不同硒源及水平對肉雞組織硒含量及抗氧化功能的影響

田金可 Ahmad Hussain 李 偉 高 尚 王 恬

(南京農業大學動物科技學院，南京 210095)

硒作為谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的重要組分，是機體中一種必需的微量元素，它在細胞中的抗氧化作用類似于維生素E［1］。此外，硒在機體內還參與細胞和體液免疫及內分泌激素的調節［2］。在現代養殖業中，動物補硒一直使用的是價格低廉的無機硒源［以亞硒酸鈉(SS)為主］。但是它的生物利用率較低，毒性較大，而且動物排泄的硒易造成土壤和環境的污染［3］。甚至諸多報道認為，無機硒可能有過氧化特性［4-5］。因此，生物利用率更高、毒性更小的有機硒的應用受到了越來越多的關注。酵母硒(SY)就是其中一種，早在2001年就被美國食品和藥物管理局(FDA)批準用于豬飼糧中。有研究表明，動物飼糧中添加有機硒不但能夠降低硒排泄量，而且能夠增加動物體組織中硒的沉積量［1］。近年來，關于不同硒源對畜禽生產性能、組織硒沉積量、抗氧化功能及肉品質影響的報道較多，然而對不同硒源的比較應用效果的研究較少。為此，本試驗旨在研究并比較肉雞飼糧中添加不同硒源(亞硒酸鈉和酵母硒)及水平對機體組織硒含量和抗氧化功能的影響，并探討較低水平的有機硒替代無機硒的可行性。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

亞硒酸鈉(分析純)，硒含量為45.5%，天津市化學試劑研究所產品;酵母硒，硒含量為1 000 mg/kg，武漢新華揚生物股份有限公司提供。

AFS-310雙道原子熒光光度計，北京科創海光儀器有限公司生產;全波長酶標儀，美國Thermo Scientific公司生產;智能樣品處理器，北京萊伯泰科儀器有限公司生產。

1.2 試驗設計與飼糧配制

選用1日齡健康、體重相近(P＞0.05)的愛拔益加(AA)肉仔雞600只，按單因子完全隨機設計分為5組，每組6個重復，每個重復20只雞。對照組(Cont):飼喂基礎飼糧(不添加硒，測得硒含量為0.11 mg/kg);試驗1組(SS組):飼喂基礎飼糧+0.30 mg/kg硒(以亞硒酸鈉形式);試驗2組(SYⅠ組):飼喂基礎飼糧+0.20 mg/kg硒(以酵母硒形式);試驗3組(SYⅡ組):飼喂基礎飼糧+0.30 mg/kg硒(以酵母硒形式);試驗 4組(MS組):飼喂基礎飼糧 +0.30 mg/kg混合硒(0.15 mg/kg亞硒酸鈉 +0.15 mg/kg 酵母硒)。試驗期42 d，期間共進行2次稱重(21和42 d)，稱重前1天18:00斷料(不斷水)，第2天06:00空腹稱重和結料，分別計算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

基礎飼糧參照NRC(1994)標準配制，其組成及營養水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

每千克飼糧提供 One kilogram of the diets contained the following:Fe 60 mg，Cu 7.5 mg，Zn 65 mg，Mn 110 mg，I 1.1 mg，桿菌肽鋅 bacitracin zinc 30 mg，VA 4 500 IU，VD31 000 IU，VE 30 IU，VK 1.3 mg，VB12.2 mg，VB210 mg，VB310 mg，氯化膽堿 choline chloride 400 mg，VB550 mg，VB64 mg，生物素 biotin 0.04 mg，VB111 mg，VB121.013 mg。

1.3 飼養管理

飼養試驗在南京康欣禽業有限公司進行。試驗前對雛舍及器具進行沖洗和燒堿水噴霧消毒，福爾馬林和高錳酸鉀(每立方米加30 mL福爾馬林、15 g高錳酸鉀)熏蒸12 h，凈化1周后開始試驗。試驗雞采用籠養，自由采食和飲水，喂料遵循少喂勤添的原則。1～14 d溫度控制在32～34℃，以后每周下調2℃，直至26℃。12 h光照周期(06:00—18:00光照)。

1.4 樣品的采集與制備

分別于試驗第21天和第42天06:00(此前停飼12 h，自由飲水)每個重復隨機抽取1只雞，稱重后頸靜脈采血，收集于加有肝素鈉的試管中，4℃、3 500 r/min離心10 min制備血漿，-20℃保存備用。立即將雞只放血致死(注意要放血完全)，迅速剖開腹腔取出肝臟，剝離胸肌，裝入自封袋中。將肝臟和胸肌制成10%的組織勻漿液，于-20℃冰箱保存。

1.5 測定指標及方法

1.5.1 抗氧化功能指標的測定

血漿和肝臟中GSH-Px活性測定采用二硫代硝基苯甲酸法;總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性測定采用黃嘌呤氧化酶法;總抗氧化能力(T-AOC)測定采用菲啉比色法;過氧化氫酶(CAT)活性測定采用鉬酸銨比色法;丙二醛(MDA)含量測定采用硫代巴比妥比色法。上述指標的測定均采用商業化的試劑盒(南京建成生物工程研究所提供)，操作按試劑盒說明書進行。

