3種消毒劑對煙草漂浮育苗中TMV的鈍化效果

摘要：為指導煙草（Nicotiana tabacum L.）漂浮育苗中剪葉工具和舊苗盤消毒劑的使用，采用半葉法測定了3種消毒劑對煙草普通花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）病葉汁液和病苗干根、干葉中TMV的鈍化效果，同時運用葉面噴霧法測定了消毒劑常用濃度下煙苗的藥害發生率和癥狀。結果表明，兆冠50倍稀釋液處理20 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒、50倍稀釋液可完全鈍化病苗風干的細側根和葉片細條中的病毒；錦鈺50倍稀釋液處理5 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒、50倍稀釋液可完全鈍化病苗風干的細側根和葉片細條中的病毒；金百萬20倍稀釋液處理20 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒、20倍稀釋液可完全鈍化病苗風干的細側根和葉片細條中的病毒。常用濃度下金百萬基本不產生藥害；錦鈺和兆冠易產生藥害，癥狀主要表現為退綠斑點、壞死和葉片畸形。

關鍵詞：煙草（Nicotiana tabacum L.）；漂浮育苗；煙草普通花葉病毒（TMV）；消毒劑；藥害

中圖分類號：S572 文獻標識碼：A 文章編號：0439—8114（2012）19—4280—04

目前煙草（Nicotiana tabacum L.）漂浮育苗技術已在我國煙草生產中得到廣泛應用，漂浮育苗的一個突出病害就是由煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）引起的煙草花葉病毒病[1]。在煙草漂浮育苗過程中，TMV污染的苗盤和剪葉工具是煙草普通花葉病毒的重要初侵染源[2]。生產上使用的育苗盤具有多孔特性，清洗和消毒較困難，常常黏附有煙苗殘體，而TMV在病殘體和環境中穩定性強，可在干殘體中存活多年[3]；同時在煙草育苗期間需剪葉3～5次，且育苗集中度高，一旦有毒源存在，很容易傳播，造成病毒大面積侵染。因此，篩選安全、有效的消毒劑對煙草漂浮育苗中病毒病的防控具有重要意義。

前人對育苗過程中的剪葉工具和池水消毒劑分別進行過篩選[4—6]，評價了蒸汽[7]、部分藥劑對舊漂浮盤殘留物中TMV的鈍化效果[8]，但未對有效消毒劑同時進行病苗殘留物（根、葉）和剪葉工具中的TMV鈍化效果評價，而消毒劑如能同時用于苗盤和剪葉工具消毒，在實際生產上將更為經濟和方便。結合生產實際，選用3種消毒劑模擬剪葉工具和舊育苗盤病苗殘留物消毒，比較3種消毒劑鈍化病葉汁液和病苗干根、葉中TMV的效果及在常用濃度下接觸煙苗的藥害癥狀，以期為煙草漂浮育苗消毒劑的選擇和科學使用提供依據。

1 材料與方法

1.1 消毒劑

聚維酮碘水溶劑（金百萬），北京東旺農藥廠；10%的二氧化氯粉劑（兆冠），濰坊兆冠化工有限公司；中性消毒粉劑（錦鈺），貴州遵義泉通化工有限公司。消毒劑現用現配。

1.2 供試煙草和病毒

供試煙草品種K326和Coker 176由貴州省煙草科學研究所提供。K326、Coker 176按常規育苗規程進行管理，K326于成苗期進行藥害試驗；Coker 176成苗后于室內防蟲網盆栽，7～8片葉時用于接種，接種前打頂，去除其他葉片，保留生長整齊一致的3～4片葉；TMV毒源由貴州省煙草科學研究所保存。

1.3 TMV體外抑制效果測定

稱取2 g典型TMV病葉，加去離子水和600目金剛砂研磨并稀釋100倍，用滅菌紗布過濾后取上清做接種病液。將一定濃度的消毒劑稀釋液與TMV病葉汁液等量混合，室溫分別接觸5、20 min后摩擦接種，接種前噴灑適量金剛砂于葉片表面。左半葉接種去離子水處理的TMV病葉汁液（對照），右半葉接種經消毒劑處理的TMV病葉汁液，每半片葉接種200 μL。接種后清水噴霧沖洗葉面，重復3次。接種5～7 d后統計枯斑數（6個半葉的平均值），計算抑制率。

