黃體數量對綿羊胚胎移植成功率的影響

張 浩 付靜濤 艾君濤 段素云 曹 靖 李彥俠 李 璟 肖西山

（北京農業職業學院，北京 102442）

胚胎移植是胚胎生物技術的重要組成部分，以引進品種和品種改良為主的綿羊胚胎移植技術研究與應用發展迅速。在國內，綿羊胚胎移植及相關生物技術除了費用高外，移植妊娠率還不太理想，影響其推廣及產業化進程[1]。胚胎移植是一個復雜的生理過程，涉及到胚胎、子宮內環境以及黃體之間的一系列復雜的生理、生化指標，其中有些已為人們所掌握，另有不少的問題尚在研究探索之中[2]。目前，盡管胚胎移植技術在綿羊的繁殖、育種中已體現獨特的優越性，但由于在胚胎移植的各個技術環節上還存在諸多問題，所以本實驗通過對卵巢移植側上黃體數量對鮮胚和凍胚妊娠率影響的比較研究，為綿羊胚胎移植產業化提供理論和技術參考。

1 材料與方法

1.1 供體母羊的選擇及飼養管理

供體母羊為從澳大利亞引進的純種道塞特、薩福克、杜伯三種綿羊，年齡為1～4歲，健康，無繁殖疾病。

1.2 受體母羊的準備和飼養管理

綿羊的受體品種為小尾寒羊；年齡2～5歲，健康，無繁殖疾病；同期發情前至少1個月進行補飼。

1.3 藥品

Progestagen Sponge（孕酮海綿栓）：澳大利亞Intervet Pty.Ltd. 生產，0.5 g/支。

PMSG：天津實驗動物中心，1 000 IU/支。

5%亞硒酸鈉維生素E注射液：亞硒酸鈉10 mg+500 IU維生素E/10 ml/支（東臺市動物藥廠，上海，批號：020405）。

1.4 受體羊同期發情

采用陰道埋置孕酮海綿栓和注射PMSG對受體羊進行同期發情處理。

在受體羊發情周期的任意一天埋置孕酮海綿栓，第12 d注射PMSG 280 IU并同時取出海綿栓，然后觀察發情。

1.5 冷凍胚胎來源

胚胎引自于澳大利亞維多利亞省Hamilton，胚胎全部用乙二醇溶液冷凍。

1.6 胚胎解凍方法

胚胎采用二步法解凍。解凍液1：0.33M蔗糖+0.5M的EG/PBS；解凍液2：0.33M蔗糖/PBS。胚胎從液氮罐中取出，在空氣中（室溫25℃）停留10 s，在32℃水浴中10 s，將胚胎推出依次放入解凍液1和2中各5～6 min，之后在保存液中洗3～4遍后備移植。

1.7 胚胎移植方法

采用腹腔鏡法進行移植。

1.8 統計分析

采用SAS檢驗。

2 結果

2.1 移植側卵巢黃體數量不同對綿羊受體鮮胚移植妊娠率的影響

本實驗對綿羊受體移植側卵巢上含有1、2、3個黃體的鮮胚移植妊娠率進行比較，結果各組間差異不顯著，但3個黃體的鮮胚移植妊娠率高于2個和1個黃體的鮮胚移植妊娠率，2個黃體的鮮胚移植妊娠率稍高于1個黃體的鮮胚移植妊娠率。詳見表1。

表1 綿羊受體移植側有1、2、3個黃體對鮮胚移植妊娠率的影響

2.2 移植側卵巢的黃體數量不同對綿羊受體凍胚移植妊娠率的影響

對移植側卵巢上含有1或2個黃體的409只綿羊受體凍胚移植妊娠率進行比較，結果各組間差異不顯著，說明只要黃體質量好，1或2個黃體都可以進行移植，但2個黃體的受體移植妊娠率稍高。詳見表2。

表2 綿羊受體移植側卵巢有1或2個黃體對凍胚移植妊娠率的影響

圖1 黃體數量對受體綿羊鮮胚和凍胚移植妊娠率比較

3 討論

黃體是排卵后的卵泡形成的一個臨時性內分泌器官，主要分泌孕酮，維持早期妊娠[3]。黃體分泌的孕酮使胚泡在適當的時候在子宮著床。孕酮還能阻止子宮平滑肌層的收縮，防止流產[4]。當機體內孕酮濃度較高時，可誘導T細胞產生巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF），白血病抑制因子（LIF）及輔助性T細胞（Th）2型細胞因子[5]。孕酮可阻止有絲分裂原刺激的淋巴細胞增殖，延長同種異體移植物的存活時間；降低單核細胞的氧化代謝，減少巨噬細胞對細菌反應中產生的促炎性細胞因子，以維持正常的妊娠環境[6]。

受體綿羊移植側黃體數量對鮮胚移植妊娠率并非越多越好，一般1～3個較好。3個黃體效果好于2個黃體，1個黃體妊娠率最低，可能與黃體分泌的孕激素含量有關。由于本實驗中4個或4個以上黃體的情況很少，移植妊娠率很低，故未進行對比。

綿羊受體移植側黃體數量1或2個對凍胚移植妊娠率無顯著影響（3個以上黃體的受體數量很少，故未做比較），這兩種情況都可進行移植。

本研究表明只要黃體質量好，移植側1～3個黃體都可以進行移植，同時進一步量化了移植側黃體數量對鮮胚和凍胚移植妊娠率的影響。

[1] 史小林. 人類生殖學[M] . 北京：科學出版社，2001.

[2] BlandauRJ，Brackett B，Brenner RM，et al. The oviduct. In：GreepRO，Koblinsky MA，eds. FrontiersinReproduc-tionandFertility Control[M] . Cambridge，MA：MIT Press，1977.

[3] 朱杰，童先宏. 孕酮與妊娠關系的研究進展[J]. 國際生殖健康/計劃生育雜志.2012，31（2）：133-136.

[4] Beagley KW，Cockel CM. Regulation of innate and adaptive immunity by the femal sex hormones oestradiol and progesterone[J].FEMS Immunol Med Microbiol，2003，38（1）：13-22.

[5] Duan L，Yan D，Zeng W，et al. Effect of progesterone treatment due to threatened abortion in early pregnancy for obstetric and perinatal outcomes [J]. Early Hum Dev，2010，86（1）：41-43.

[6] 郭淑華.哺乳動物黃體發生的分子機制[J]. 濰坊學院學報.2009，9（4）：90-93.