穴位貼敷加針刺四縫穴對(duì)反復(fù)呼吸道感染兒童免疫功能的影響

[摘要] 目的 觀察穴位貼敷加針刺四縫穴療法對(duì)反復(fù)呼吸道感染（recurrent respiratory tract infection，RRTI）兒童免疫功能的影響。 方法 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)108例經(jīng)穴位貼敷加針刺四縫穴治療的RRTI患兒的T淋巴細(xì)胞亞群。ELISA檢測(cè)免疫球蛋白IgG、IgA、IgM和IGF-1水平。 結(jié)果 RRTI患兒T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)、免疫球蛋白和IGF-1水平均低于正常健康對(duì)照兒童。穴位貼敷加針刺四縫穴治療后，RRTI患兒總T淋巴細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD4/CD8比值明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。治療后IgG、IgA水平和IGF-1水平均顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 RRTI患兒免疫功能低下，穴位貼敷加針刺四縫穴可提高患兒細(xì)胞和體液免疫功能。

[關(guān)鍵詞] 穴位貼敷；四縫穴；反復(fù)呼吸道感染；免疫功能

[中圖分類(lèi)號(hào)] R725.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）02-0073-03

兒童反復(fù)呼吸道感染（recurrent respiratory tract infection，RRTI）是一種兒科臨床常見(jiàn)病，多發(fā)病。RRTI是指在一年內(nèi)上、下呼吸道感染反復(fù)發(fā)作而超過(guò)規(guī)定次數(shù)的一種臨床綜合征[1]，常反復(fù)發(fā)作，每次發(fā)作癥狀較重，病程較長(zhǎng)，防治不當(dāng)易引起多種并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患兒的身心健康。RRTI的病因較多，大量的臨床研究證實(shí)反復(fù)呼吸道感染兒童存在體液和細(xì)胞免疫功能的異常[2，3]。目前臨床多采用抗感染、對(duì)癥支持治療，但仍有許多病例無(wú)法取得理想效果。中醫(yī)藥對(duì)兒童反復(fù)呼吸道感染具有一定的療效[4]。本研究采用中藥穴位貼敷結(jié)合針刺四縫穴治療RRTI患兒，觀察其臨床療效并測(cè)定患兒免疫球蛋白及淋巴細(xì)胞亞群等體液和細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，為RRTI患兒尋找更佳的治療方案，為其提供理論依據(jù)并積累實(shí)際應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2009年10月～2012年2月在我院門(mén)診或住院并配合完成整個(gè)診療計(jì)劃的反復(fù)呼吸道感染患兒共108例。診斷標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)呼吸學(xué)組與《中華兒科雜志》編輯委員會(huì)2008年制定的《反復(fù)呼吸道感染的臨床概念和處理原則》的標(biāo)準(zhǔn)[1]。其中男58例，女50例；年齡3～14歲，平均（6.3±2.6）歲。反復(fù)上呼吸道感染62例，反復(fù)下呼吸道感染46例。所有患兒入選前3個(gè)月未使用過(guò)血制品、激素和免疫調(diào)節(jié)劑，并除外原發(fā)免疫缺陷病、肝腎疾病、小兒肺結(jié)核、先天性心臟病等合并癥。隨機(jī)選取同期健康體檢的正常健康兒童48例作為對(duì)照組，男26例，女22例，年齡4～13歲，平均（6.1±3.1）歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 治療方法 穴位貼敷是將白芥子（微炒）、延胡索、甘遂、細(xì)辛、黃芪、白術(shù)、肉桂、丁香按3∶5∶2∶2∶5∶3∶1∶1 比例混合，研為細(xì)末后加鮮姜汁調(diào)成膏狀，制成大小1 cm×1 cm、厚度為3 mm左右的方形藥塊，取風(fēng)門(mén)（雙）、肺俞（雙）、脾俞（雙）、關(guān)元，將藥塊貼于穴位上，外用6 cm×6 cm大小的膠布固定。6 歲以下貼敷1～2 h，6 歲以上貼敷2～6 h，以貼藥處皮膚潮紅為度，每周1 次，4 次為1個(gè)療程，休息10 d后再治療1個(gè)療程。針刺四縫穴治療方法：患兒四縫穴處皮膚常規(guī)消毒后，醫(yī)者右手拇、食兩指持住針柄，中指扶住針尖部，露出針尖1～2分許，以控制針刺深淺度，針刺時(shí)左手捏住患兒待刺的手指，右手持針對(duì)準(zhǔn)穴位迅速刺入1～2分，立即出針，輕輕擠壓針孔周?chē)瑪D出黃白色液體或少許血液，然后用消毒干棉球按壓針孔。同時(shí)囑家長(zhǎng)注意患兒針孔周?chē)鹗芨腥尽／煶蹋好恐?次，共治療4次。

1.2.2 細(xì)胞免疫功能檢測(cè) 分別于患兒治療前和治療后1個(gè)月清晨空腹采血，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝管收集靜脈血2 mL，采用三色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群（包括CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞）。取BD淋巴細(xì)胞亞群四色組合抗體CD3/CD8/CD45/CD4（貨號(hào)340499， 美國(guó)BD公司）20 μL，加抗凝全血100 μL，震蕩混勻室溫避光孵育15 min，加1×溶血素1 mL，混勻后室溫避光10 min，離心去上清加PBS 400 μL，用BD FACS Calibur流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群。

