鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑的穩定性研究

王東興，錢秋玉，孫建緒，高永良，張振清 （. 北京軍區總醫院63臨床部藥械科，北京 049；. 軍事醫學科學院毒物藥物研究所，北京 00850）

用于全身系統疾病的治療，鼻腔給藥具有起效快、無首過消除作用、無損傷、使用方便等特點[1-2]，近年來發展迅速。嘔吐患者常常因惡心、嘔吐而不適合口服給藥，影響止吐藥物口服給藥的療效，因此，止吐藥物的鼻腔給藥日益受到重視[3]。鹽酸格拉司瓊是選擇性5-羥色胺3受體拮抗劑，目前國內外已上市劑型有片劑、口服溶液劑和注射劑，用于預防和治療放化療引起的惡心和嘔吐以及各種手術后的惡心和嘔吐[4]。根據止吐藥物適合通過鼻腔給藥的特點[3]，我們開發了具有自主知識產權的國家二類新藥—鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑，并已申請中國發明專利并獲得授權[5]，目前正在進行臨床試驗。在該制劑開發過程中，我們按照國家新藥研究的有關規定對其穩定性進行了研究，現報道如下。

1 材料

1.1 儀器

UV-160A紫外可見分光光度計（SHIMADZU）；tspP2000型高效液相色譜儀，tspUV1000型紫外檢測器，tsp4600型積分儀；pH計（HANNA HI931410）；萬分之一電子分析天平（Sartorius）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸格拉司瓊原料藥（太極集團，純度99.9%，批號000815005）；羥苯乙酯（分析純，Sigma，批號54H3472）；鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑（自制，批號010416、010417、010418）；甲醇（色譜純，邯鄲四友生物科技有限公司）；無水乙酸鈉（分析純，溫州市試劑化工廠，批號961105）；三乙胺（分析純，天津市化學試劑六廠，批號980715）。

2 方法

2.1 穩定性分析方法的建立

2.1.1 含量測定方法 色譜條件：Phenomenex prodigy ODS（3）色譜柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm），流動相為甲醇-0.05 mol·L-1醋酸鈉緩沖液（50∶50，含0.25%三乙胺，冰醋酸調pH值至6）；流速 1 mL·min-1；檢測波長 301 nm；進樣量 20 μL； 柱溫為30 ℃。

方法精密度：分別配制鹽酸格拉司瓊的低（1 μg·mL-1）、中（5 μg·mL-1）、高（10 μg·mL-1）濃度溶液，分別連續進樣5次，記錄色譜峰面積，分別計算三種濃度的色譜峰面積的RSD值。

鹽酸格拉司瓊工作液的穩定性：分別配制鹽酸格拉司瓊的低（1 μg·mL-1）、中（5 μg·mL-1）、高（10 μg·mL-1）濃度溶液，分別在不同時間間隔進樣，記錄色譜峰面積，分別計算三種濃度的色譜峰面積的日內差、日間差。

線性范圍：配制100 μg·mL-1的鹽酸格拉司瓊儲備液，分別稀釋成0.2、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0 μg·mL-1的濃度，進樣并記錄峰面積，以濃度對峰面積進行線性回歸，求得回歸方程和相關系數。

方法的回收率實驗：按照鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑的處方，以102 μg·mL-1的鹽酸格拉司瓊儲備液和3.1 μg·mL-1的防腐劑儲備液制備低（1 μg·mL-1）、中（5 μg·mL-1）、高（10 μg·mL-1）三個濃度的鹽酸格拉司瓊溶液，其中防腐劑含量均為0.155 μg·mL-1，按含量測定方法測定鹽酸格拉司瓊含量，計算回收率。

2.1.2 鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑有關物質檢查 鹽酸格拉司瓊分解產物干擾試驗：分別以水、0.1 mol·L-1HCl、0.1 mol·L-1NaOH和3%H2O2為溶劑配制200 μg·mL-1的鹽酸格拉司瓊溶液，灌封于2 mL安瓿中，其中，3%H2O2為溶劑者置于40 ℃烘箱中，其余放入100 ℃烘箱中，分別于不同時間取樣，按照含量測定的HPLC方法進樣，考察其分解情況及分解產物與鹽酸格拉司瓊色譜峰的分離情況。

鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑有關物質檢查：按中國藥典2000版（二部）附錄V D中主成分自身對照法進行。

2.2 鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑穩定性實驗

2.2.1 鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑穩定性樣品的制備制備批號分別為010416、010417、010418的鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑各100瓶，用于穩定性實驗，檢測各批樣品的pH值、外觀、含量及有關物質。

2.2.2 加速實驗 將三個批號的鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑置于40 ℃烘箱中，分別于第1、2、3、6月取樣，進行穩定性實驗各考察指標的檢測。

2.2.3 室溫長期留樣 將三個批號的鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑置于室溫環境中，分別于第3、6、9、12、18、24、36月取樣，進行穩定性實驗各考察指標的檢測。

3 結果

3.1 穩定性分析方法的建立

3.1.1 含量測定方法 方法精密度：鹽酸格拉司瓊的低（1 μg·mL-1）、中（5 μg·mL-1）、高（10 μg·mL-1）濃度溶液分別進樣后的色譜峰面積平均RSD值為0.61%（n = 15），方法的精密度良好。

