高效液相色譜法測定飼料中的吡啶甲酸鉻

摘要：建立了高效液相色譜法測定飼料中吡啶甲酸鉻的方法，采用C18 反相柱，以乙腈和磷酸二氫鈉水溶液（用0.1 mol/L氫氧化鈉調至pH 8.5）（10∶90，V/V）為流動相，263 nm處檢測。吡啶甲酸鉻在2.5～0.8 μg范圍內色譜峰面積與進樣量呈良好線性關系，相關系數（R2）為0.999 7；加標回收率為98.3%，相對標準偏差（RSD）為0.69%。該方法具有較高的分離率、準確度、精密度和靈敏度，能對飼料中的吡啶甲酸鉻進行準確的測定，適合飼料生產企業使用。

關鍵詞：吡啶甲酸鉻；高效液相色譜；飼料

中圖分類號：O657.7 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2012）23-5467-02

Determination of Chromium Picolinate in Feed by HPLC

YANG Jie1，HUANG Jian-xiong2，YAN Fu2

（1. Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology Research， Hubei Academy of Agricultural Sciences， Wuhan 430064， China； 2. Hubei Shenzhou Chemical Co.， Ltd.， Yingcheng 432405， Hubei， China）

Abstract： Analysis of chromium picolinate in feed by high efficiency liquid chromatography（HPLC） was established. Chromium picolinate was separated in C18 reversed-phase column with the mobile phase of acetonitrile and sodium dihydrogen phosphate water solution （10∶90， V/V）（pH 8.5 adjusted by 0.1 mol/L NaOH）， and detected at 263 nm. The results showed a good performance was at linear relation of chromatographic peak area and sample size when chromium picolinate was at range of 2.5～0.8 μg， correlation coefficient R2 was 0.999 7， recovery rate reached 98.3% and RSD was 0.69%. It showed a good result in separating effect， accuracy， precision and sensitivity， and provided quantitative determination of chromium picolinate in feed. The method is suitable for corporations which produce feed.

Key words： chromium picolinate； high efficiency liquid chromatography（HPLC）； feed

鉻是人和動物必需的微量元素，鉻分為無機鉻和有機鉻。無機鉻（如硫酸鉻、三氯化鉻等）生物活性非常低，生物利用率只有0.4%～3.0%，而有機鉻的生物利用率達到10%～25%[1]。目前市場上有機鉻主要有吡啶甲酸鉻、酵母鉻、煙酸鉻。吡啶甲酸鉻又稱吡啶羧酸鉻，是吡啶甲酸與鉻化合物的絡合物，分子式為Cr（C6H4NO2）3，分子量為418.33，系紫紅色結晶性細小粉末，流動性良好，常溫下穩定，微溶于水，不溶于乙醇。其中鉻為三價鉻，可順利通過細胞膜直接作用于組織，能增強胰島素活性，改善人體糖代謝；促進動物生長、蛋白質合成、性腺發育，提高排卵質量、繁殖性能等效果，并且毒性甚微，使用安全，目前被認為是人類最好的補鉻制劑和畜禽補鉻的理想添加劑，同時還是有機鉻中惟一得到美國國家安全認可的鉻化合物[2]，主要應用于醫藥、保健食品和飼料添加劑[3]。目前對吡啶甲酸鉻含量測定多見于保健食品中[4-6]，對飼料中吡啶甲酸鉻的含量測定方法則鮮見報道。本研究對飼料中吡啶甲酸鉻用高效液相色譜法進行研究，方法簡便、快速、靈敏度高，適用于飼料生產企業中吡啶甲酸鉻的質量控制。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters高效液相色譜儀，配置1525二元高壓泵、2707自動進樣器、2489紫外檢測器、Breeze2色譜工作站。

吡啶甲酸鉻標準品為美國USP公司產品，純度99.9%；甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸二氫鈉為優級純，其余試劑均為分析純。樣品系湖北神舟化工有限公司生產。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Xbridge TM C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），檢測波長263 nm，流動相，乙腈∶0.1 mol/L磷酸二氫鈉水溶液（用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調至pH=8.5）=10∶90（V/V），流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量10 μL，分析時間20 min。

1.2.2 標準溶液的配制 稱取吡啶甲酸鉻標準品25.0 mg置于25 mL量瓶中，加甲醇充分溶解后，用pH 8.5的水溶液（用濃度為0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調節）定容，搖勻，吸取該溶液3 mL移入25 mL容量瓶中，用pH 8.5的水溶液定容，搖勻，備用。

