消腫止痛膏的制備及質量控制

[摘要]目的 研究消腫止痛膏的制備工藝及質量控制標準。 方法 以大黃、紅花、黃柏等十多味中藥制成消腫止痛軟膏，并采用薄層色譜法對處方中的大黃、紅花、黃柏進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定梔子苷的含量。結果 用薄層色譜法能鑒別出黃柏、大黃、紅花的含量測定。 結論 本品處方組成合理，制備簡單，質量控制方法簡單易行。

[關鍵詞]消腫止痛膏；制備；質量控制

[中圖分類號] R283 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）04-53-03

消腫止痛膏是由大黃、紅花、黃柏等十多味中藥味中藥組成，具有清熱解毒，活血消腫止痛功效，能快速改善關節(jié)局部癥狀，減輕患者痛苦，縮短療程[1-2]。主要用于各種關節(jié)炎伴有腫痛時的局部配合治療[3]。本研究根據(jù)多年臨床經(jīng)驗，在傳統(tǒng)外治驗方基礎上重新進行組方制備，并對方中主藥大黃、紅花、黃柏進行了薄層色譜（TLC）鑒別，并對方中主要梔子進行分析，采用高效液相色譜（HPLC）法測定梔子苷的含量并報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥物處方組成

主藥為大黃、紅花、黃柏，配藥：澤蘭、黃芩、熟石膏、薄荷、山梔子、紅條紫草、芙蓉葉、冰片、樟腦等十多味藥組成。

1.2 制備方法[3-4]

藥物處理：將上述藥物大黃、黃柏、 黃芩、熟石膏、山梔子幾味藥放于烘箱內 80℃干燥，粉碎過100目篩；將紅花、澤蘭、薄荷、紅條紫草、芙蓉葉加水煎煮，第1次40 min，第2次30 min，合并煎液，濾過，濾液濃縮，后加入乙醇，使乙醇量達60%，靜置24 h，濾取上清液，再轉移至蒸發(fā)皿內繼續(xù)濃縮至稠膏狀，濃縮之比重1.1～1.15，約150 mL濃浸膏，備用。取凡士林、單脂酸甘油酯、吐溫-80，攪拌均勻，在直火上加熱，逐漸升溫，并不斷攪拌，加熱至100℃左右，呈白色糊狀體。再逐漸降溫至72℃，并經(jīng)常翻動，至漸呈透明黏稠體時，分次加入大黃、黃柏等細粉，邊加邊攪拌。加完后應為黃褐色黏稠體。保持溫度在 70℃以下，兌入浸膏（放置降溫至60～70℃）。攪勻，制成1 000 g，分裝，100 g/份，即得。

2 功能與主治

具有清熱解毒，活血消腫止痛功效，能快速改善關節(jié)局部紅、腫、熱、痛的癥狀，減輕患者痛苦，縮短療程。

3 質量控制標準

3.1 性狀

本品為黃褐色軟膏，氣香味苦。

3.2 標本要求

取少量本品通過細菌培養(yǎng)等方法進行無菌檢查，本品中不得含有金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和大腸桿菌等病菌。

3.3 試驗動物要求

常規(guī)去毛、備皮，面積約2.5 cm×2.5 cm，24 h后將本品0.5 g均勻涂擦，觀察24 h內皮膚有無水皰、發(fā)疹、發(fā)紅等現(xiàn)象。

3.4 穩(wěn)定性檢查[5]

將軟膏放入恒溫箱（39±1）℃，或室溫（25±3）℃ 1個月，要求其黏稠度、色澤、均勻性、酸堿度不得有變化，無霉敗現(xiàn)象。

3.5 薄層色譜（TLC）鑒別[6-8]

3.5.1 儀器與藥材 Waters高效液相色譜儀，包括1525輸液泵，2996型PDA檢測器（美國），消腫止痛膏；4種陰性樣品（湖南永州市中醫(yī)院提供）；鹽酸小檗堿對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃酸對照品、三七皂苷R-對照品、人參皂苷R-對照品和人參皂苷R-對照品（均購于中國藥品生物制品檢定所，20060423，20060424，20060425）；乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

3.5.2 方法[9-11] 黃柏：取本品10 g，加甲醇50 mL，攪勻，加熱回流1 h，密塞，冷藏4 h后，過濾，濾液作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1毫升含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液；取缺黃柏藥材的陰性樣品10 g，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。吸取上述3種溶液各5 L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯一丁酮-甲酸-水（10︰6︰1︰1）為展開劑[3]，展開，取出，

干，置紫外燈（356 nm）下檢視。大黃于相同方法取藥液并加入鹽酸，加熱水解30 min，冷卻后用乙醚提取2次，每次10 mL。供試品由乙醚提取后的殘渣加入乙酸乙酯溶解而成。然后選取大黃酚做對照品溶液，陰性對照品溶液制取同上。大黃檢視前的展開劑為石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15︰5︰1）。取10 g微熱后軟化的三七，加石油醚（30～60℃）50 mL，超聲處理20 min，取40 mL正丁醇再次進行20 min的超聲處理，4 h冷藏后用氨水洗滌，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，將蒸干的殘渣加1 mL甲醇溶解而成供試品。取人參皂苷R1作對照品，三七檢視前的展開劑為三氯甲烷-甲酸乙酯-甲醇-水（15︰40︰22︰10），要求在10℃以下放置，噴灑10%硫酸乙醇，在加熱到105℃時清晰顯示。詳見圖1～3。

3.6 梔子苷含量測定（HPLC法）[12]

3.6.1 色譜條件及系統(tǒng)適應性試驗 色譜柱：Hypersil BDS C18柱（200 mm×4.6 mill，5 μm）；流動相：乙腈一水（11︰89）；檢測波長：238 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；進樣量：10 μL。精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10 L，注入高效液相色譜儀，時間為10.2 min，分離度為10.16，理論塔板數(shù)為8002，其他成分對梔子苷的測定無干擾，色譜圖見圖4。

3.6.2 溶液制備 取梔子對照品16.80 mg，置100 mL量瓶中，搖勻，作為對照品溶液備用。加熱回流60 min，10℃放冷，稱定質量，用50%甲醇溶液補足減失的質量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液過微孔濾膜（0.45 μm），即得供試品溶液。精密稱取按處方及制備工藝制備的不含梔子的陰性樣品1.0 g，按照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

3.6.3 方法學考察 線性關系：精密吸取質量濃度為0.168 mg/mL的梔子苷對照品溶液2.00 mL，分別置50，25，10，5 mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。取10μL注入液相色譜儀，得回歸方程為y=4 484.833+1 183 597.153X，r=0.999 96，結果表明梔子苷進樣量在0.067 2～1.68μg范圍內與峰面積線性關系良好。并進行精密度試驗、重現(xiàn)性試驗和加樣回收試，結果見表1。

3.6.4 樣品含量測定 取3批樣品（湖南省永州市中醫(yī)院制劑室生產），按樣品供試液制備方法制備，測定梔子苷含量。 結果為3批樣品中梔子苷含量分別為1.874，2.123，1.775 mg/g。

4 討論

本研究為建立本品的薄層色譜試驗，在其試驗的方法上，著重考慮樣品預試驗、展開系統(tǒng)、展開時的溫度和相對濕度，以利確定重復性好、專屬性強的方法。本實驗各項試驗效果滿意。由于本品藥味較多，成分比較復雜，本研究只對其進行了質量定性分析，其定量分析有待進一步探討研究。

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（收稿日期：2013-01-17）