鹽酸格拉司瓊工作液的穩定性：鹽酸格拉司瓊的低（1 μg·mL-1）、中（5 μg·mL-1）、高（10 μg·mL-1）濃度溶液分別進樣后的色譜峰面積日內差RSD值＜ 1.17%，日間差RSD值 ＜ 1.67%，工作液穩定性良好。

線性范圍：鹽酸格拉司瓊溶液在0.2 ～ 20.0 μg·mL-1的濃度范圍內對色譜峰面積的回歸方程如下：Y = 89 061.701 7X – 4 686.669 7，r = 0.999 96（n = 3），藥物濃度與色譜峰面積之間線性關系良好。

方法的回收率實驗：低（1 μg·mL-1）、中（5 μg·mL-1）、高（10 μg·mL-1）三個濃度的鹽酸格拉司瓊溶液的回收率分別為（100.98±1.25）%、（100.43±0.82）%、（100.83±0.71）%，表明該測定方法準確，回收率符合含量測定的要求。

鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑的含量測定方法：精密吸取鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑溶液1 mL于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密吸取該溶液1 mL于10 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取鹽酸格拉司瓊對照品，精密稱取適量，用水溶解并定量稀釋成每1 mL中約含5 μg（以格拉司瓊游離堿計）的溶液，作為對照品溶液。分別取供試品溶液和對照品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。

3.1.2 鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑有關物質檢查 鹽酸格拉司瓊分解產物干擾實驗：在中性、酸性、堿性和氧化條件下，鹽酸格拉司瓊均產生一個分解產物，其色譜峰在色譜圖中的保留時間均相同，并且與鹽酸格拉司瓊色譜峰分離良好。鹽酸格拉司瓊在3%H2O2中分解最快，其次為0.1 mol·L-1NaOH溶液和0.1 mol·L-1HCl溶液，在水中最穩定。鹽酸格拉司瓊在0.1 mol·L-1NaOH溶液中的分解產物色譜圖見圖1。因此，在該色譜條件下，鹽酸格拉司瓊分解產物不會干擾鹽酸格拉司瓊的含量測定，該方法適合于鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑的穩定性分析。

圖1 鹽酸格拉司瓊在0.1 mol·L-1NaOH溶液中的分解產物色譜圖1 – 分解產物；2 – 鹽酸格拉司瓊Fig 1 Chromatogram of degradation products of granisetron hydrochloride in 0.1 mol·L-1NaOH solution1 – degradation products; 2 – granisetron hydrochloride

鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑有關物質檢查：精密吸取鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑溶液0.5 mL于25 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為樣品溶液；精密吸取樣品溶液1 mL于100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對照溶液；在鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑穩定性分析方法的色譜條件下，首先取上述對照溶液進樣，記錄鹽酸格拉司瓊色譜峰的峰面積，再取上述樣品溶液進樣，記錄色譜峰至鹽酸格拉司瓊色譜峰保留時間的兩倍，除溶劑峰和鹽酸格拉司瓊色譜峰外的雜峰峰面積之和應小于對照溶液的鹽酸格拉司瓊色譜峰的峰面積。

3.2 鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑穩定性實驗

3.2.1 穩定性樣品的檢測結果 具體見表1。

表1 鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑穩定性樣品測定結果Tab 1 Test results of granisetron hydrochloride nasal spray samples for stability study

3.2.2 加速實驗 加速實驗結果表明：三批樣品在40℃、RH75%下放置6個月，外觀、pH值、主藥含量、有關物質檢查等均符合規定。 0天和6個月的結果見表2。

3.2.3 室溫長期留樣觀察 室溫長期留樣36個月的實驗結果表明：三批樣品外觀、pH值、主藥含量、有關物質檢查等均符合規定。0天和36個月的結果見表3。

表2 鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑加速實驗結果Tab 2 Results of accelerated test on granisetron hydrochloride nasal spray

表3 鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑室溫長期留樣實驗結果Tab 3 Results of long term observation on granisetron hydrochloride nasal spray

4 討論

對于嘔吐患者來說，口服給藥依從性較差，而注射給藥不僅需要專業的人員和特定的環境，對人體還會產生一定的損傷，因此，止吐藥的新給藥途徑研究日益受到重視，其中，鼻腔給藥途徑尤為引人注目[3]。鹽酸格拉司瓊的新給藥途徑研究有鼻腔給藥[6-10]和透皮給藥[11]的文獻報道，以鼻腔給藥的報道居多。

上述報道多為鹽酸格拉司瓊鼻腔給藥的藥物動力學及藥效學方面的研究，而要將其開發成新藥并應用于臨床，制劑學的研究不可或缺。穩定性研究作為新藥研究中制劑學研究的重要內容之一，對于保證藥品質量具有重要意義，故而我們對鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑的穩定性進行了系統研究。經過6個月的加速實驗和36個月的長期留樣觀察，鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑的外觀、pH值、主藥含量、有關物質等各項考察指標均符合規定，該制劑穩定性良好。鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑的穩定性研究國內外尚未見報道，本研究可為同類研究提供參考。本文結果還可為將來鹽酸格拉司瓊鼻腔噴霧劑之上市產品的有效期制定提供參考，但上市產品的有效期仍要以實際大生產的產品進行穩定性研究后確定。