1.2.3 體液免疫檢測(cè) 分別于患兒治療前和治療后1個(gè)月清晨空腹采血，離心去血清后，使用全自動(dòng)酶標(biāo)檢測(cè)儀，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平，用胰島素樣生長(zhǎng)因子-I（IGF-I）試劑盒（上海森雄公司），ELISA法檢測(cè)IGF-I。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用GraphPad Prism 5.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。采用描述性統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以x±s表示，兩組均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間的比較采用單因素方差分析；均數(shù)的兩兩比較采用LSD法。兩變量相關(guān)性采用等級(jí)相關(guān)（Spearman）分析。計(jì)數(shù)資料用相對(duì)數(shù)，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RRTI患兒細(xì)胞免疫和體液免疫功能受損

以往的研究顯示RRTI的患兒多存在不同程度的特異性和非特異性免疫功能的低下。我們首先檢測(cè)了納入本研究的RRTI患兒的以T淋巴細(xì)胞為代表的細(xì)胞免疫狀態(tài)和免疫球蛋白IgG、IgA、IgM以及IGF-1等反映體液免疫功能狀態(tài)的指標(biāo)情況。兩組兒童年齡和性別比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。如表1所示，與健康對(duì)照兒童相比，RRTI兒童的總T淋巴細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞百分率、CD4+/CD8+比值均不同程度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而CD8+T淋巴細(xì)胞百分比與健康對(duì)照兒童比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。這提示RRTI患兒細(xì)胞免疫功能受損。檢測(cè)體液免疫功能指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，RRTI患兒IgG、IgA、IgM以及IGF-1的水平均低于正常健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），見(jiàn)表1。

2.2 穴位貼敷加針刺四縫穴治療前后細(xì)胞免疫變化情況

經(jīng)穴位貼敷加針刺四縫穴治療后，RRTI患兒總T淋巴細(xì)胞數(shù)量（65.3±5.9）%顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。此外，CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞以及CD4/CD8比值均增高，其中CD4+T細(xì)胞數(shù)（33.6±5.7）%和CD4/CD8比值（1.5±0.7）增高明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見(jiàn)圖1。

2.3 穴位貼敷加針刺四縫穴治療可提高患兒體液免疫功能狀態(tài)

經(jīng)穴位貼敷加針刺四縫穴治療后，RRTI患兒IgG[（10.3±4.8）g/L]、IgA[（1.3±0.5）g/L]水平均顯著提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。但I(xiàn)gM[（1.1±0.9）g/L]水平較治療前[（0.9±0.5）g/L]有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。此外，治療后IGF-1水平[（27.5±6.2）μg/L]增高明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05，圖2。

3討論

RRTI是兒科常見(jiàn)病，其病因復(fù)雜，除與呼吸道本身解剖特點(diǎn)有關(guān)外，還受免疫功能、營(yíng)養(yǎng)狀況、空氣污染等多方面影響[2]。該病患兒存在細(xì)胞免疫及體液免疫的紊亂已被國(guó)內(nèi)外眾多研究所證實(shí)[3，5]。許多資料顯示RRTI患兒存在外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化[3，6，7，8， 9]，但CD4+、CD8+ T淋巴細(xì)胞比例的變化報(bào)道并不一致。我們的研究進(jìn)一步證實(shí)RRTI患兒存在細(xì)胞和體液免疫功能低下?tīng)顩r。對(duì)于RRTI的治療目前仍然沒(méi)有明確的有效的治療方案，單純的抗感染治療并不能解決所有的患兒情況，因此發(fā)揮中醫(yī)藥學(xué)的優(yōu)勢(shì)，我們嘗試通過(guò)穴位貼敷結(jié)合針刺四縫穴的綜合治療方法對(duì)108例RRTI患兒進(jìn)行干預(yù)治療，觀察治療前后患兒的細(xì)胞和體液免疫狀況發(fā)現(xiàn)，該治療方法可有效提高患兒的細(xì)胞和體液免疫功能狀態(tài)，提示該方法可能通過(guò)提高患兒的免疫功能狀態(tài)而改善RRTI的治療。該方法安全、避免口服和注射藥物等毒副作用。

