前列腺癌組織中泛素偶聯酶E2C、蛋白激酶B表達及其與預后相關性

鄧蘭，廖堃，付琴，徐苓傈，何其英

前列腺癌是男性泌尿生殖系統最常見惡性腫瘤之一，隨著我國人口老齡化趨勢日漸加劇，前列腺癌發病率逐年上升，對男性健康及生命安全造成嚴重威脅［1-2］，尋找有效的前列腺癌藥物治療靶點對于提高病人預后具有重要臨床意義。泛素偶聯酶E2C（ubiquitin-conjugating enzyme E2C，UBE2C）又名泛素結合酶10，是泛素偶聯酶（ubiquitin-conjugating enzyme，E2）家族中第十個被識別的成員，其基因定位于染色體20q12.13，該染色體區與多種癌基因的擴增有關［3-4］。UBE2C主要功能是通過與泛素激活酶（ubiquitin-activating enzyme，E1）、泛素連接酶（ubiquitin ligases，E3）協同作用，促進靶蛋白泛素化，同時還具有調節細胞周期中關鍵蛋白的降解，調控有絲分裂紡錘體檢查點的作用［5］。蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/AKT）是一種蛋白激酶，有AKT1、AKT2、AKT3三個成員，AKT1定位于人染色體14q32區域，在多種惡性腫瘤中異常活躍，可對腫瘤細胞的生長、增殖產生促進作用，已成為抗腫瘤藥物的重要研究靶點。已有研究表明UBE2C、AKT1與前列腺癌有關［6-7］，本研究旨在通過分析UBE2C、AKT1在前列腺癌組織中的表達及與預后的相關性，以期為前列腺癌的病情及預后評估提供臨床參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2014年1月至2016年12月四川大學華西醫院泌尿外科研究所收集的92例前列腺癌組織（前列腺癌組）、70例良性前列腺增生組織（良性前列腺增生組）進行研究。前列腺癌組根據Gleason評 分 可 分 為：Gleason評 分＜7分 者21例，Gleason評分≥7分者71例；根據TNM分期可分為：Ⅰ、Ⅱ期36例，Ⅲ、Ⅳ期56例；根據有無淋巴結轉移分為：無淋巴結轉移17例，伴淋巴結轉移75例；根據術前前列腺特異抗原（prostate specificantigen，PSA）水平可分為：PSA≤10 μg/L者37例，PSA＞10 μg/L者55例。納入標準：（1）經病理學檢查確診；（2）行前列腺癌根治術；（3）術前未接受放療、化療等其他治療。排除標準：（1）合并其他惡性腫瘤者；（2）合并心、肝等臟器嚴重疾病者；（3）復發性前列腺癌者；（4）臨床資料不完整。依據隨訪結果將前列腺癌組分為兩組，預后良好組（68例）、預后不良組（24例）。三組年齡、體質量指數（BMI）相比，均差異無統計學意義（P＞0.05）。所有研究對象或其直系親屬簽署知情同意書，本研究所用方法符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 方法

1.2.1 Gleason評分 采用Gleason分級系統對前列腺癌進行組織學分級，將前列腺癌組織分為主要分級區及次要分級區，兩區相加即為Gleason評分。每區Gleason分級均為1～5級，1級為分化最好，臨床少見，腫瘤結節界限清楚，呈致密排列，無浸潤；2級為分化較好，腺體排列較為疏松，存在微小浸潤；3級為分化中等，臨床最為常見，腺體大小不均，形態各異，存在較多浸潤；4級為分化較差，腺體融合、呈篩狀，或無腺體結構；5級為未分化，無腺體結構，癌細胞為實體片狀或條索狀，鄰近組織存在廣泛浸潤［8］。

