DPC4蛋白在結腸癌組織中表達及其臨床意義

[摘要] 目的 探討DPC4蛋白在結腸癌組織中表達及其臨床意義。 方法 采用免疫組化S-P法檢測60例結腸癌標本中DPC4蛋白的表達，并探討其與患者的生物學行為及預后的關系。同時選擇30例癌旁正常結腸組織（距腫瘤邊緣>5 cm）作為對照。 結果 DPC4蛋白在結腸癌標本中的陽性率明顯低于癌旁正常結腸組織（χ2=31.42，P < 0.01）。結腸癌組織中DPC4蛋白表達水平隨組織分化程度的增加而增加（P < 0.01），隨腫瘤大小、臨床分期的提高和淋巴結的轉移而呈逐漸下降趨勢（P < 0.01或P < 0.05）。 結論 DPC4基因在結腸癌的發生、發展、轉移和預后中起重要作用，與患者的生物學行為和預后具有明顯相關性，有望成為結腸癌基因診斷和治療的新靶點。

[關鍵詞] 結腸癌；免疫組化；DPC4蛋白；生物學行為；預后

[中圖分類號] R735.34 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）02-0031-02

結腸癌的發生和發展是多階段、多基因參與的病理過程，其中癌基因的激活以及抑癌基因的缺失導致的細胞異常增殖是該病理過程中的重要分子機制[1]。DPC4是一種新發現的抑癌基因，近年來研究發現DPC4基因的表達缺失在癌細胞的生長分化中起著負性調節的作用[2]。本研究觀察了DPC4蛋白在60例結腸癌標本中的表達及其與患者的生物學行為及預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2006年1月～2011年12月在我院手術治療并有完整臨床病理資料的結腸癌組織標本60例，其中男35例，女25例，年齡34～85歲，平均（64.7±7.1）歲。所有患者術前均未接受任何形式的化療、免疫及放療。同時選擇30例癌旁正常結腸組織（距腫瘤邊緣>5 cm）作為對照。

1.2 免疫組化染色

采用免疫組化S-P法檢測石蠟標本中DPC4蛋白的表達，根據試劑盒中所附的實驗操作步驟進行操作。用正常未免疫兔血清代替一抗作陰性對照，用PBS代替一抗作空白對照，以正常扁桃體組織作陽性對照。其中S-P免疫組化試劑盒和兔抗人DPC4多克隆抗體由北京中杉金橋生物公司提供。

1.3 結果觀察

以細胞漿內出現棕黃色顆粒定為陽性細胞。按高倍鏡視野下計數細胞的染色強度進行記分，其中無色記0分、淺色記1分、棕黃色記2分，褐色記3分；同時再根據陽性細胞所占的比例進行記分，其中陰性記0分，陽性細胞比例≤10%記1分，陽性細胞比例在11%～50%之間記2分，陽性細胞比例在51%～75%之間記3分，陽性細胞比例>75%記4分。染色強度記分和陽性細胞比例記分的乘積≥2分即為DPC4表達（+）[3]。

1.4 統計學處理

應用SPSS 13.0統計學軟件，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 DPC4蛋白在結腸癌及癌旁正常組織中的表達

60例結腸癌標本中DPC4的陽性表達為23例（38.3%）。30例癌旁正常結腸標本DPC4蛋白表達均呈陽性。DPC4蛋白在結腸癌標本中的陽性率明顯低于癌旁正常結腸組織（χ2=31.42，P < 0.01）。見圖1。

2.2 結腸癌標本中DPC4蛋白的表達與生物學行為關系

結腸癌標本中DPC4蛋白表達水平與患者的性別和年齡均無明顯關系（P > 0.05）。結腸癌標本中DPC4蛋白表達水平隨組織分化程度的增加而增加（P < 0.01），隨腫瘤大小、臨床分期的提高和淋巴結的轉移而呈逐漸下降趨勢（P < 0.01或P < 0.05）。見表1。