1.2.3 樣品溶液的制備 稱取樣品1.250 0 g用甲醇充分溶解后，用pH 8.6的水溶液定容到25 mL容量瓶中，超聲波提取5 min，用針頭過濾器過濾，吸取該溶液1 mL至25 mL容量瓶中，用pH 8.5的水溶液定容，搖勻，備用。

2 結果與分析

2.1 檢測波長的確定

稱取吡啶甲酸鉻標樣適量，按“1.2.2” 項下配制標準溶液，于200～400 nm波長范圍內掃描，在263 nm處有最大吸收，故選263 nm為檢測波長，在該波長處檢測靈敏度較高。

2.2 流動相的選擇

對吡啶甲酸鉻進行液相色譜分析時，如采用甲醇-水流動相體系，保留時間為2.72 min[7]，分離效果明顯不如使用乙腈-磷酸鹽緩沖溶液體系，選擇了乙腈-磷酸鹽緩沖溶液作為流動相，在試驗中觀察到吡啶甲酸鉻在中性條件下有離解的現象發生（圖1），吡啶甲酸鉻在有水的環境中可轉化為吡啶甲酸和吡啶酸鉻二聚體，考慮到很多金屬離子的絡合物需在堿性條件下才能穩定，經試驗在高pH條件下樣品不再發生變化（圖2），故選定乙腈-磷酸二氫鈉水溶液（0.1 mol/L用氫氧化鈉調至pH 8.5）（10∶90，V/V）為流動相。

2.3 標準曲線制作

按“1.2.2”項配制濃度為0.08、0.10、0.15、0.20、0.25 mg/mL吡啶甲酸鉻標準溶液，在給定的儀器條件下進行液相色譜分析，測得各吡啶甲酸鉻標準溶液的相關峰面積。回歸方程為y=78.3x-38 300.0；相關系數（R2）為0.999 7，結果表明吡啶甲酸鉻在2.5～0.8 μg范圍內色譜峰面積與進樣量呈良好的線性關系。標樣圖譜見圖2。保留時間為6.072 min。

2.4 精密度試驗結果

在“1.2.1” 項色譜條件下，取濃度為0.1 mg/mL吡啶甲酸鉻的標準溶液重復5次進樣，進樣量均為10 μL，峰面積的RSD為0.69%。

2.5 加標回收率試驗結果

將樣品分成5份，分別加入不同濃度標準品，每個濃度做3個平行樣，平均回收率為98.3%，結果見表1。

2.6 其他成分對測定結果的影響

取不含吡啶甲酸鉻的空白飼料樣品，按照“1.2.3”項處理后進樣，結果表明飼料中其他成分對吡啶甲酸鉻的含量測定均沒有干擾（見圖3）。測定3批吡啶甲酸鉻飼料中吡啶甲酸鉻的含量分別為9.85%、10.03%、10.26%。

3 小結

綜上所述，用HPLC法測定飼料中吡啶甲酸鉻的含量，方法回收率高，線性關系良好，準確度、精密度良好。該方法結合具體生產產品及企業儀器狀況制定而成，適用于飼料生產企業中吡啶甲酸鉻的質量控制。

參考文獻：

[1] SANO H， MOWAT D N， BALL R O， et al. Effect of supplemental chromium on whole-body kinetics of glucose， lactate， and propionate in rams fed a high grain diet[J]. Biochemistry Molecular Biology，1997，118（1）：117-121.

[2] 郭 亮，張敏紅.吡啶甲酸鉻的毒理學安全性研究進展[J].飼料博覽（技術版），2008（5）：22-24.

[3] 李致寶，韋少平，夏中生，等.吡啶甲酸鉻的研究概述及其應用進展[J].化工技術與開發， 2011，40（7）：11-14.

[4] 王美菡，李 敏，孫海燕，等.高效液相色譜法測定保健食品中吡啶甲酸鉻含量[J].中國衛生檢驗雜志，2003，13（5）：617-618.

[5] 龍軍標，梁旭霞.高效液相色譜法測定保健食品中的吡啶甲酸鉻[J].華南預防醫學，2005，31（4）：46-47.

[6] 廖一民.保健食品中吡啶甲酸鉻的高效液相色譜測定法[J].預防醫學情報，2005，21（6）：751-753.

[7] NY/T 916-2004，飼料添加劑 吡啶甲酸鉻[S].

（責任編輯 胡西洲）