重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗(H5N1，Re-4+Re-5)免疫肉鴿效果試驗

栗 新，胡祖余，王舉勇，占松鶴

(1.安徽省六安市裕安區(qū)動物疫情測報站，安徽六安 237000;2.安徽省動物疫病預防與控制中心，合肥 230000)

重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗(H5N1，Re-4+Re-5)是用于預防由H5亞型禽流感病毒引起的禽流感，在我國受變異毒株威脅區(qū)的種雞、蛋雞使用普遍[1]，水禽免疫也有記載[2-3]，但在預防肉鴿禽流感方面未見報道。為了解該種禽流感疫苗不同劑量對肉鴿的免疫效果以及探討免疫程序，從而指導肉鴿養(yǎng)殖場合理使用禽流感疫苗，本研究開展了免疫肉鴿效果試驗。

1 試驗材料

1.1 禽流感疫苗 重組禽流感H5亞型二價滅活疫苗 (H5N1，Re-4+Re-5)批號為011161，由肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司提供。

1.2 試驗動物 試驗動物為人工飼養(yǎng)的美國王鴿，從安徽省裕安區(qū)選取2個規(guī)模飼養(yǎng)場(Ⅰ場、Ⅱ場)開展試驗。Ⅰ場存欄肉鴿4660只，其中1月齡以上肉鴿3700只;Ⅱ場存欄肉鴿5720只，其中1月齡以上肉鴿4250只。所有試驗鴿均未接種過禽流感疫苗。

1.3 診斷試劑 H5(Re-4)診斷抗原(批號201101)和陽性血清(批號201101)、H5(Re-5)診斷抗原(批號201102)和陽性血清(批號201003)，均購于哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司。

2 試驗方法

2.1 試驗前準備 接種疫苗前一周內(nèi)，對實驗場地環(huán)境進行消毒。同時采集肉鴿肛拭子10份，進行H5亞型病原學檢測，采集40份血樣進行禽流感H5(Re-4)、H5(Re-5)亞型抗體檢測。

2.2 試驗分組 每場隨機選擇1月齡以上肉鴿320只，均分8個組，進行隔離試驗，其中7個組分別注射 0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、1.5、2.0 mL 試驗疫苗，另外1組作空白試驗對照。

2.3 免疫接種 使用連續(xù)注射器，采用胸部肌肉注射方法接種疫苗，并給試驗肉鴿打上腳環(huán)，做好記錄。

2.4 二次免疫 選擇注射0.2、0.3、0.4、0.5 mL疫苗試驗組肉鴿，在第一次免疫后第3周，將已免肉鴿半數(shù)進行第二次免疫，免疫劑量、疫苗類型與首次免疫一致。1.0、1.5、2.0 mL試驗疫苗組不進行第二次免疫。

2.5 樣品采集 第一次免疫后2周開始采血，以后每周采血一次，每次每組隨機采血5份，連續(xù)采血8周。每只鴿翅膀下靜脈采血2 mL，分離血清，冷凍保存?zhèn)錂z。

2.6 抗體監(jiān)測 按《中華人民共和國國家標準——高致病性禽流感診斷技術》(GB/T18936-2003)規(guī)定的操作規(guī)范進行血凝和血凝抑制試驗，檢測H5亞型(Re-4、Re-5)禽流感抗體效價，判定檢測結果，每組求取抗體效價平均值，繪制折線圖[4]。

3 結果與分析

3.1 免疫前抗體檢測 H5亞型病原學檢測陰性(委托安徽省動物疫控中心實驗室檢測)，H5亞型(Re-4)、(Re-5)抗體檢測為陰性，空白對照組抗體檢測一直呈陰性。

3.2 不同劑量禽流感疫苗初次免疫抗體消長規(guī)律

H5(Re-4)抗體:由圖1可見，注射劑量大，抗體產(chǎn)生滴度高、峰值早、維持時間長、下降幅度小。0.2、0.3 mL組免后3周達有效保護水平，第5周達到峰值，能維持5余周;0.4、0.5 mL組免后第2周達有效保護水平，第4～5周達到峰值，能維持7余周;1.0、1.5、2.0 mL 組免后第2周達8 ～9 log2，第4周達到峰值，第9周下降到6.5 log2。