2.3 DPC4蛋白在結腸癌中的表達與預后的關系

60例大腸癌中隨訪3年以上41例（DPC蛋白的陽性表達為25例），其中存活22例，因腫瘤復發、轉移而死亡19例。DPC蛋白陽性表達組的3年生存率為76.0%（19/25），DPC蛋白陰性表達組的3年生存率為18.8%（3/16）。DPC蛋白陽性表達組的3年生存率明顯高于DPC蛋白陰性表達組（χ2=12.86，P < 0.01）。

3 討論

結腸癌是常見的消化道癌癥，近年來發病率有逐年上升的趨勢。研究已證實大腸癌的發生、發展是一個錯綜復雜的分子病理過程，包含環境和基因缺陷等諸多因素。DPC4是一個新發現的抑癌基因，定位于染色體18q21.1，含有11個外顯子和10個內含子，編碼552個氨基酸殘基組成的DPC4蛋白[4]。目前認為DPC4蛋白是TGFβ信號傳導的橋梁。DPC基因缺失，對TGFβ基因的抑制減弱，從事抗凋亡功能的細胞永生化形成腫瘤，且可使與細胞結合的有關的DNA活性下降，導致TGFβ通路的基因轉錄發生失活，造成細胞永生化形成腫瘤[5]。DPC4基因在多種人類腫瘤的發病中的重要作用而備受臨床重視[6]。

DPC4基因與結腸癌的病因及發病機制密切相關。謝忠士等[7]研究發現DPC4蛋白在癌旁組織中均呈強陽性表達，而在結腸癌組織中的表達較低，且隨著腫瘤臨床分期的增加而逐漸降低，但與年齡和腫瘤的部位無關。表明DPC4蛋白在結腸癌的形成、浸潤、轉移及預后中起重要作用。曲洪濱等[8]研究發現大腸癌組織DPC4蛋白表達程度明顯低于正常大腸組織，與大腸癌組織的細胞分化程度、臨床分期及淋巴結轉移等生物學行為特征密切相關。表明DPC4蛋白表達與大腸癌密切相關，可作為大腸癌診斷和治療的生物學標記物。本研究結果發現結腸癌標本中DPC4蛋白的表達呈現降低或缺失狀態，陽性率明顯低于癌旁正常結腸組織，且結腸癌組織中DPC4表達水平隨組織分化程度的增加而增加，隨臨床分期的提高和淋巴結的轉移而呈逐漸下降趨勢。表明DPC4蛋白表達在結腸癌的浸潤及轉移中起重要作用，隨著結腸癌的浸潤及轉移的程度，DPC4蛋白表達呈下降或缺失狀態。DPC4可作為結腸癌診斷和治療的重要生物學標記物。

總之，DPC4基因在結腸癌的發生、發展、轉移和預后中起重要作用，與患者的生物學行為和預后具有明顯相關性，有望成為結腸癌基因診斷和治療的新靶點。

[參考文獻]

[1] 朱小三. 大腸癌相關抑癌基因的研究進展[J]. 軍醫進修學院學報，2011，32（5）：536-538.

[2] Maitra A，Molberg K，Albores-Saavedra J，et al. Loss of dpc4 expression in colonic aden carcinomas correlates with the presence of metstatic disease[J]. Am J Pathology，2000，157（4）：1105-1108.

[3] 方小斌. Livin蛋白在大腸癌組織中的表達及其與患者臨床病理特征的關系[J]. 中國現代醫生，2012，50（4）：112-113.

[4] 唐朝暉，鄒聲泉，楊想平，等. DPC4 蛋白在不同病理分期的結腸腫瘤中的表達[J]. 世界華人消化雜志，2003，11（10）：1654-1656.

[5] 周海波，張居民，顏云，等. 結直腸癌組織中 DPC4基因的分子生物學研究[J]. 世界華人消化雜志，2002，10（10）：1140.

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[7] 謝忠士，宋燕，劉志毅，等. 抑癌基因DPC4在結腸癌蛋白的表達及臨床意義[J]. 中國實驗診斷學，2008，12（2）：245-246.

[8] 曲洪濱，付曉光，高志安，等. 大腸癌組織中抑癌基因DPC4和PTEN蛋白表達意義的研究[J]. 錦州醫學院學報，2006，27（1）：1-4.

（收稿日期：2012-08-02）