抑制率=[1—（處理平均枯斑數/對照平均枯斑數）]×100%。

1.4 病苗干根和干葉的消毒劑浸泡處理

根據1.3的試驗結果，選用病葉汁液病毒抑制率達100%的消毒劑濃度模擬舊育苗盤的消毒。將風干的TMV病苗的細側根和葉細條置于小燒杯中，分別加入材料鮮重20倍體積的消毒液浸泡20 min，倒去消毒液，用塑料薄膜密封燒杯口，放置2 d后加入材料鮮重20倍體積的去離子水研磨，過濾取上清液人工接種；對照加入去離子水，其余同處理。

1.5 藥害試驗

采用160孔苗盤育苗，常規管理，在煙苗成苗期進行試驗。消毒劑設200倍、400倍稀釋液兩個濃度，每一濃度消毒劑設兩種處理，施藥5 min后清水噴霧沖洗（W）和施藥后不用清水沖洗（NW），每處理160株煙苗。采用手持噴霧器每盤噴施消毒液7～8 mL，葉面霧滴均勻無流失。以去離子水處理為對照，藥后第7天調查顯癥株數和藥害癥狀，調查時無明顯侵染性病害癥狀的不正常現象均記錄為藥害癥狀。

藥害率=（顯癥株數/總株數）×100%。

1.6 消毒液的腐蝕作用觀察

把鐵釘、銅絲和漂浮盤泡沫塑料放入玻璃器皿內，分別加入金百萬、兆冠、錦鈺100倍稀釋液和自來水密封浸泡，1、3、5 d后觀察腐蝕結果。

2 結果與分析

2.1 消毒劑對TMV的體外抑制效果

不同稀釋倍數消毒劑與等量病葉汁液混合并放置一定時間后接種Coker 176，以測試消毒劑對TMV的鈍化效果。由表1可知，在消毒劑50、100、400、800倍稀釋液條件下，混合液接觸5 min后接種，兆冠對TMV的抑制率分別為95.80%、68.88%、28.20%、4.31%，錦鈺對TMV的抑制率分別為100.00%、76.10%、72.08%、53.04%；混合液接觸20 min后接種，兆冠對TMV的抑制率分別為100.00%、84.82%、46.09%、45.11%，錦鈺對TMV的抑制率分別為100.00%、81.01%、75.18%、59.09%；在20、100、400、800倍稀釋液條件下，混合液接觸5 min后接種，金百萬對TMV的抑制率分別為93.83%、61.19%、28.67%、10.81%；混合液接觸20 min后接種，金百萬對TMV的抑制率分別為100.00%、73.67%、49.74%、43.39%。消毒劑對病毒的抑制率均隨使用濃度的降低而下降。

2.2 消毒劑對病苗干根和干葉中TMV的抑制效果

根據2.1的試驗結果，在稀釋20～50倍的高濃度條件下，測試了3種消毒劑對帶毒煙苗干根和干葉的鈍化效果。結果表明，錦鈺50倍稀釋液、兆冠50倍稀釋液和金百萬20倍稀釋液處理2 d后可完全滅活病苗干根和干葉中的病毒。

2.3 常用濃度下3種消毒劑對煙苗的藥害情況

施藥7 d后調查常用濃度下3種消毒劑對K326的藥害情況，結果見表2。從表2可以看出，在200倍、400倍稀釋液處理下（產品推薦使用濃度），施兆冠后不用清水沖洗藥害率分別為95.7%和88.6%，藥后用清水沖洗藥害率分別為7.1%和2.9%；施錦鈺后不用清水沖洗藥害率分別為71.4%和42.9%，藥后用清水沖洗藥害率分別為2.9%和0；施金百萬不用清水沖洗藥害率分別為4.3%和0，藥后用清水沖洗煙苗正常。錦鈺主要引起煙苗出現退綠斑點，一般不產生畸形和壞死；兆冠可導致煙苗出現畸形和壞死，葉片多產生褐色斑點；金百萬對煙苗基本不產生藥害。表明煙苗對兆冠和錦鈺兩種消毒劑均較敏感，易產生藥害，在相同藥液濃度下錦鈺藥害程度輕于兆冠，在生產上兩者均不宜用作煙苗直接消毒和育苗池水消毒。

