓮提取物A干粉80 g，加熱溶于1 200 mL吐溫80中，加入丙二醇4 000 mL，卡松、乙氧基化烷基硫酸鈉（AES）等輔料適量，加熱攪拌至溶液清亮。逐步加入純化水，邊加邊攪拌，加至溶液總體積為40 L，分裝，每瓶裝200 mL溶液，密封，得八角蓮洗液樣品199瓶。其中鬼臼毒素含量為0.66 mg/mL。樣品為淡黃色澄清液體，在自然光下放置6個月，外觀不發生變化。

1.5 殺菌試驗方法

檢驗依據：《消毒技術規范》（2002年版）2.1.1.5.5中和劑懸液定量鑒定試驗操作程序，2.1.1.9真菌殺滅試驗，2.1.1.7.4懸液定量殺菌試驗操作程序，2.2.3消毒產品穩定性測定（微生物法），2.3.5陰道黏膜刺激試驗。

1.5.1 中和劑鑒定試驗 試驗菌為金黃色葡萄球菌和白色念珠菌。試驗用樣濃度100%。試驗溫度20℃，重復次數3次。

1.5.2 殺菌試驗 白色念珠菌采用2.1.1.9真菌殺滅試驗，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌采用2.1.1.7.4懸液定量殺菌試驗操作程序。試驗用樣濃度100%。試驗溫度20℃，重復次數3次。

1.5.3 陰道刺激性試驗 試驗分染毒組及空白對照組，每組3只雌性家兔。操作程序參見《消毒技術規范》（2002年版）2.3.5.4。根據《消毒技術規范》（2002年版）中表2-16、2-17進行陰道黏膜刺激反應評分分級和強度分級。

1.5.4 穩定性實驗 樣品原包裝PE瓶密封，于36℃恒溫箱中放置90 d。觀察存放后對白色念珠菌殺滅效果變化。

2 結果

2.1 中和劑鑒定試驗結果

試驗表明，用0.5%硫代硫酸鈉+0.5%卵磷脂+0.5%甘氨酸+0.5%吐溫80的0.03 mol/L的PBS溶液溶液作為中和劑，可有效中和該樣品100%濃度對金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的殺滅作用，且該中和劑及中和產物對受試細菌生長繁殖和培養基無影響。

2.2 殺菌效果

試驗表明，該樣品100%濃度分別對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌作用2 min，平均殺滅率分別為100%、100%和93.35%。陰性對照無菌生長。見表1。

2.3 陰道刺激性試驗

試驗組家兔陰道黏膜接觸該洗液之后，肉眼觀察未見充血和水腫。組織病理學檢查結果，陰道黏膜刺激反應評分為0，屬無刺激性。

2.4 穩定性試驗（微生物）

結果顯示，該樣品經36℃放置90 d后，對白色念珠菌的殺滅效果與存放前基本一致。故該產品貯存有效期可定為2年。見表2。

3 討論

八角蓮提取物中的有效成分黃酮與木脂素均為脂溶性，在水中溶解性不佳。有中藥洗液采用酒精為溶劑。但酒精易揮發，且對敏感部位皮膚有一定刺激性。經多次試驗，筆者采用了吐溫和丙二醇增溶的方法，二者在洗液中含量僅為3%和10%，自然光下放置6個月及36℃恒溫箱中放置90 d，外觀性狀均不發生變化。

八角蓮中的黃酮與木脂素均有良好的殺菌消毒作用[6]。在制備八角蓮洗液過程中通過提取精制將這兩類成份富集到一起，協同作用，也緩解了單用鬼臼毒素類木脂素可能造成皮膚刺激性的問題。同時在精制過程中，通過調節混合有機溶劑（乙酸乙酯︰環已烷）的構成比例，可控制產物中總黃酮比總木脂素的含量比，以期達到最優組合。上述試驗中可見八角蓮洗液對家兔陰道黏膜無刺激性，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌均有殺菌作用。在保證皮膚安全性的前提下，八角蓮洗液中鬼臼毒素含量達到了0.66 mg/mL，提示八角蓮洗液在起到男女外陰部殺菌消毒作用的同時可能對尖銳濕疣等毒性性病的治療有一定的積極作用。對于八角蓮洗液在治療尖銳濕疣中的具體作用，以及八角蓮中黃酮與鬼臼毒素類木脂素之間可能的協同作用機制，還有待進一步研究。

[參考文獻]

[1] 盧軍.八角蓮的藥理及臨床應用[J].現代醫藥衛生，2009，25（23）：3608-3609.

[2] 呂敏，蘇艷芳，郭增軍，等.八角蓮屬植物化學成分及生物活性研究概況[J].西北藥學雜志，2007，22（3）：152-153.

[3] 中華人民共和國衛生部.消毒技術規范（2002年版）[S].2002.

[4] 俞培忠，姚莉韻，王麗平.HPLC法測定4種八角蓮中鬼臼毒素的含量[J].上海醫科大學學報，1998，25（6）：452-453.

[5] 徐國兵，黃萬著，王德群，等.百蕊草藥材中山奈酚和總黃酮的含量測定[J].中醫藥學，2008，136（11）：39-42.

[6] 趙立春，何穎，岳桂華，等.八角蓮屬藥用植物化學成分及生理活性研究進展[J].中國民族民間醫藥，2009，18（13）：37-39.

（收稿日期：2012-09-27）