側(cè)柏葉中黃酮的抗疲勞作用研究

摘要：從側(cè)柏（Platycladus orientalis）葉中提取黃酮，分1.0、2.0 g/kg兩個(gè)劑量組給小鼠灌胃，30 d后測(cè)定小鼠力竭游泳時(shí)間、血清尿素氮（BUN）、肝組織丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）含量。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，側(cè)柏葉黃酮處理組小鼠力竭游泳時(shí)間極顯著延長(zhǎng)，且高、低劑量組間差異極顯著；側(cè)柏葉黃酮高、低劑量組BUN、MDA含量顯著下降，SOD含量極顯著升高，但高、低劑量組間各項(xiàng)生理指標(biāo)差異不顯著。

關(guān)鍵詞：側(cè)柏（Platycladus orientalis）葉；黃酮；提取；小鼠；抗疲勞

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5；S791.38 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439—8114（2012）19—4342—02

機(jī)體劇烈運(yùn)動(dòng)后會(huì)產(chǎn)生大量H+、自由基、乳酸等影響細(xì)胞正常代謝的物質(zhì)，從而導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生運(yùn)動(dòng)性疲勞[1]。如果不能及時(shí)有效地消除疲勞，不僅會(huì)影響體育鍛煉的健身效果，嚴(yán)重時(shí)還有可能引起機(jī)體的病理性變化，使機(jī)體健康受到一定程度的損害。體外實(shí)驗(yàn)證明，類(lèi)黃酮具有自由基抑制活性，且不同種類(lèi)的類(lèi)黃酮對(duì)自由基清除作用不同[2]。側(cè)柏（Platycladus orientalis）系柏科側(cè)柏屬常綠喬木，在中國(guó)分布極廣，其含有的黃酮類(lèi)化合物、鞣質(zhì)和揮發(fā)油等有效成分具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗氧化等作用[3]。研究側(cè)柏葉黃酮體內(nèi)抗運(yùn)動(dòng)性疲勞作用及其對(duì)疲勞小鼠自由基代謝的影響，可為純天然抗疲勞藥物的開(kāi)發(fā)提供理論及技術(shù)保證。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

挑選清潔級(jí)雄鼠30只作為試驗(yàn)動(dòng)物，由江西省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

側(cè)柏葉粗粉，市售；無(wú)水乙醇、正丁醇和乙酸乙酯均為分析純?cè)噭?；水為蒸餾水。WF—4000C常壓微波快速反應(yīng)系統(tǒng)（上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司）；EYELAN—1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化器械株式會(huì)社）；SHZ—JⅡA循環(huán)水式真空泵等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 側(cè)柏葉中黃酮類(lèi)化合物的提取[4] 稱(chēng)取10 g側(cè)柏葉粗粉，加入石油醚適量，加熱回流1 h脫脂。揮干溶劑后按1∶20的體積比加入體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液，以385 W的微波功率處理30 s，間隔60 s后再處理30 s，共處理4 min，趁熱抽濾。按同樣條件重復(fù)提取1次，合并濾液，減壓蒸餾乙醇得浸膏。將浸膏依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空濃縮至干，得淡黃色粉末，即為側(cè)柏葉中黃酮類(lèi)化合物。

1.2.2 側(cè)柏葉黃酮抗疲勞性能的測(cè)定 設(shè)側(cè)柏葉黃酮低劑量組（1.0 g/kg）、高劑量組（2.0 g/kg）兩個(gè)處理組，每組10只小鼠，按相應(yīng)劑量經(jīng)口灌胃，連續(xù)灌藥30 d，并設(shè)置對(duì)照組。小鼠均籠養(yǎng)，正常飲食，每周稱(chēng)體重1次，末次給藥1 h后將對(duì)照組、黃酮實(shí)驗(yàn)組小鼠尾根縛以自身體重5%的重物，讓其在50 cm×50 cm×40 cm、水深（30±2）cm的水槽中游泳，室溫22～24 ℃、水溫30 ℃，觀察并記錄小鼠入水游泳至力竭時(shí)間（力竭標(biāo)準(zhǔn)是小鼠沉入水底10 s不浮出水面，撈出后在平面不能進(jìn)行翻正反射[5]）。運(yùn)動(dòng)后正常飲食，休息24 h后用脫頸法處死。

