十精丸改善卵巢功能及美容作用的研究

陳麗娟，李偉，王加志，張麗宏，趙晶，馬偉

(1．黑龍江中醫藥大學佳木斯學院，黑龍江 佳木斯 154007;2．黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

皮膚是雌激素的敏感靶器官。雌激素通過與皮膚細胞上的雌激素受體(estrogen receptor，ER)結合而發揮生理作用。隨著年齡增長，女性最早從30歲后即會出現雌激素水平下降的趨勢，加之各種因素的干擾，使皮膚出現自然老化和光老化，表現為皮脂分泌量減少，表皮干燥，皮膚膠原和水份含量下降，彈性降低，特別是絕經后雌激素的低水平，更加重了這種情況。從系統性雌激素療法首次應用以來，人們即發現雌激素除了治療多種婦科疾病外，對皮膚功能還有明顯的改善作用，特別表現在抗皮膚老化和改善更年期綜合征上。但雌激素替代療法所帶來的負作用如增加子宮內膜癌、乳腺癌的發病率等［1］，使其使用的安全性受到了限制。而用中醫藥來維護卵巢內分泌功能，調整雌激素水平，對延緩皮膚衰老、維護皮膚健美狀態則有著無可比擬的優勢。

十精丸出自明代《普濟方·諸虛門》，有“溫腎滋腎，益精填髓，養心益智、平肝明目……烏須發，悅容顏”的作用［2］，是中醫養生美容保健的傳統名方。

1 實驗材料

1．1 實驗動物

14～16月齡wistar雌性大鼠40只，體質量(280±20)g，購于上海斯萊克實驗動物中心。

1．2 實驗藥物

十精丸方組:枸杞子、熟地黃、桂心、杭菊花、山茱萸、菟絲子、肉蓯蓉、川椒、柏子仁、白茯苓各等份。購于黑龍江中醫藥大學佳木斯學院附屬醫院中藥局。

尼爾雌醇:北京四環制藥有限公司生產，批號20100401。

2 實驗方法

2．1 自然衰老模型建立

14～16月齡Wistar雌性大鼠，適應性飼養1周后隨機分成4組，每組10只，即模型組、十精丸高、低劑量組、陽性對照組。

2．2 藥物制備

十精丸(各等份，200g/劑)，加水浸泡1h，文火煎煮2h，每煎取汁200ml，共2次，將兩煎混合后濃縮至50ml，為高劑量組(含生藥4.0g/ml);濃縮至100ml，為中藥低劑量組(含生藥2.0g/ml)。置4℃冰箱保存，灌胃給藥，實驗周期6周。

2．3 標本制備

2．3．1 血清制備 于最后一次給藥后，禁食水12h，乙醚吸入麻醉后，摘取眼球采血3ml，以3000r/min離心15min，吸取血清0.5ml于eppenelorf管中。

2．3．2 形態學取材和光鏡檢查

于大鼠背部正中，剪取1cm×1cm皮膚，去除脂肪，生理鹽水清洗后，以4%甲醛固定待檢;摘取卵巢，去除脂肪，以4%多聚甲醛固定待檢。將經4%多聚甲醛固定24h以上的各組大鼠皮膚、卵巢標本，經酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規切片(5um)，HE染色，供光學顯微鏡觀察。

2．4 統計學處理

3 實驗結果

3．1 大鼠血清雌二醇(E2)含量測定結果 見表1。

表1 各組大鼠血清中E2含量測定結果(±s)

表1 各組大鼠血清中E2含量測定結果(±s)

注:與空白組比較，※P＜0．01，◆P＜0.05;與陽性對照組比較，★P ＜0.01，●P＞0.05。

組別 n劑量 E2(pg/ml)模型組10 13．156 ±4．880陽性對照組 10 0．15mg/100g25．791 ±13．920※十精丸低劑量組 10 2．0g/ml18．630 ±2．650◆▲★十精丸高劑量組 10 4．0g/ml21．877 ±3．780※▲●

各給藥組E2含量明顯高于空白對照組，十精丸高劑量組與空白對照組相比差異極顯著(P＜0.01)，有統計學意義;低劑量組與空白對照組相比，差異較為顯著(P＜0.05)。結果表明，十精丸對受試大鼠血清E2水平有不同程度地提高，提示十精丸具有提高生殖內分泌功能、改善卵巢狀態的作用。

3．2 組織形態學結果

3．2．1 不同給藥組大鼠皮膚組織形態學觀察(光鏡200×)見圖1～圖4。

圖1 十精丸高劑量組(光鏡200×)

