頭穴叢刺結合康復技術法對大鼠腦梗死后行為功能影響的研究

周海純，鄭迎虹，蔡國鋒，馬育軒

(1．黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040;2．黑龍江中醫藥大學附屬第二醫院，黑龍江 哈爾濱 150001)

腦梗死(Cerebral infraction，CI)又稱缺血性腦卒中，是神經系統臨床常見病、多發病，急性腦梗死患者由于腦部血液循環障礙，缺血、缺氧引起局灶性腦組織缺血性壞死，出現相應的神經系統癥狀和體征。具有發病率高、致殘率高、死亡率高的“三高”特點［1－3］。如何使腦卒中所致神經功能缺損癥狀降低到一個最小的限度這一系列問題成為國內外研究的熱點［4－7］。本研究旨在從分子水平上對比研究頭穴叢刺結合康復技術法對大鼠腦梗死后行為功能的影響，為臨床上進一步采用頭穴叢刺結合康復技術治療腦梗死提供客觀依據，對改善神經功能缺損狀況、降低腦梗死的致殘率和提高生活質量具有重要意義。

1 資料與方法

1．1 實驗動物 Wistar大鼠，體質量250～300g，由黑龍江中醫藥大學動物實驗中心提供。采用大腦中動脈阻塞(MCAO)模型制備方法。

1．2 動物分組方法

造模后24h按Bederson 4級評分標準評分。0級:未見行為缺陷;1級:前肢屈曲;2級:側推抵抗力下降(即側向推力實驗陽性)伴前肢屈曲，無轉圈行為;3級:同二級行為伴自發性旋轉，評分低于兩分者剔除。將符合標準的大鼠隨機分為4組。

1)模型組12例，48h后，行大腦中動脈梗塞術，不予任何治療，常規飼養;2)康復組12例同上，造模后康復治療;3)針康組12例同上，造模后頭穴叢刺結合康復技術治療;4)假手術組4例僅分離動脈，不結扎插線。各時間點分組方法相同。

1．3 治療方法

1)假手術組大鼠僅分離動脈不插入線拴，術后置于普通籠中飼養。2)模型組術后另置普通籠中術后清潔飼養，不予任何治療。3)康復組大鼠進行大腦中動脈阻塞術，清醒后予以轉籠，網屏，雜技任務訓練，轉棒等綜合康復療法。轉籠長100cm，直徑60cm的圓柱形金屬網籠;中間分為4格，同時訓練4只大鼠;水平放置于金屬架上，一端有轉動柄，可按需要縱軸轉動。術后24h開始到21天。10min/d，5次/周。轉棒:長750cm，直徑4.5cm木棒一根，兩端懸掛，手動以5r/min順、逆時針交替轉動。術后24h開始，10min，5天/周;雜技任務訓練:要求大鼠按順序走過獨木直徑2.7cm、繩直徑2cm、梯(間距)5cm、重金屬鉸鏈(扣環2.7cm ×4.3cm)、系列障礙(高 l．3cm ～21cm)、網格平臺(85cm×11cm，平臺上依次有面積 6.25cm2、8.4cm2、12.25cm2的小洞)、一條縫隙，最后回到小籠。術后24h到4天在實驗者的幫助下讓大鼠適應此訓練過程，然后改為4次/天(5～14天)，到2次/天(15～21天)。4)針康組大鼠造模24h后進行頭穴叢刺結合康復技術治療，頭穴叢刺:采用頭穴叢刺法，在相應的刺激區，按照“大鼠穴位圖譜”所示，取百會穴及百會左、右側各旁開4mm處沿皮分別刺入10mm，快速捻轉1min后留針2h，期間每20min快速捻轉1次，每日1次，共治療3周;康復技術:同康復組。