1.2.2 組織中UBE2C、AKT1表達檢測 組織標本均為石蠟包埋，4 μm厚度連續切片，采用免疫組織化學法檢測不同組織中UBE2C、AKT1表達，試劑盒均購于武漢博士德生物工程有限公司。由兩位有經驗的病理科醫生采用雙盲法進行閱片，UBE2C、AKT1主要定位于胞質中，鏡下出現黃色或棕色顆粒的細胞即為陽性細胞，每張切片于高倍視野下隨機選取10個視野，每個視野內計數100個腫瘤細胞，根據細胞陽性率及染色程度的乘積計分。細胞陽性率計分準則：陽性率＜5%計為0分，5%≤陽性率＜25%計為1分，25%≤陽性率＜50%計為2分，50%≤陽性率＜75%計為3分，陽性率≥75%計為4分。細胞染色程度計分標準：未染色計為0分，淡黃色計為1分，黃色計為2分，棕褐色計為3分。總分＜3分為陰性，總分≥3分為陽性，其中3分≤總分＜6分為低表達，總分≥6分為高表達。

1.2.3 隨訪 以術后第1天開始計算隨訪日期，采用電話、門診或住院方式進行，為期36個月，術后第1年每3個月隨訪1次，之后每6個月1次，以前列腺癌病人出現轉移、復發或死亡為終點事件，未出現終點事件者為預后良好，出現終點事件者為預后不良。

1.3 統計學方法采用SPSS 17.0統計學軟件分析數據。計數資料以例（%）表示，采用χ2檢驗或Fisher確切概率法；采用Cox回歸模型分析前列腺癌病人預后影響因素。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織UBE2C、AKT1陽性表達率比較與良性前列腺增生組相比，前列腺癌組UBE2C、AKT1陽性表達率均較高（P＜0.05），見表1。

表1 前列腺癌92例與良性前列腺增生70例UBE2C、AKT1陽性表達率比較/例（%）

2.2 前列腺癌組UBE2C、AKT1表達與病人臨床病理特征關系前列腺癌組UBE2C表達與年齡、TNM分期、術前PSA水平均無關（P＞0.05），與Gleason評分、淋巴結轉移均有關（P＜0.05），AKT1表達與年齡、淋巴結轉移無關（P＞0.05），與Gleason評分、TNM分期、術前PSA水平均有關，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 前列腺癌92例UBE2C、AKT1表達與病人臨床病理特征關系/例（%）

2.3 UBE2C、AKT1表達與前列腺癌病人預后關系分析與預后良好組相比，預后不良組UBE2C、AKT1陽性表達率均較高（P＜0.05），見表3。

表3 前列腺癌92例的UBE2C、AKT1表達與預后關系分析/例（%）

2.4 影響前列腺癌病人預后狀況的危險因素分析將臨床認為與前列腺癌病人預后狀況有關的因素及UBE2C、AKT1指標納入COX回歸分析。以前列腺癌病人預后狀況作為因變量，以年齡、Gleason評分、TNM分期、淋巴結轉移、術前PSA水平、UBE2C表達、AKT1表達為自變量進行COX回歸分析，將年齡≤50歲、Gleason評分＜7分、Ⅰ/Ⅱ期TNM分期、無淋巴結轉移、術前PSA水平≤10 μg/L、UBE2C低表達、AKT1低表達均賦值為0，相應地將年齡＞50歲、Gleason評分≥7分、Ⅲ/Ⅳ期TNM分期、伴淋巴結轉移、術前PSA水平＞10 μg/L、UBE2C高表達、AKT1高表達均賦值為1。COX單因素分析結果顯示，年齡均差異無統計學意義（P＞0.05），Gleason評分、TNM分期、淋巴結轉移、術前PSA水平、UBE2C、AKT1均差異有統計學意義（P＜0.05）；COX多因素分析結果顯示，Gleason評分≥7分、Ⅲ/Ⅳ期、伴淋巴 結 轉移、術前PSA水平＞10 μg/L、UBE2C高表達、AKT1高表達均是影響前列腺癌病人預后狀況的獨立危險因素（P＜0.05），見表4，5。