1.5.2 組織硒含量的測定

參照GB/T 13883—2008的方法處理樣品并定容，同時分別用超純水和硒標準液做空白對照和標準參照物對照，利用氫化物發生-原子熒光光譜法測定飼糧、血漿、肝臟、肌肉中硒含量。

1.6 數據處理

采用SPSS 16.0統計軟件進行數據分析。所有數據均以平均值±標準誤表示。用one-way ANOVA比較各組間的差異。采用最小顯著極差法(LSD)對差異顯著的數據進行多重比較。

2 結果

2.1 不同硒源及水平對肉雞生長性能的影響

從表2可以看出，與對照組相比，飼糧添加0.30 mg/kg的有機硒(SYⅡ組)顯著降低了肉雞前期(1～21 d)的ADFI(P＜0.05);較對照組及無機硒組(SS組)，飼糧添加各水平有機硒(SYⅠ、SYⅡ和MS組)均顯著降低了全期(1～42 d)的ADFI(P ＜0.05或 P ＜0.01);同時，各添加有機硒組后期(22～42 d)的ADFI也有降低趨勢(P＞0.05)。雖各試驗組肉雞的ADG及F/G均無顯著變化(P＞0.05)，但F/G均在一定程度上低于對照組;其中，前期SS組和SYⅡ組、后期及全期SYⅠ組和MS組的F/G均較低。

2.2 不同硒源及水平對肉雞組織硒含量的影響

就前期而言，與對照組相比，SYⅠ組和SYⅡ組肉雞血漿中的硒含量均顯著提高(P＜0.05)，SYⅠ組肉雞肝臟中的硒含量顯著提高(P＜0.05);較對照組與SS組，MS組、SYⅠ組和SYⅡ組肉雞胸肌中的硒含量分別提高了107.69%、123.08%和176.92%(P ＜0.01);而較 SYⅠ組與MS組，SYⅡ組肉雞胸肌中的硒含量也顯著提高了(P＜0.01)。在試驗后期，與對照組、SS組和MS組相比，SYⅠ組和SYⅡ組肉雞血漿中的硒含量均顯著提高(P＜0.01或P＜0.05);較對照組和 SS組，MS組、SYⅠ組和SYⅡ組肉雞肝臟中的硒含量也顯著提高(P＜0.01或 P＜0.05);后期胸肌中硒含量的變化規律與前期一致，較對照組和SS組，MS組、SYⅠ組和SYⅡ組肉雞胸肌中的硒含量均顯著提高(P＜0.01)，且3組中SYⅡ組含量最高。然而，與對照組相比，飼糧中添加0.30 mg/kg的無機硒均未顯著影響各組織的硒含量(P＞0.05)。

2.3 不同硒源及水平對肉雞抗氧化功能的影響

由表4可以看出，就前期而言，與對照組相比，SS組和SYⅠ組肉雞肝臟T-SOD的活性顯著提高(P＜0.01);SYⅡ組肉雞血漿GSH-Px的活性及肝臟T-SOD的活性提高也達到了顯著水平(P＜0.05);而MS組的各抗氧化指標均無顯著變化(P＞0.05)。同樣在前期，與SS組相比，SYⅠ組肉雞血漿T-SOD的活性顯著提高(P＜0.05);SYⅡ組肉雞血漿T-SOD和GSH-Px的活性均顯著提高(P＜0.05);MS組肉雞血漿GSH-Px的活性顯著提高(P＜0.05)，但肝臟T-SOD的活性卻顯著降低了(P＜0.05)。在試驗后期，較對照組，SS組肉雞血漿及肝臟GSH-Px的活性均顯著提高(P＜0.01或P＜0.05);SYⅠ組肉雞血漿及肝臟GSHPx的活性也均顯著提高(P＜0.01)，血漿MDA的含量顯著降低(P＜0.05);SYⅡ組肉雞血漿及肝臟GSH-Px的活性均顯著提高(P＜0.05或 P＜0.01)，血漿MDA的含量也顯著降低(P＜0.05);而MS組肉雞肝臟 GSH-Px(P＜0.01)和 CAT(P＜0.05)的活性也均顯著提高，血漿MDA的含量顯著降低(P＜0.01)。而與SS組相比，僅 MS組肉雞血漿MDA含量顯著降低(P＜0.05)。與MS組相比，SYⅠ組肉雞血漿GSH-Px的活性也顯著提高(P ＜0.05)。

表2 不同硒源及水平對肉雞生長性能的影響Table 2 Effects of different selenium sources and levels on growth performance of broilers

表3 不同硒源及水平對肉雞組織硒含量的影響Table 3 Effects of different selenium sources and levels on selenium content in tissue of broilers

