高效液相色譜法測定復(fù)方中藥強(qiáng)骨片中淫羊藿苷含量

[摘要] 目的 建立測定強(qiáng)骨片中淫羊藿苷含量的高效液相色譜法。 方法 色譜柱Kromasil100A C18 柱（250 mm× 4.6 mm，5 mm），以乙腈-水（28∶72）為流動(dòng)相，檢測波長為270 nm。 結(jié)果 淫羊藿苷檢測濃度在1～128 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，加樣回收率為86.34%，RSD為13.77%（n=5）。 結(jié)論 高效液相色譜法簡便、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 淫羊藿苷；強(qiáng)骨片；高效液相色譜法

[中圖分類號(hào)] R286.0 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2013）02-52-03

強(qiáng)骨片是用淫羊藿、骨碎補(bǔ)、龜板、補(bǔ)骨脂等中藥材制備的中藥復(fù)方制劑，具有強(qiáng)筋壯骨，預(yù)防骨質(zhì)疏松的功效，用于調(diào)節(jié)中老年人因腎虛所致的性激素分泌不足而防止鈣的流失，預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥。淫羊藿具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效[1-4]，淫羊藿苷作為該方中臣藥淫羊藿的主要成分，其含量將直接影響該藥的療效。因此，筆者采用高效液相色譜法對復(fù)方中藥強(qiáng)骨片中的淫羊藿苷進(jìn)行測定，為該制劑的質(zhì)量控制提供客觀的評價(jià)方法。為有效控制該藥劑質(zhì)量，采用高效液相色譜法測定制劑中淫羊藿苷的含量，以期建立復(fù)方中藥強(qiáng)骨片的質(zhì)量控制方法[5-6]。

1 材料與方法

1.1 儀器

島津SHIMADZU高效液相色譜儀（LBM-10A），多功能粉碎機(jī)（ST-02A型，永康市帥通工具有限公司）

1.2 藥品

淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為110737-200415）；強(qiáng)骨片（安徽省生物制藥工程技術(shù)研究中心研制，批號(hào)分別為20102，20111，20112，20113，20114）；乙腈為色譜純，水為去離子水，甲醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100A C18柱（250 mm×4.6 mm，5 mm）；流動(dòng)相：乙腈-水（28∶72）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：270 nm。

2.2 溶液制備

取所制備的強(qiáng)骨片15 g，用多功能粉碎機(jī)制成粉末，稱取12.5 g，加入燒瓶中，加甲醇40 mL，環(huán)流1 h，濾過，重復(fù)3次，合并濾液，冷至室溫并移至100 mL量瓶中，加甲醇定溶至100 mL，0.22 μm濾膜過濾，濾液即供試品溶液。精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1毫升含0.14 mg的溶液，作為對照品溶液。按強(qiáng)骨片制備工藝，制備缺淫羊藿的陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取濃度（μg/mL）為1、2、4、8、16、32、64、128的對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，以淫羊藿苷進(jìn)樣濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸分析，得回歸方程Y=27 916X-12 196，r=0.999 5（n=8）。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣濃度在1～128 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。R2=0.999 5。

2.4 專屬性試驗(yàn)

取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，按上述相同的色譜條件分別進(jìn)樣。結(jié)果，供試品溶液中淫羊藿苷與雜質(zhì)分離完全，分離度高；陰性對照無干擾。保留時(shí)間為20.92 min，色譜見圖2。專屬性考察：照上述色譜條件，取對照品溶液、

圖1 淫羊藿苷對照品的線性回歸方程

供試品溶液、陰性對照品溶液各20 μL，分別注入高效液相色譜儀，供試品溶液色譜圖與對照品溶液色譜圖在同一保留時(shí)間有一相同色譜峰出現(xiàn)，陰性對照品在此保留時(shí)間無吸收峰，陰性對照品對測定無干擾。見圖2。

A.對照品溶液32 μg/mL

B.供試品溶液

C.陰性對照品溶液

A：對照品溶液32 μg/mL；B：供試品溶液；C：陰性對照品溶液

圖2 淫羊藿苷高效液相色譜圖

2.5 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液1 mL置于離心管中，用進(jìn)樣針重復(fù)進(jìn)樣5次。經(jīng)數(shù)據(jù)處理，峰面積的RSD為0.92%，表明該方法重復(fù)性好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

供試品溶液1 mL置于離心管中，于0、3、6、9、24、36 h時(shí)進(jìn)樣，數(shù)據(jù)處理結(jié)果顯示，淫羊藿苷峰面積的RSD為0.71%，供試品溶液在36 h之內(nèi)具有穩(wěn)定性。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取批號(hào)為20102的強(qiáng)骨片5份，按照同一測定方法測定此批次強(qiáng)骨片中淫羊藿苷的峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算淫羊藿苷的含量。平均含量的計(jì)算結(jié)果為0.193 6 mg/g，RSD為1.30%，該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

所制備的5個(gè)批次的藥品（批號(hào)為20102，20111，20112，20113，20114）各取1份，依供試品溶液制備方法制備溶液，分別加入淫羊藿苷對照品混合均勻，測定含量，計(jì)算加樣回收率。見表1。

2.9 樣品含量測定

樣品含量測定取5批樣品，按溶液制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定含量。結(jié)果批號(hào)為20102，20111，20112，20113，20114的樣品中，每克藥粉中淫羊藿苷含量分別為0.192 0、0.215 8、0.186 2、0.201 3、0.177 1 mg/g。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)選用的測定方法是參照中國藥典（2005年版）規(guī)定的方法進(jìn)行的[7]淫羊藿苷的檢測波長選為270 nm。對照品、供試品的淫羊藿苷吸收峰的峰型相同，供試品中淫羊藿苷的色譜峰與相鄰色譜峰分離良好，與陰性對照品吸收峰沒有干擾。

國家食品藥品監(jiān)督管理局的《新藥審批辦法》規(guī)定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究應(yīng)以檢測方中君、臣藥為主，顧此選則方中臣藥淫羊藿苷的含量作為檢測指標(biāo)，通過查閱大量文獻(xiàn)，選擇Kromasil 100A C18柱為色譜柱進(jìn)行檢測。流動(dòng)相乙腈/水之比為 28∶72。

目前，國內(nèi)大多數(shù)廠家仍然采用紫外法對中藥復(fù)方制劑中有效成分進(jìn)行含量測定，雖然簡便、快捷，但干擾因素多，準(zhǔn)確度差。高效液相色譜法測定強(qiáng)骨片中淫羊藿苷的含量，準(zhǔn)確度高，有利于對強(qiáng)骨片的質(zhì)量有效控制[8-10]。

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（收稿日期：2012-12-17）