圖2 十精丸低劑量組(光鏡200×)

圖3 尼爾雌醇對照組(光鏡200×)

圖4 模型組(光鏡下200×)

模型組:表皮角質層角化增厚，基底層有明顯色素沉著，真皮層膠原纖維稀疏，呈玻璃樣變，皮脂腺汗腺導管改變不顯著。

十精丸組:以高劑量改變明顯，表皮角質層變薄，基底層色素沉著明顯減輕;真皮層變厚，膠原纖維致密豐富，皮脂腺腺管擴張，分泌旺盛。

陽性藥對照組:表皮角質層較厚，基底層色素沉著明顯，真皮膠元纖維細胞稍多，汗腺、皮脂腺變化不明顯。

可見十精丸能促進皮膚真皮膠原纖維細胞增殖，減少基底層色素沉著，角化層變薄，從而改善皮膚衰老狀態，具有延緩皮膚衰老的作用。

3．2．2 各組大鼠卵巢光鏡觀察結果(光鏡200×)見圖5～圖8。

圖5 十精丸高劑量(光鏡200×)

圖6 十精丸低劑量組(光鏡200×)

圖7 尼爾雌醇對照組(光鏡200×)

圖8 模型組(光鏡200×)

模型組:成熟卵細胞1個，初級卵細胞2個，次級卵細胞3個;黃體6組，間質細胞少，有少量纖維細胞，說明卵巢功能降低。

十精丸組:以高劑量組有明顯改善:成熟卵細胞多3個，初級卵細胞6個，次級卵細胞4個;黃體13組，間質細胞增生明顯，卵巢功能活躍。

陽性藥對照組:可見成熟卵細胞1個，初級卵細胞3個，次級卵細胞3個;黃體7組，間質細胞輕度增生。較空白對照組有所改善。

可見十精丸能改善卵巢功能，促進卵巢細胞增殖。

4 討論

現代神經內分泌功能減退學說認為，隨著年齡增加，激素分泌異常，機體靶組織對某些激素或活性物質的反應明顯降低(如受體表達下調)，可造成機體內穩態嚴重破壞［3］。尤其對即將進入圍絕經期的女性而言更是如此。雌激素能使女性產生并維持第二性征，具有生育能力。而且其受體存在于多處器官和組織中，如子宮、陰道、乳房、皮膚、大腦等，尤其對皮膚具有保護作用［4］，所以皮膚是雌激素作用的靶器官之一。若雌激素水平下降，女性就會表現出體表皮膚的外在衰老征象如皮膚松弛、皺紋增多、脂肪堆積等;所以，保養和調整卵巢的內分泌功能，保持血中雌激素水平的穩定即能延緩女性皮膚衰老，起到美容養顏作用。

補肝腎藥物能改善神經內分泌免疫從而延緩衰老。中醫補腎法正是通過調節垂體－性腺功能來改善內源性激素分泌而產生美容抗衰作用的［5］，可見中醫補肝腎、益精血的治療法則正是這一思想的集中體現。所以，通過探討機體衰老機制與卵巢的分泌功能和形態變化的相關性，將中醫藥學相關理論及現代醫學技術手段相結合，成為中醫美容學學術研究的思路之一。十精丸能有效地改善皮膚和卵巢的衰老狀態，具有恢復其年輕狀態、延緩衰老的活性作用。其通過整體調節，多靶點作用，恢復卵巢分泌功能，提高機體雌激素水平，從而使與之相作用的靶組織受到保護，不僅保證更年期女性健康，還能達到美容駐顏的目的。

本研究通過對自然老齡大鼠的卵巢和皮膚形態學觀察、血清雌二醇(E2)水平測定，初步探討了補腎方藥十精丸調整卵巢內分泌功能、延緩皮膚衰老的作用機制，為十精丸進一步的研究和應用奠定理論基礎。

［1］ 廖慧娟．復方尼爾雌醇片預防去卵巢大鼠骨質疏松的實驗研究［J］．中國骨質疏松雜志，2003，9(1):57－59．

［2］ 明·朱木肅．普劑方［M］．北京:人民衛生出版社，1983．

［3］ 李衛．皮膚衰老及抗衰老研究進展［J］．中華醫學美學美容雜志，2004，10(1):60－62．

［4］ 袁靜，陳全珠，侯正明，等．養血調肝方對初老雌性大鼠神經內分泌免疫影響的實驗研究［J］．中國實驗方劑學雜志，2005，11(1):34－36．

［5］ 楊萬章．補腎法作用機理的臨床及實驗研究近況［J］．浙江中醫雜志，1994，39(2):84－87．