正常機(jī)體內(nèi)免疫細(xì)胞種類(lèi)比例或細(xì)胞亞群比例偏離正常值，提示體內(nèi)免疫功能發(fā)生變化。因此，機(jī)體的細(xì)胞免疫功能與許多疾病（特別是感染性疾病、腫瘤及自身免疫性疾病）的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。T淋巴細(xì)胞是參與機(jī)體免疫反應(yīng)的主要免疫活性細(xì)胞，淋巴細(xì)胞亞群CD4+和CD8+ T細(xì)胞通過(guò)直接作用和分泌細(xì)胞因子相互誘導(dǎo)、相互抑制形成T細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，在機(jī)體免疫應(yīng)答調(diào)控和維持免疫穩(wěn)定方面具有重要作用。RRTI是兒科門(mén)診呼吸道疾病的常見(jiàn)病。本研究結(jié)果顯示，RRTI患兒CD3+總淋巴細(xì)胞比例下降，與健康兒童相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示RRTI患兒免疫功能異常和紊亂。免疫能力處于低下?tīng)顟B(tài)與大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果基本一致[3，7，9]。研究發(fā)現(xiàn)RRTI患兒同時(shí)存在細(xì)胞和體液免疫低下。本研究結(jié)果也證實(shí)RRTI患兒血清IgG、IgA、IgM和IGF-1水平均明顯低于正常。當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激后，免疫活性細(xì)胞處于疲憊狀態(tài)，免疫反應(yīng)降低，抗體產(chǎn)生減少，不能清除抗原，導(dǎo)致反復(fù)感染，同時(shí)反復(fù)感染又導(dǎo)致免疫球蛋白消耗增加。呼吸道感染時(shí)T細(xì)胞被激活，釋放IL-2，同時(shí)T細(xì)胞分化增殖受阻，自然殺傷細(xì)胞活性降低，細(xì)胞因子產(chǎn)生減少，導(dǎo)致T細(xì)胞誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生減少，影響血清Ig水平，機(jī)體免疫受抑制。這可能是RRTI患兒細(xì)胞和體液免疫功能均受損的原因。

目前由于抗生素和激素的濫用，加上兒童免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，抵抗和清除病菌能力差，這嚴(yán)重干擾和破壞了患兒機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié)，免疫反應(yīng)降低導(dǎo)致反復(fù)呼吸道感染，因此RRTI 患兒血清IgG、IgA、IgM濃度水平低下。小兒稚陰稚陽(yáng)，肺虛脾弱，衛(wèi)外不固，易感外邪，治宜益肺健脾、和營(yíng)固表。我們?cè)凇稄埵厢t(yī)通》治療冷哮的白芥子涂法的基礎(chǔ)上，添加了黃芪、白術(shù)、肉桂等進(jìn)行穴位貼敷，以增強(qiáng)益氣健脾作用。由于皮膚角質(zhì)層的屏障作用，很多藥物難以穿透皮膚。辛溫走竄開(kāi)竅的中藥可促進(jìn)藥物透皮吸收，中藥所含的揮發(fā)油成分具有較強(qiáng)的促滲透效果，可擴(kuò)張皮膚血管，增加血流量，使吸收的藥物經(jīng)皮滲透、擴(kuò)散。藥物貼敷于特定穴位，可使藥物的理化刺激直接作用于多層次、多功能的經(jīng)絡(luò)系統(tǒng)，從整體上調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，使機(jī)體免疫作用達(dá)到新的動(dòng)態(tài)平衡和內(nèi)外環(huán)境的協(xié)調(diào)穩(wěn)定， 起到內(nèi)病外治作用。四縫穴為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化穴方案中的經(jīng)外奇穴，是兒科針灸療法中應(yīng)用最廣泛的腧穴之一。四縫穴早在明代的《奇效良方》中就有記載：“在手四指內(nèi)中節(jié)是穴。”此后，在歷代針灸、兒科及中醫(yī)綜合類(lèi)文獻(xiàn)中還有多處記載[10，11]，如《針灸大成》中記載四縫穴主治小兒疳疾：“三棱針出血。治小兒猢猻勞等證。”，這表明針刺四縫穴在小兒治療中沿用已久，已成為一種普遍認(rèn)可的療法。我們嘗試將針刺四縫穴配合穴位貼敷用于RRTI患兒的治療。研究顯示穴位貼敷加針刺四縫穴治療后患兒CD3+總淋巴細(xì)胞和CD4+ T淋巴細(xì)胞以及IgG、IgA等免疫球蛋白濃度水平明顯提高，機(jī)體免疫能力得到改善。營(yíng)養(yǎng)不良與IGF-1關(guān)系非常密切。來(lái)自臨床的研究顯示，IGF-1的增加與體重的增長(zhǎng)呈正相關(guān)[12]。血清IGF-1水平反映了目前的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和營(yíng)養(yǎng)不良的嚴(yán)重程度。本研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。在本研究中，RRTI患兒血清IGF-1水平隨著臨床癥狀的減輕而有所提高，治療后患兒血清IGF-1水平的提高較為顯著。這可能是穴位貼敷結(jié)合針刺四縫穴可提高IGF-1，改善患兒的營(yíng)養(yǎng)狀況進(jìn)而增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。

綜上所述，RRTI患兒免疫功能低下，中藥穴位貼敷加針刺四縫穴可提高患兒細(xì)胞和體液免疫功能狀態(tài)。該中醫(yī)藥治療方法無(wú)口服、注射等途徑給藥的毒副作用，安全、簡(jiǎn)便，易于家長(zhǎng)和孩子接受，依從性好。但因缺乏多中心大規(guī)模的多中心研究，因此其治療方案能否推廣還需進(jìn)一步增加病例數(shù)。

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（收稿日期：2012-10-11）