1．4 指標測定方法

1．4．1 神經功能評定

按Bederson等制定的標準評分，評分分為4級。0級:未見行為缺陷;1級前肢屈曲;2級:側推抵抗力下降(即側向推力實驗陽性)伴前肢屈曲，無轉圈行為;3級:同二級行為伴自發性旋轉。各組大鼠在治療前、7天、14天、21天分別進行行為學評估，觀察其評分情況。

1．4．2 行為功能評估

在大鼠腦梗死模型制作后24h，7，14，21天，進行功能評估，觀察大鼠在行為學方面的差異。每項試驗進行2次，取較高的分數值作為大鼠的該項得分。行為學測定在安靜的環境中進行，評分標準見表1。

網屏測驗(screentest):將大鼠置于水平放置的網屏上，而后迅速將網屏一端抬高并轉至垂直位，記錄大鼠在網屏上的維持時間。此項主要檢測總的肌力。平衡木測驗(balancebeamtest):將大鼠置于木棒中間位置，記錄大鼠在木棒上維持的時間，最長30s。此項主要檢測平衡能力［8］。抓握一牽引測驗(prehensiletractiontest):將大鼠前爪放于水平放置繩上，松開［9］。記錄大鼠在繩上懸掉的時間以及是否有第三肢(后爪)參與，最長5s。抓握是指大鼠前爪懸掉在水平繩上的能力，主要檢測肌力;牽引是指大鼠將后肢放在繩上的能力，主要檢測平衡和肌力［10］。

表1 評分標準

1．5 統計學處理

各組最終取2套切片納入統計分析，實驗數據用均數±標準差(±s)表示，采用SPSS 13．0統計軟件進行統計分析，根據方差齊性與否分別采用參數檢驗和非參數檢驗，即齊性資料用單因素方差分析(one－factor ANOVA)的單向分類的方差分析(one－way ANVOA)，兩兩比較應用LDS－t檢驗;非齊性資料采用秩和檢驗。選擇P＜0.05為差異有顯著性，P＜0.01為差異有極顯著性。

2 結果

2．1 神經功能評定 見表2。

表2 神經功能評定(±s)

表2 神經功能評定(±s)

n療前 7天 14天模型組12 3．42 ±0．67 2．83 ±0．58 1．83 ±0．55康復組 12 3．33 ±0．78 1．83 ±1．11 1．08 ±0．76針康組12 3．25 ±0．75 1．00 ±0．85 0．33 ±0．47

2．2 行為學功能評定 見表3。

表3 腦梗死大鼠行為學評估得分(±s)

表3 腦梗死大鼠行為學評估得分(±s)

n療前 24小時 7天 14天12 1．08 ±0．79 4．50 ±1．17 5．25 ±1．22 6．58 ±0．95康復組 12 1．33 ±0．98 4．67 ±1．23 6．16 ±1．11 7．41 ±0．86針康組模型組12 1．25 ±0．97 4．75 ±1．06 7．16 ±0．94 8．25 ±0．92

3 討論

本實驗采用的頭穴叢刺結合康復技術方法對治療中樞神經系統疾病特別是腦血管疾病有很好的效果。大量有關頭穴叢刺和康復技術的研究顯示，其能促進腦損傷后原位誘導內源性神經干細胞增殖、分化;這些方法還有改善腦血管循環、減輕腦細胞缺氧、抑制傷灶局部炎癥反應、改善大腦電生理活動等功效，這些條件的變化也會進一步影響神經干細胞的增殖分化［11］。而且這些方法本身不同于外源性藥物，它作用范圍廣泛，具有多靶點效應，作用機制多樣，無不良反應，因而對于誘導內源性干細胞增殖分化具有其他藥物療法不可比擬的優越性、可行性［12］。鑒于成年腦內原位神經干細胞本身數量較少，其增殖不一定能滿足補充需要，我們要做的是通過干預使干細胞數量增多以利于補充需要;用一定的方法促使其遷移和分化并最終融入功能缺失區的神經網絡。雖然成體神經干細胞的可塑性仍是一個爭論的問題，但有較好前景。

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