氯沙坦及其代謝物在朝鮮族和漢族健康人體內的藥代動力學

楊長青，楊 璐，郭 濤，夏東亞（. 中國藥科大學藥學院，江蘇 南京 0009；. 沈陽藥科大學藥學院，遼寧 沈陽 006；. 沈陽軍區總醫院藥劑科，遼寧 沈陽 0840）

氯沙坦（losartan）是非肽類血管緊張素Ⅱ受體AT1拮抗藥，具有與AT1受體親和力強、高選擇性阻滯受體AT1、只影響血管緊張素Ⅱ受體、無激動活性的特點，是常用的降壓藥，在體內被CYP2C9代謝成具有長效降壓活性的E-3174[1]。本文首次進行了氯沙坦在中國朝鮮族和漢族健康人體以及不同性別間的藥代動力學比較，為臨床合理用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀，包括600型四元泵，717自動進樣器，2475熒光檢測器，Empower色譜工作站（美國waters公司）；YKH-2液體快速混合器（江西醫療器械廠）；KQ3200DE型超聲波清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）；TDL-5型低速離心機（上海醫療器械三廠）；AEL-160電子分析天平（日本島津公司）；PB-10型pH計。

1.2 藥品和試劑

氯沙坦鉀片（杭州默沙東制藥有限公司，規格：0.05 g/片，批號09020）；氯沙坦對照品（中國藥品生物制品檢定所，純度＞ 98.0%，批號100597-200501）；E-3174對照品（加拿大TRC公司，純度＞ 99.0%，批號1-IHB-144-2）；纈沙坦對照品（北京賽科藥業，純度＞ 99.0%，批號0806028）；乙腈，甲醇（色譜純，美國Fisher公司）；其余試劑均為分析純。

1.3 受試者選擇

選擇朝鮮族健康受試者10名，男女各5名，年齡（23±1）歲，體重（64.4±11.3） kg，身高（169.6±7.8）cm，體重指數（22.3±2.6）；漢族健康受試者10名，男女各5名，年齡（23±1）歲，體重（57.4±6.5） kg，身高（167.3±7.2） cm，體重指數（22.5±1.2）。受試者父母、祖父母、外祖父母三代均為同族婚配。體格檢查示肝、腎功能正常，ECG檢查、血、尿常規無異常，無既往慢性病史，無凝血障礙，無代謝異常史、藥物過敏史、精神病史及藥物依賴史，不嗜煙酒。整個試驗期間不得服用其他藥物。所有項目正常者方可入選，并簽署知情同意書。試驗方案經沈陽軍區總醫院醫學倫理委員會批準。

1.4 給藥方法及樣品采集

健康受試者于試驗前1日19:00開始禁食，試驗當日7:00空腹口服單劑量氯沙坦鉀片50 mg，用200 mL溫開水送服，服藥2 h后方可飲水，4 h后進食統一的標準飲食。服藥后受試者避免劇烈運動。于服藥前（0 h）和服藥后0.33、0.66、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、6.0、8.0、12、24 h由前臂靜脈取血4 mL置肝素抗凝的離心管中，取靜置離心后的血漿樣品，冷凍保存備用。

1.5 血藥濃度測定

1.5.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm, 5 μm）；流動相：0.02 mol·L-1磷酸二氫鈉緩沖液（用磷酸調pH=2.35）-乙腈（57∶43）；流速：0.5 mL·min-1；柱溫：室溫；熒光檢測激發波長：250 nm，發射波長：370 nm；進樣量：20 μL。

1.5.2 血漿樣品處理 取血漿0.5 mL，分別加入甲醇100 mL，內標溶液（40 ng·mL-1纈沙坦溶液）50 mL，6%甲酸溶液100 mL，渦旋混勻30 s；加乙醚5 mL，渦旋混勻5 min，4000 r·min-1離心10 min，分取上層有機相于另一試管中，于40 ℃氮氣流下吹干，殘留物加入流動相100 mL溶解，取20 mL進行HPLC分析[2]。

1.6 數據處理

采用DAS2.0軟件進行血藥濃度數據處理，AUC0-24用梯形法計算。Cmax，tmax用實測值。采用SPSS13.0軟件進行統計學分析，比較不同性別受試者的藥動學參數，其中tmax、t1/2采用非參數秩和檢驗。

