Caspase－3、ADAM10在肺癌中表達(dá)與生物學(xué)意義

景瑞軍，李勇強(qiáng)

（西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，陜西 西安 710038）

20世紀(jì)50年代開始，吸煙等種種因素導(dǎo)致了我國(guó)肺癌發(fā)病率和病死率的升高，肺癌的防治成為一項(xiàng)重大問(wèn)題［1］，但目前腫瘤的生物學(xué)行為無(wú)明確指標(biāo)。既往研究顯示，細(xì)胞外信號(hào)通路、線粒體信號(hào)通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號(hào)通路和高爾基體信號(hào)通路的共同終末都是 Caspase 酶［2］。整合素－金屬蛋白酶（ADAMs）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類與細(xì)胞膜結(jié)合的糖蛋白家族，能參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)等過(guò)程，也可能參與了人類腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的病理過(guò)程［3，4］。我們?yōu)榇瞬捎妹庖呓M化方法研究Caspase－3、ADAM10表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，為判斷肺癌的特點(diǎn)與預(yù)后提供依據(jù)，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院病理科2004年2月－2011年7月間手術(shù)切除的肺癌石蠟包埋標(biāo)本80例，男60例，女20例。入選標(biāo)準(zhǔn)：患者術(shù)前均未行任何治療，符合世界衛(wèi)生組織（WHO）中肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，同意入選。肺癌類型：腺癌35例，鱗癌35例，小細(xì)胞癌10例；年齡33～78歲，平均（60.2±9.2）歲；按組織學(xué)分級(jí)：高分化20例，中分化35例，低分化25例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例。同期取正常肺組織20例，包括13例尸檢的正常肺組織，5例手術(shù)切除炎性假瘤病例的正常肺組織和2例肺大泡的正常肺組織。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

本文使用的兔抗人多克隆抗體ADAM10和Caspase－3購(gòu)自USBio公司，EDTA抗原修復(fù)液購(gòu)自福州邁新公司，DAB顯色劑購(gòu)自DAKO公司，觀察所用顯微鏡為同本Olympus產(chǎn)品，型號(hào)為BX－50。丙酮和無(wú)水乙醇為天津市化學(xué)試劑公司產(chǎn)品。

1.2.2 染色方法

所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，切片常規(guī)脫蠟至水；3%過(guò)氧化氫微波爐低檔孵育2 min，蒸餾水浸泡；將切片放入盛有EDTA抗原修復(fù)液的高壓鍋中，噴氣后1～2min，高壓鍋離開熱源，冷卻至室溫，取出切片；蒸餾水浸泡，PBS液（pH 7.4）浸泡；滴加1∶75的一抗4℃冰箱過(guò)夜，PBS液浸；滴加生物素標(biāo)記的二抗工作液，室溫下濕盒中孵育10min，PBS液浸泡；DAB顯色劑顯色，顯微鏡下觀察，適時(shí)終止反應(yīng)。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

著色細(xì)胞比例1／3以下為1分，1／3～2／3為2分，2／3以上為3分。著色程度，無(wú)著色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。然后根據(jù)兩者積分的乘積來(lái)判斷陽(yáng)性等級(jí)：0分為（－），1～2分為（＋），3～4分為（＋＋），4分以上為（＋＋＋）；其中，（＋）為弱陽(yáng)性，（＋＋～＋＋＋）為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。ADAM10和Caspase－3在各組中表達(dá)陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ADAM10和 Caspase－3的表達(dá)情況

ADAM10和Caspase－3陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色與顆粒狀，主要定位于細(xì)胞漿中。ADAM10和Caspase－3在正常肺組織和肺癌組織的表達(dá)陽(yáng)性率分別為100%、50%，見表1。

表1 Caspase－3在肺癌進(jìn)展組織芯片中的表達(dá)（n）

2.2 ADAM10和Caspase－3的表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

調(diào)查顯示，ADAM10和Caspase－3在腺癌中的表達(dá)水平較鱗癌和小細(xì)胞癌低，同時(shí)在轉(zhuǎn)移的肺癌表達(dá)水平也比較低。