2.4 消毒劑對鐵釘、銅絲和漂浮盤泡沫塑料的腐蝕作用

消毒劑均使用100倍稀釋液，與自來水相比，兆冠100倍稀釋液對鐵釘、銅絲具有較強的腐蝕作用，1 d后觀察即可見明顯的腐蝕現象，隨時間的延長腐蝕加劇且嚴重，漂浮盤泡沫塑料無明顯的腐蝕現象；錦鈺100倍稀釋液在浸泡1 d后觀察無明顯的腐蝕現象，3 d后觀察可見鐵釘、銅絲有腐蝕現象，隨時間延長腐蝕加劇，對漂浮盤泡沫塑料無明顯腐蝕作用；金百萬對漂浮盤泡沫塑料無腐蝕作用，浸泡3 d后對鐵釘和銅絲有一定的腐蝕作用，程度輕于錦鈺和兆冠。表明消毒劑對金屬類材料均有一定的腐蝕作用，應用時不宜用金屬類器具長時間盛放藥液，若使用噴霧器噴施，用藥后應立即清洗噴霧器。

3 小結與討論

在危害煙草的諸多種病毒中，就病毒的體外保毒期、稀釋限點[2]、鈍化溫度和傳播方式比較而言，TMV是最頑固、最容易通過剪葉等途徑傳播的病毒，通過測定消毒劑對TMV的抑制效果，對于指導生產中利用消毒劑防治其他常見煙草漂浮育苗的病毒是可行的[4，5]。酶聯免疫法是病毒檢測最為常用的方法，但病毒粒子滅活、鈍化后仍具有抗原性，同時消毒劑可干擾檢測，因此試驗通過寄主枯斑的抑制率來評價消毒劑對TMV的抑制效果。

兆冠50倍稀釋液處理20 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒，50倍稀釋液處理2 d可完全鈍化煙苗風干的細側根和葉片細條中的病毒；錦鈺50倍稀釋液處理5 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒，50倍稀釋液處理2 d可完全鈍化風干的煙苗細側根和葉片細條中的病毒；金百萬20倍稀釋液處理20 min可完全鈍化病葉汁液中的病毒，20倍稀釋液處理2 d可完全鈍化煙苗風干的細側根和葉片細條中的病毒。錦鈺和兆冠消毒劑對煙苗均易產生藥害、對金屬類材料均有一定的腐蝕作用。從3種消毒劑對病毒的鈍化效果來看，從大到小為錦鈺、兆冠、金百萬；就消毒劑對煙苗的藥害程度和對金屬類材料的腐蝕作用來看，金百萬優于兆冠和錦鈺。

試驗使用的病毒濃度較高（2 g TMV病葉加去離子水和600目金剛砂研磨后稀釋100倍），實際生產中剪葉工具、苗盤和人為操作的帶毒濃度遠低于試驗濃度，因此試驗確定的消毒劑使用濃度和使用時間在實際應用中是可靠的。根據試驗結果，綜合考慮消毒對象可能存在的病毒量、使用成本等因素，錦鈺和兆冠對育苗盤、剪葉工具和育苗場地的消毒應不低于100、150和500倍稀釋液的濃度；金百萬對育苗盤、剪葉工具和育苗場地的消毒應不低于50、100和400倍稀釋液的濃度。為保證徹底殺滅病毒，3種消毒劑對育苗盤、剪葉工具的接觸時間應不低于20 min。錦鈺和兆冠對煙苗可產生一定的藥害現象，生產上均不宜用作煙苗直接消毒和育苗池水消毒，只可用于育苗盤、剪葉工具和育苗場地的消毒。試驗中金百萬對煙苗基本不產生藥害，但未涉及施用金百萬對煙苗生長和育苗池水的影響，因此是否能用于煙苗直接消毒及育苗池水消毒還有待研究。3種消毒劑對金屬類材料均有一定的腐蝕作用，應用時不宜用金屬類器具長時間盛放藥液，若使用噴霧器噴施，用藥后應立即清洗噴霧器。

在漂浮育苗過程中，使用消毒劑進行煙草病毒病的防治只是諸多手段之一，同時上述方法還需要田間試驗進一步完善和驗證。

參考文獻：

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