2 結果

2.1 色譜行為

在所建立的色譜條件下，氯沙坦、E-3174、內標與血漿組分分離良好，保留時間分別為12.1、20.3、28.2 min。典型色譜圖見圖1。

圖1 典型的高效液相色譜圖A – 空白血漿；B – 空白血漿＋對照品；C – 漢族受試者服用50 mg氯沙坦后血漿；D – 朝鮮族受試者服用50 mg氯沙坦后血漿；1 – 氯沙坦；2 – E-3174；3 – 纈沙坦（內標）Fig 1 HPLC chromatogramsA – blank plasma; B – blank plasma spiked with losartan, E-3174 and internal standard (IS, valsartan); C – plasma obtained from a Han volunteer after an oral dose of 50 mg losartan; D – plasma obtained from a Korean volunteer after an oral dose of 50 mg losartan; 1 –losartan; 2 – E-3174; 3 – valsartan(IS)

2.2 方法學評價

氯沙坦和E-3174標準曲線的線性范圍分別為10～ 1000 ng·mL-1和5 ～ 1000 ng·mL-1，r = 0.998 6 和r =0.998 1，定量下限分別為10 ng·mL-1和5 ng·mL-1；氯沙坦和E-3174的方法回收率分別為（101.9±8.0）%和（106.4±5.2）%，提取回收率分別為（69.8±0.9）%和（68.7±1.8）%，日內、日間精密度＜ 8.3%；血漿樣品在室溫放置12 h、凍融3次以及– 20 ℃保存30 d的條件下穩定性試驗結果偏移在±5.0%內，均滿足生物樣品分析方法的要求。測定血漿樣品時，于每個分析批內隨行測定低、中、高3種濃度的QC樣品，結果RSD值均小于15%，符合生物樣品測定的要求。

2.3 安全性評價

20名健康受試者均未發生明顯不良反應，說明志愿者在試驗期間單劑量口服氯沙坦鉀片耐受良好。

2.4 血藥濃度與藥動學參數

10名朝鮮族和10名漢族受試者口服單劑量氯沙坦鉀片50 mg后，氯沙坦的平均血藥濃度-時間曲線見圖2，E-3174的平均血藥濃度-時間曲線見圖3。藥動學參數見表1。

圖2 口服氯沙坦鉀片50 mg后氯沙坦的平均藥-時曲線圖Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of losartan after oral administration of 50 mg losartan potassium tablet

圖3 口服氯沙坦鉀片50 mg后E-3174的平均藥-時曲線圖Fig 3 Mean plasma concentration-time curves of E-3174 after oral administration of 50 mg losartan potassium tablet

表1 20名健康受試者口服50 mg氯沙坦鉀片后主要藥動學參數. n = 10, ±sTab 1 Pharmacokinetic parameters of 20 healthy volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 10, ±s

表1 20名健康受試者口服50 mg氯沙坦鉀片后主要藥動學參數. n = 10, ±sTab 1 Pharmacokinetic parameters of 20 healthy volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 10, ±s

注：與朝鮮族比較，*P ＜ 0.05Note: compared with Korean volunteers, *P ＜ 0.05

參數 氯沙坦 E-3174朝鮮族 漢族 朝鮮族 漢族AUC0-∞/ng·h·mL-1 752.0±331.0 523.0±184.0*2 608.0±766.0 1 960.0±182.0 t1/2/h 1.5±0.4 0.8±0.4* 3.1±0.7 4.7±1.1*tmax/h 0.9±0.4 1.3±1.1 2.4±0.8 3.6±1.7 CL/L·h-1 79.0±38.2 106.5±36.3 20.6±5.5 25.7±2.5 Vd/L 165.0±91.7 115.0±43.4 87.6±14.8 170.0±30.5*Cmax/ng·mL-1524.0±349.0 351.0±168.0 493.0±188.0 242.0±60.0*

經SPSS軟件進行統計學分析，結果顯示朝鮮族和漢族健康受試者口服單劑量氯沙坦鉀片后，氯沙坦的藥動學參數t1/2、AUC0-∞和E-3174的藥動學參數Cmax、t1/2、Vd差異有顯著性（P ＜ 0.05）。

