Western—blot 綜合性實驗在分子診斷學教學中的實施

摘 要：對Western-blot 綜合性實驗在分子診斷學教學中的實施情況進行探討，并分析其教學中存在的問題及提出解決對策，為有關院校開設Western-blot實驗教學提供參考。

關鍵詞：Western-blot 綜合性實驗 教學

中圖分類號：G642 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2012）12（c）-0-01

分子診斷學是基礎醫學與臨床醫學密切聯系的學科，分子診斷學實驗課是分子診斷學教學的重要組成，是鍛煉學生實驗操作能力，分析解決問題能力的重要教學途徑之一。蛋白免疫印跡（Western-blot 或 Immunoblot）涉及分子生物學、生物化學和免疫學等綜合知識內容，在分子診斷學中開展Western-blot綜合性實驗，不僅利于提高分子診斷學教學質量，而且能鍛煉學生綜合技能運用能力。

1 Western-blot 綜合性實驗在教學中開展的意義

Western-blot實驗是根據抗原抗體的特異性結合來檢測樣品中某種蛋白的方法，現已成為蛋白分析的一種常規技術，在科研和醫療中應用廣泛。但本科教學極少開展Western-blot教學，學生對其原理和操作了解較少，缺乏實驗機會，相關知識的理解主要停留在理論教學水平。在醫學檢驗專業開設Western-blot g實驗課程，已成為一項非常必要的實驗教學內容[1]。有助于幫助學生歸納總結相關知識，鍛煉學生掌控大型實驗的能力，利于提高學生綜合素質。

2 Western-blot 綜合性實驗的原理及實施過程

2.1 Western-blot的檢測原理

Western-blot綜合性實驗一般由SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、蛋白印跡和免疫學檢測三個部分組成。首先是SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測樣品中的蛋白質按分子量大小在凝膠中分成帶。然后是蛋白印跡，把凝膠中已分成條帶的蛋白質印跡到硝酸纖維素膜或PVDF膜上。最后是免疫學檢測，用特異性的抗體檢測出已經印跡在膜上的所要研究的相應抗原。

2.2 Western-blot在分子診斷學教學中的實施過程

根據筆者的教學情況，本綜合性實驗約需教學時數12～16學時，具體實施過程如下。

①帶教老師講授Western-blot的實驗原理和注意事項。

②播放Western-blot實驗演示視頻并示教講解各步驟的實驗原理和注意事項，使學生對Western-blot深入理解和熟悉操作過程。

③學生分組，以4人為一個小組，合作開展Western-blot實驗。

④Western-blot的基本操作流程包括：⑴提取細胞或組織蛋白、測定含量；⑵SDS-PAGE電泳；⑶電泳轉膜；⑷免疫

檢測；

⑤各小組學生與帶教老師共同討論分析實驗結果。

3 Western-blot 綜合性實驗的實施效果

3.1 鞏固了理論知識、熟悉了實驗基本原理和操作過程

Western-blot是一門涉及了分子生物學、生物化學和免疫遺傳學等學科的綜合性實驗，實驗原理復雜且難理解。根據往年的教學經驗，在Western-blot內容中只開展理論知識的教學，學生理解困難。因此，開展Western-blot的實驗教學有助于提高教學質量。

Western-blot是一個綜合性實驗，不是簡單的驗證性實驗，所以學生每一步的操作都需要認真思考、認真操作。不僅提高學生的學習興趣，也鞏固了學習Western-blot的理論知識，熟悉了實驗基本原理和操作過程，加強了學生的自主動手操作

能力。

3.2 利用多媒體與帶教老師的雙重演示與講解，加強了學生對實驗的理解和熟悉程度

Western-blot是一個復雜性綜合性實驗，實驗步驟繁瑣且要求高。如果不熟練實驗操作步驟，容易影響實驗結果。例如：轉移時凝膠與膜之間不能留有氣泡，膜和凝膠的位置一定要放正確，同時電源的正負極不能接錯[2]。Western-blot的實驗操作步驟要求高、步驟多，學生一時不能完全掌握Western-blot其中的重點和要點。在實驗課時上利用多媒體資源協助帶教老師講解實驗操作，不僅可以幫助學生重復學習和加強記憶，而且學生在課余時間也能夠通過觀看視頻自主復習，對于加深學習有很大的幫助。

3.3 學生在實驗過程中注意相互協作，加強了團隊合作意識

Western-blot實驗所需儀器設備較為昂貴，不太可能每位學生一套器材獨立操作，本教學中安排4人1小組，共同完成Western-blot綜合性實驗。

由于實驗時間較長，步驟較復雜。每組學生分工合作，共同學習和互相監督，遇到問題互相討論，形成了濃厚的學習氛圍。在討論實驗結果時，學生們互相查找資料，共同討論實驗結果，積極查找實驗中出現的各種問題的原因，有助于提高學生的綜合分析問題能力。

4 剖析Western-blot 綜合性實驗教學中存在的問題及對策

①Western-blot綜合性實驗需要的試劑多、儀器多，價格昂貴，在本科教學中全面開展有難度，難以給每個學生準備一套完整的設備和試劑。各教學單位可根據實驗室條件安排幾個同學為一組，基本滿足Western-blot綜合性實驗在本科教學的要求。

②部分試劑有毒性，如丙烯酰胺溶液，NaN3等，易對身體產生毒害[3]，要注意實驗室安全。

③本綜合性實驗耗時較長，連續操作教學不易安排，可將本實驗安排在周六日進行，或將本實驗切分成幾個小實驗，每周進行一個小實驗，各教學單位可根據自身教學條件合理安排教學進度。

參考文獻

[1]何秋璟，張春龍，侯敢.醫學檢驗專業開設Western Blotting綜合性實驗初探[J].衛生職業教育，2007，25（21）：

91-92.

[2]汪淵.蛋白質印跡技術[J].安徽醫科大學學報，2004，39（3）：245-247.

[3]胡川笑，邵志華，余小忠，等.3例疊氮化鈉中毒病例臨床分析[J].環境與職業醫學，2011，28（8）：512-513.