圖1 禽流感二價苗免疫一次肉鴿(Re-4)抗體變化水平

H5(Re-5)抗體:由圖2可見，注射劑量大，抗體產(chǎn)生滴度高、維持時間長、下降幅度小。0.2、0.3 mL組免后第3周達有效保護水平，第4周達到峰值，只能維持3～4周;0.4、0.5 mL組免后第2周達到有效保護水平，第4～5周達到峰值，能維持7余周;1.0、1.5、2.0 mL組免后第2周達6 log2以上，第4周達到峰值，第9周下降到6 log2左右。

圖2 禽流感二價苗初次免疫肉鴿(Re-5)抗體變化水平

3.3 不同劑量禽流感疫苗第二次免疫抗體消長規(guī)律 H5(Re-4)抗體:由圖3可見，H5第二次免疫后第1周，各組Re-4抗體測定值在6.5～9.5 log2之間，第2周達到峰值7～10 log2，整體高于同期初次免疫，且抗體水平曲線上下起伏不大，預計經(jīng)過二次免疫肉鴿，到初次免疫后第12周，抗體滴度仍能達到保護水平。

H5第二次免疫Re-5抗體:由圖4可見，H5第二次免疫后第1周，各組Re-5抗體測定值在7～8 log2之間，第2周達到峰值7.2～9.3 log2，整體高于同期初次免疫，且抗體水平曲線上下起伏不大，預計經(jīng)過二次免疫肉鴿，到初次免疫后第12周，抗體滴度也能達到保護水平。

圖3 禽流感二價苗第二次免疫肉鴿(Re-4)抗體變化水平

圖4 禽流感二價苗第二次免疫肉鴿(Re-5)抗體變化水平

4 小結

本試驗證實了H5(Re-4+Re-5)亞型禽流感滅活疫苗免疫肉鴿的有效性，初次免疫的Re-4比Re-5抗體形成效果好，相對高出1個抗體滴度，且二者都是注射劑量大，抗體產(chǎn)生滴度高、維持時間長、下降幅度小。第二次免疫效果二者相近，都比初次免疫整體效果好，0.2、0.3 mL低劑量接種組初次免疫抗體形成效果不太理想，但加強免疫后抗體水平迅速上升，第二次免疫后2周達到峰值，而且下降緩慢，預計到初次免疫后第12周，抗體滴度也能達到保護水平。

最佳免疫劑量:選免一次，H5(Re-4)和H5(Re-5)都是至少注射疫苗0.4 mL;選免二次，H5(Re-4)、H5(Re-5)同劑量第二次免疫至少注射疫苗0.3 mL。

推薦免疫程序:鑒于肉鴿生性敏感，應激反應強，但天生免疫能力就好等生物學習性[5]，結合本試驗數(shù)據(jù)，對1月齡內(nèi)出欄的商品肉鴿可不免或選免一次，1～2周齡每只接種0.4 mL。對1～6月齡青年肉鴿，可選免二次，一種是1～2周齡首免，4周齡進行第二次免疫;另一種是4周齡首免，6周齡進行第二次免疫，每只每次都是接種0.3 mL。對選育的種鴿，在6月齡開產(chǎn)前2周進行三免，每只接種0.3 mL，以后相同劑量每半年免疫一次[6-7]。

[1]農(nóng)業(yè)部農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2012〕1號.2012年國家動物疫病強制免疫計劃[S].

[2]陳桂英.鴨免疫重組禽流感病毒H5亞型二價滅活苗(H5N1，Re-5+Re-4)后抗體水平分析[J].中國獸醫(yī)雜志，2011，47(7):27-28.

[3]陳永忠，李俊平，李啟紅，等.重組禽流感病毒H5亞型二價滅活疫苗(H5N1，Re-5+Re-4)免疫雞和鴨后抗體消長規(guī)律[J].中國獸醫(yī)雜志，2010，46(5):20-21.

[4]GB/T18936-2003，高致病性禽流感診斷技術[S].

[5]李綬章.肉鴿鵪鶉飼料科學配制與應用[M].北京:金盾出版社，2008:17-18.

[6]陳坤永，翁良樹，張祥解，等.種鴿免疫禽流感疫苗HI抗體水平消長規(guī)律的調研[J].養(yǎng)禽與禽病防治，2004，(7):12-13.

[7]周錦萍，劉佩紅，劉康明，等.重組H5N1亞型禽流感滅活苗對鴿免疫程序的初步研究「J」.中國獸醫(yī)雜志，2008，44(7):38-3009.