3 討論

近年來(lái)，從我國(guó)城鄉(xiāng)前10位惡性腫瘤構(gòu)成來(lái)看，肺癌已代替肝癌成為我國(guó)首位惡性腫瘤死亡原因，占全部惡性腫瘤死亡的22.7%，且發(fā)病率和病死率仍在繼續(xù)迅速上升。根據(jù)衛(wèi)生部全國(guó)腫瘤防治辦公室提供的資料顯示，2005年～2011年間，中國(guó)肺癌的發(fā)病數(shù)估計(jì)增加28萬(wàn)人，目前我國(guó)肺癌發(fā)病率每年增長(zhǎng)26.9%，如不及時(shí)采取有效控制措施，預(yù)計(jì)到2025年，我國(guó)肺癌患者將達(dá)到100萬(wàn)，成為世界第1肺癌大國(guó)［5－7］。大量的流行病學(xué)研究證明了吸煙與肺癌發(fā)生的密切關(guān)系，吸煙使肺癌的發(fā)病率和病死率持續(xù)上升。在因肺癌死亡的患者中，90%是由吸煙，包括被動(dòng)吸煙引起的。同時(shí)肺癌的發(fā)生與個(gè)體基因易感性也有關(guān)。

表2 ADAM10和Caspase－3的表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系（n）

Caspase酶是1個(gè)氨基酸序列和空間結(jié)構(gòu)非常相似的蛋白質(zhì)家族，它有3個(gè)結(jié)構(gòu)域，是控制細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵組件，平常它們以酶原的形式存在于細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞接到凋亡信號(hào)后，Caspase家族成員依次被激活，以多種方式“拆解”細(xì)胞，其中1種方式是激活CAD，使CAD進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，像剪刀一樣剪斷腫瘤細(xì)胞的DNA，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，因此Caspase酶也被形象地稱為腫瘤細(xì)胞的“剪刀酶”［8，9］。有研究發(fā)現(xiàn)，Caspase－3在良性前列腺增生表達(dá)明顯高于前列腺癌細(xì)胞［10］。還有研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)發(fā)現(xiàn)，Caspase－3在肺癌的表達(dá)與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期、分化程度有關(guān)［11，12］。

ADAM10是一種功能性的分泌酶，ADAM10最初從牛腦髓鞘膜中分離純化而來(lái)，并被稱為哺乳動(dòng)物整合素金屬蛋白酶。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)ADAM10是細(xì)胞質(zhì)髓鞘堿性蛋白酶，由于ADAM10廣泛參與細(xì)胞功能，許多疾病，如癌癥或AD都將其列為有潛力的靶點(diǎn)。ADAM10可以切割腫瘤相關(guān)底物，并與前列腺癌或乳腺癌的進(jìn)程相關(guān)，它還與人結(jié)腸癌細(xì)胞遷移有關(guān)。因此，抑制ADAM10在一定條件下對(duì)于腫瘤治療可能是有幫助的。相反，在腦內(nèi)ADAM10過(guò)表達(dá)或激活對(duì)于治療神經(jīng)退行性疾病，也許是有利的。本文結(jié)果顯示，ADAM10和Caspase－3陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色與顆粒狀，主要定位于細(xì)胞漿中。ADAM10和Caspase－3在正常肺組織和肺癌組織的表達(dá)陽(yáng)性率分別為100%和50.0%。經(jīng)過(guò)調(diào)查，ADAM10和Caspase－3在腺癌中的表達(dá)水平較鱗癌和小細(xì)胞癌低，同時(shí)在轉(zhuǎn)移的肺癌表達(dá)水平也比較低。

總之，Caspase－3、ADAM10在肺癌中表達(dá)都受到抑制，陽(yáng)性率降低，可能與患者腫瘤的病理特點(diǎn)與轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，可作為預(yù)測(cè)肺癌發(fā)生發(fā)展的指標(biāo)之一。

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