表4 影響前列腺癌92例預后狀況的單因素分析結果

3 討論

泛素化是細胞內靶蛋白降解的重要機制，泛素-蛋白酶體通路包含E1、E2、E3，UBE2C是E2家族中研究廣泛的重要成員，與肺癌、乳腺癌、結直腸癌等腫瘤關系密切［9-10］。正常生理狀態下，UBE2C為低表達，在多數正常組織中幾乎難以檢測到，其過表達能夠促進腫瘤細胞的增殖、遷移及侵襲，抑制UBE2C表達，腫瘤細胞增殖明顯減緩，凋亡加快［11-12］。研究發現，UBE2C能夠促進肺癌細胞的增殖、遷移，可促進細胞有絲分裂進程，降解細胞周期相關蛋白，進而調節細胞周期進程。另有研究發現，沉默神經膠質瘤細胞中UBE2C表達，可使PI3K-AKT-mTOR信號通路受到明顯抑制，進而誘導細胞自噬，促使細胞生存能力降低，UBE2C可能成為神經膠質瘤靶向治療的靶點［13-14］。UBE2C與前列腺癌的關系已引起研究者的關注，研究發現，敲減前列腺癌干細胞樣細胞中UBE2C的表達，能夠顯著抑制干細胞樣細胞中干性相關基因KLF4、SOX2、Oct4、Myc等表達，可能成為抑制前列腺癌干細胞樣細胞的治療靶點。本研究發現，與良性前列腺增生組相比，前列腺癌組UBE2C陽性表達率較高，提示UBE2C與前列腺癌的發生有關。進一步分析顯示，前列腺癌組UBE2C表達與年齡、TNM分期、術前PSA水平均無關，與Gleason評分、淋巴結轉移均有關，提示UBE2C可能由于評估前列腺癌病人病情嚴重程度。隨訪結果顯示，預后不良組與預后良好組相比，UBE2C陽性表達率較高，提示UBE2C與前列腺癌病人預后狀況密切相關。UBE2C參與前列腺癌發生及病情演變的原因可能是，前列腺癌中高表達的UBE2C可能通過調控泛素依賴蛋白代謝，破壞細胞有絲分裂周期蛋白，使細胞未能順利完成有絲分裂而迅速進入下一周期，加快腫瘤細胞增殖速度，發揮促癌基因作用。

表5 影響前列腺癌92例預后狀況的多因素分析結果

PI3K/AKT信號通路是信號由細胞外向細胞內傳遞的主要途徑之一，其異常活化可能是細胞增殖加快促進腫瘤發生、發展，已被證實與乳腺癌［15］、膠質母細胞瘤［16］等多種腫瘤密切相關。研究發現，上調前列腺細胞中miR-151a-3p的表達可降低PI3KAKT-mTOR信號通路蛋白表達，進而使前列腺癌細胞增殖、遷移受到抑制，可能為前列腺癌的靶向治療提供臨床參考依據［17］。新近研究發現，AKT1在乳腺癌、前列腺癌細胞的增殖及遷移中可能發揮不同于其他腫瘤的作用，激活AKT1可促進乳腺癌、前列腺癌細胞的增殖，但腫瘤遷移能力受到抑制，而抑制AKT1表達可使乳腺癌、前列腺癌的生長減緩，但遷移能力顯著增強，這給臨床用藥帶來了問題，廣譜的AKT抑制劑可能在抑制腫瘤細胞增殖的同時促進其轉移［18-19］。本研究發現，前列腺癌組較良性前列腺增生組AKT1陽性表達率高，提示AKT1可能參與前列腺癌的發生。前列腺癌病人AKT1表達與年齡、淋巴結轉移無關，與Gleason評分、TNM分期、術前PSA水平均有關，提示AKT1可能用于評估前列腺癌病人病情發展。隨訪結果顯示，與預后良好組相比，預后不良組AKT1陽性表達率較高，提示AKT1可能與前列腺癌病人預后狀況有關。COX回歸模型分析結果顯示，Gleason評分≥7分、Ⅲ/Ⅳ期、伴淋巴結轉移、術前PSA水平＞10 μg/L、UBE2C高表達、AKT1高表達均是影響前列腺癌病人預后狀況的獨立危險因素，提示可對合并危險因素的前列腺癌病人進行重點關注，并給予積極干預，以提高病人預后狀況。

綜上所述，UBE2C、AKT1與前列腺癌病人的病情發展及預后密切相關，可能為評估病情及預后提供臨床參考依據，但本研究也存在不足之處，本研究樣本量小，且隨訪時間短，在以后的工作中將以此為重點進行深入研究。