3 討論

3.1 不同硒源及水平對肉雞生長性能的影響

本研究發現，添加有機硒顯著降低了全期肉雞ADFI，而各試驗組對ADG及F/G均未產生顯著影響，表明添加有機硒在一定程度上可以節約飼料量，降低生產成本。關于硒能改善肉雞生長性能的報道，多見于改善其F/G。Wang等［6］研究發現，添加0.2 mg/kg的無機硒或酵母硒均顯著降低了肉雞的F/G;也有報道認為有機硒不但能顯著降低F/G，還能顯著提高肉雞的體重［7］;夏枚生等［8］也報道，飼糧添加 0.4 ～1.0 mg/kg 硒(納米硒、亞硒酸鈉)時，納米硒組肉雞生長性能顯著高于亞硒酸鈉組。然而，也有諸多研究認為，飼糧添加不同硒源均未對肉雞的生長性能產生顯著影響［9-10］。這也可能是由試驗動物、試驗條件等不同造成的。

表4 不同硒源及水平對肉雞抗氧化功能的影響Table 4 Effects of different selenium sources and levels on antioxidant capacity of broilers

3.2 不同硒源及水平對肉雞組織硒含量的影響

本試驗中，飼糧添加有機硒不同程度地提高了各組織硒含量，而無機硒則沒有這樣的效果。Wang 等［9］在羅斯肉雞飼糧中添加 0.15 mg/kg 的無機硒或硒代蛋氨酸，結果表明，較無機硒，有機硒顯著提高了肉雞血清、肝臟及胸肌中的硒含量。?evcˇíková 等［11］也報道，與對照組相比，飼糧添加0.3 mg/kg的酵母硒顯著提高了肉雞肝臟和胸肌中的硒含量。在其他動物(育肥豬、羔羊、肉牛)的試驗［12-14］中也得到了類似的結果。這說明有機硒的生物利用率較無機硒高，而就其機理而言，這應該與不同硒源的代謝途徑有關。有報道認為:在無機硒的代謝途徑中，僅有很少量的無機硒結合入體蛋白中，大多數未能用于合成硒蛋白的硒則進入腎臟，最終排出體外;而有機硒中的硒與含硫氨基酸類似，在蛋白質的合成中硒代氨基酸常常替代含硫氨基酸而結合入蛋白質中，因此有機硒(酵母硒、硒代蛋氨酸等)能增加機體總硒的貯存量，為硒在組織中的貯存提供了一個硒庫，硒以有機的形式貯存［15］。本試驗中添加有機硒極顯著提高了胸肌中的硒含量，這與Pan等［16］在羅曼蛋雞上得到的結果相類似。有機硒能顯著提高肌肉或雞蛋中硒的含量，這也為提高人類硒的攝入量、改善硒的補充水平提供了可行的措施［17］。

3.3 不同硒源及水平對肉雞抗氧化功能的影響

機體的抗氧化體系由酶促體系和非酶促體系共同組成。酶促抗氧化體系主要包括GSH-Px、谷胱甘肽還原酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和CAT等，非酶促抗氧化體系主要有維生素E、胡蘿卜素、維生素C、蛋氨酸和乳鐵蛋白等［18-19］。硒在酶促抗氧化體系中扮演了重要角色，并通過具有酶功能的含硒蛋白、硒核酸等發揮作用。本試驗結果顯示，飼糧添加硒對機體的酶促體系發揮抗氧化功能起到了促進作用。MDA是自由基觸發脂質過氧化物反應生成的終產物，它能使含氨基的蛋白質、核酸、腦磷脂等失活，其含量可反映機體脂質過氧化的程度，間接反映細胞的受損程度［20］。本試驗中各添加有機硒組肉雞后期血漿MDA的含量顯著降低。Wang等［6］報道，飼糧添加不同硒源(亞硒酸鈉、酵母硒)均顯著提高了肉雞血漿和肝臟GSH-Px的活性，且較添加相同水平的無機硒，各添加有機硒組肉雞的血漿GSH-Px的活性也顯著提高;夏枚生等［8］在嶺南黃肉雞的研究中也發現納米硒組肉雞全血GSH-Px的活性顯著高于亞硒酸鈉組;這均與本試驗的結果相一致。Mikulski等［21］報道，較對照組和添加同水平的無機硒組，飼糧添加0.3 mg/kg酵母硒顯著提高了8周齡火雞全血T-SOD的活性，與本試驗結果也是相符的。Zhan等［12］對育肥豬的試驗研究表明，0.3 mg/kg的不同硒源均顯著提高了豬肝臟和肌肉中GSH-Px的活性，顯著降低了MDA的含量，且有機硒效果更好。在本試驗中，飼糧中添加0.20 mg/kg的酵母硒在提高血漿抗氧化能力方面顯著好于0.30 mg/kg的無機硒，而混合硒在后期對肝臟CAT活性有顯著提高，說明了混合硒改善了肝臟清除過氧化氫等有害自由基的能力。

4 結論

①飼糧添加有機硒顯著降低了肉雞全期ADFI，改善了肉雞的抗氧化功能;與無機硒相比，有機硒的效果更好。

②飼糧添加各水平有機硒不同程度地提高了肉雞各組織硒含量。

③ 飼糧添加0.20 mg/kg的有機硒替代0.30 mg/kg無機硒，在改善肉雞的生長性能、提高組織硒含量和抗氧化功能方面是可行的。

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