2.5 不同性別受試者藥動學參數的比較

20名朝鮮族和漢族不同性別健康受試者口服單劑量氯沙坦鉀片50 mg的主要藥動學參數見表2。經SPSS軟件進行統計學分析，結果顯示不同性別健康受試者口服單劑量氯沙坦鉀片后，氯沙坦和E-3174的藥動學參數差異均無統計學意義。

3 討論

細胞色素P450是重要的參與藥物Ⅰ相反應氧化、還原、水解的藥物代謝酶，具有臨床意義的藥物反應變異和細胞色素P450酶的活性存在遺傳多態性有關[3-5]。不同種族的人有著不同的生存環境、飲食習慣、營養狀況等，造成基因遺傳上的千差萬別，因而種族間存在藥物代謝差異的可能性非常大[6-7]。

口服單劑量氯沙坦鉀片后，朝鮮族與漢族健康受試者氯沙坦的藥動學參數t1/2、AUC0-∞和E-3174的藥動學參數Cmax、t1/2、Vd差異有統計學意義（P ＜ 0.05）。

表2 男性和女性健康受試者單劑量口服50 mg氯沙坦后的藥動學參數比較. n = 5, ±sTab 2 The comparison of pharmacokinetic parameters between male and female volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 5, ±s

表2 男性和女性健康受試者單劑量口服50 mg氯沙坦后的藥動學參數比較. n = 5, ±sTab 2 The comparison of pharmacokinetic parameters between male and female volunteers after a single oral dose of 50 mg losartan. n = 5, ±s

E-3174朝鮮族 漢族 朝鮮族 漢族男性 女性 男性 女性 男性 女性 男性 女性t1/2/h 1.6±0.5 1.3±0.3 0.9±0.7 0.8±0.2 2.9±0.4 3.3±0.9 4.8±1.2 3.8±0.8 tmax/h 1.1±0.4 0.7±0.3 1.7±1.5 0.9±0.2 2.9±0.5 1.9±0.7 3.8±1.6 2.2±0.4 Cmax/ng·mL-1 307.0±150.0 794.0±344.0 338.0±216.0 382.0±156.0 363.0±36.0 622.0±191.0 206.0±29.0 366.0±85.0 CL/L·h-1 97.7±41.4 57.7±20.6 122.0±47.5 100.0±26.2 23.0±5.3 18.1±5.1 25.7±2.9 25.9±4.1 Vd/L 213.0±97.6 105.0±33.6 123.0±48.8 112.0±47.9 93.2±10.9 81.9±17.1 174.0±23.7 143.0±36.8 AUC0-∞/ng·h·mL-1 314.0±237.0 955.0±342.0 482.0±262.0 522.0±125.0 2 257.0±474.0 2 958.0±886.0 1 966.0±213.0 1 973.0±337.0氯沙坦參數

在藥物吸收方面，原型藥的Cmax與吸收的關系密切，朝鮮族人體內氯沙坦的Cmax是漢族人的1.5倍，表明朝鮮族和漢族人對藥物的吸收存在差異。另外，在藥物的代謝方面，氯沙坦在朝鮮族人中t1/2為1.4 h，漢族人為0.8 h，前者是后者的1.75倍，表明漢族人對藥物的代謝更快。CYP2C9的藥物代謝多態性存在很明顯的種族差異，可能是藥物產生藥動學差異的原因[8]。

不同性別間藥動學參數的差異雖然不存在統計學意義，但從藥動學參數的數值比較上來看，氯沙坦和E-3174的Cmax在女性體內均比在男性體內高，且男性的V/F均比女性大，這可能與男性體重、體液、肌肉量多于女性，從而影響了藥物及其代謝物在受試者體內的分布及吸收有關。另外，男性氯沙坦的t1/2較女性的長，可能是因為氯沙坦除了經CYP2C9代謝，還經CYP3A4代謝[9-10]，CYP3A4具有種族差異和性別差異，女性體內CYP3A4活性高于男性，這可能導致氯沙坦在女性體內比在男性體內代謝得快[11]。