1.2.3 生理指標(biāo)的測(cè)定 ①小鼠血清尿素氮（BUN）含量的測(cè)定。建立小鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞模型后，在其休息24 h后采血，血液于4 ℃冰箱靜置2 h，2 500 r/min離心15 min，取血清，采用二乙酰一肟法測(cè)定BUN含量。②小鼠肝組織SOD和MDA含量的測(cè)定。小鼠造模后處死，精確稱(chēng)取固定部位肝組織，以9 mg/mL NaCl溶液沖洗后用濾紙吸干，準(zhǔn)確稱(chēng)量0.5 g置于試管中，加入5 mL預(yù)冷的9 mg/mL NaCl溶液于試管中，用組織勻漿機(jī)制成0.1 g/mL的勻漿，3 500 r/min離心15 min，取上清，測(cè)定MDA含量。用預(yù)冷的9 mg/mL NaCl溶液將0.1 g/mL的肝勻漿配制成10 mg/mL的肝勻漿，靜置，取上清，測(cè)定SOD的含量。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析 所有數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS 14.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 側(cè)柏葉黃酮對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響

各處理組小鼠力竭游泳時(shí)間測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1，可以看出，運(yùn)動(dòng)對(duì)照組小鼠力竭游泳時(shí)間極顯著短于側(cè)柏葉黃酮處理組（P<0.01），且側(cè)柏葉黃酮高劑量組小鼠力竭游泳時(shí)間極顯著長(zhǎng)于低劑量組（P<0.01）。

2.2 側(cè)柏葉黃酮對(duì)小鼠生理指標(biāo)的影響

灌胃?jìng)?cè)柏葉黃酮后小鼠的各項(xiàng)生理指標(biāo)測(cè)定結(jié)果如表2所示。與對(duì)照組相比，側(cè)柏葉黃酮處理組小鼠的BUN含量均顯著降低（P<0.05），肝組織SOD含量極顯著升高（P<0.01），MDA含量顯著降低（P<0.05），但側(cè)柏葉黃酮高劑量組和低劑量組小鼠各項(xiàng)生理指標(biāo)差異不顯著（P>0.05）。

3 小結(jié)與討論

運(yùn)動(dòng)性疲勞是機(jī)體經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)動(dòng)后，生理和心理過(guò)程不能保持特定水平的機(jī)能和維持預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度，從而導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)能力下降的一種狀態(tài)[6]。有關(guān)運(yùn)動(dòng)性疲勞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著運(yùn)動(dòng)時(shí)間的延長(zhǎng)，體內(nèi)可利用的CP、ATP、糖原、血糖等能源物質(zhì)減少，機(jī)體不得不動(dòng)員分解脂肪，產(chǎn)生脂肪酸供能，甚至分解蛋白質(zhì)，代謝產(chǎn)能并生成BUN，以彌補(bǔ)體內(nèi)能量物質(zhì)的不足[7]。運(yùn)動(dòng)耐力的提高是抗疲勞能力加強(qiáng)最有力的宏觀表現(xiàn)，游泳時(shí)間的長(zhǎng)短可以反映動(dòng)物的耐運(yùn)動(dòng)疲勞能力。研究表明，機(jī)體BUN含量隨運(yùn)動(dòng)負(fù)荷的增加而增加，機(jī)體對(duì)負(fù)荷適應(yīng)能力越差，BUN增加越明顯[8]。而此次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小鼠灌服側(cè)柏葉黃酮提取液后，力竭游泳時(shí)間極顯著延長(zhǎng)，BUN含量顯著降低，說(shuō)明側(cè)柏葉黃酮能夠在一定程度上增強(qiáng)機(jī)體的抗疲勞能力。

研究發(fā)現(xiàn)，自由基與運(yùn)動(dòng)性疲勞有著密切的關(guān)系，是導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)性疲勞的重要原因。MDA是活性氧自由基對(duì)生物細(xì)胞膜上多不飽和脂肪酸氧化的產(chǎn)物，MDA含量增加，干擾生物細(xì)胞膜上多種酶的空間結(jié)構(gòu)，從而產(chǎn)生細(xì)胞膜廣泛性損傷及病變，影響細(xì)胞膜的正常功能，通常以MDA代表自由基產(chǎn)生的數(shù)量[9]。SOD是體內(nèi)主要自由基清除酶，能夠有效地清除并終止超氧陰離子引發(fā)的連鎖反應(yīng)[10]。本實(shí)驗(yàn)中側(cè)柏葉黃酮能顯著降低小鼠肝組織中MDA的含量，且肝組織中SOD含量極顯著升高，表明側(cè)柏葉黃酮抗疲勞作用有可能是通過(guò)降低機(jī)體中自由基的產(chǎn)生而實(shí)現(xiàn)的。

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