不同炮制方法對黃芩中黃芩苷含量的影響

李寶春

（安徽科技學院動物科學學院，安徽 鳳陽233100）

黃芩為唇形科黃芩屬植物黃芩的干燥根。其性寒味苦，歸肺、胃、膽、大腸經，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎之功效。中醫臨床用于治療肺熱咳嗽、高熱神昏、肝火頭痛、目赤腫痛、濕熱黃疸、瀉痢、胎熱不安等證［1］。現代藥理研究表明，黃芩具有抗菌、消炎、降壓、利尿、降血脂、抗變態反應等作用，這些作用與黃芩中含有多種黃酮類衍生物有關［2－3］，如黃芩苷、黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素、木蝴蝶素等，其中黃芩苷為主要有效成分之一。黃芩有多種炮制方法［4］，不同方法炮制的黃芩飲片中黃芩苷含量存在一定差異［5］。本文采用高效液相色譜法分別測定生黃芩、酒炒黃芩、焦黃芩、黃芩炭中黃芩苷的含量，以比較不同炮制方法對黃芩中黃芩苷含量的影響。

1 材料

1.1 藥品及試劑 黃芩飲片，購自安徽省鳳陽縣回春靈大藥房，由安徽科技學院中藥教研室老師鑒定；炮制品按《中華本草》所規定的炮制方法炮制；黃芩苷標準品，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110715－200212。甲醇（色譜純），美國Tedia公司生產，批號：Lot305064；甲醇（分析純），徐州試劑廠生產，批號：040303；磷酸（分析純），上海興達化工試劑廠生產，批號：030208；水為超純水。

1.2 儀器 Waters 1525高效液相色譜儀（包括Waters 2484型紫外檢測器，Waters Breeze數據處理系統），美國 Waters公司制造；JL－360臺式超聲波清洗器，J ＆ L上海分公司制造；FA1004電子天平，上海精科天平廠制造；HH－4數顯恒溫水浴鍋，常州國華電器有限公司制造；Millipore超純水器，法國Millipore Molsheim公司制造；368－A電熱恒溫鼓風干燥箱，上海向陽無線電元件廠制造；AG135電子天平，瑞典 Metter Toledo公司制造；粉碎機，安徽省明光市光明電器廠制造。

2 方法與結果

2.1 色譜條件［6］色譜柱 Hypersil C18（5μm，150 mm×4.6mm id）；流動相［7－9］：甲醇－水－磷酸（47∶53∶0.2）；流速：1mL／min；柱溫：25℃；檢測波長：280nm。

2.2 樣品溶液的制備

2.2.1 黃芩及其炮制品的制備（1）生黃芩：稱取干燥的黃芩飲片500g，去除雜質和霉變品，篩去灰屑，備用。（2）酒黃芩：稱取生黃芩飲片100g，用10 mL黃酒拌勻，悶潤至透，約6h左右，置熱鍋內，用文火炒至深黃色時，取出攤開放涼，篩去灰屑，備用。（3）焦黃芩：稱取生黃芩飲片100g，置熱鍋內用中火炒至焦黃色，取出攤開放涼，篩去灰屑，備用。（4）黃芩炭：稱取生黃芩飲片100g，置熱鍋內，用武火炒至表面焦黑色，內部焦黃色時，噴淋清水少許，滅盡火星，取出涼透，備用。

2.2.2 黃芩及其炮制品的粉碎 將生黃芩飲片和炮制好的黃芩飲片烘干，粉碎，過20目篩，待用。

2.2.3 樣品溶液的制備 稱取生藥粉末（60℃干燥4h）1g，置燒瓶中，加50%甲醇50mL，水浴回流加熱1h，趁熱過濾，以適量50%甲醇洗滌容器和殘渣兩次，濾液全部并入100mL容量瓶中，然后再以50%甲醇補至100mL作為儲備液。精密吸取1.0 mL，置10mL容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，然后過0.45μm濾膜兩次，得黃芩生藥樣品溶液Ⅰ。其他3種炮制品也分別按生藥樣品溶液Ⅰ的制備方法處理，得酒炒黃芩樣品溶液Ⅱ、焦黃芩樣品溶液Ⅲ和黃芩炭樣品溶液Ⅳ。

2.3 標準曲線的制備 稱取黃芩苷標準品1mg，用50%甲醇溶解定容至10mL，得標準品溶液A（0.1mg／mL）。取標準品溶液A適量，分別稀釋2倍、4倍、10倍、20倍，得標準品溶液 B（0.05mg／mL）、C（0.025mg／mL）、D（0.01mg／mL）、E（0.005mg／mL），均過0.45μm 濾膜1次，然后分別吸取A、B、C、D、E各20μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，峰面積積分值分別為12 996、6 315、3 179、1 312、658。以峰面積積分值Y為縱坐標，標準品溶液進樣量X（μg）為橫坐標進行回歸，得回歸方程為Y＝6391.863X＋9.651，r＝0.9986，線性范圍為0.1～2.0μg。空白組、標準品及樣品的色譜圖見圖1。

圖1 對照品和樣品的高效液相色譜圖

2.4 精密度試驗 取上述標準品溶液C，重復進樣5次，每次20μL，記錄峰面積分別為3 212、3 178、3 226、3 210、3 189，平均峰面積為3 203，相對標準偏差（RSD）為0.60%。

2.5 穩定性試驗 吸取樣品溶液Ⅰ20μL，每1.5h進樣1次，共測定5次，記錄峰面積分別為8 632、8 709、8 669、8 605、8 674、8 658，平均峰面積為8 658，RSD為0.46%，表明樣品在7.5小時內穩定。

2.6 重復性試驗 按樣品提取方法分別制備5份黃芩生藥樣品溶液，然后各取20μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄峰面積分別為8 693、8 637、8 715、8 667、8 612，平均峰面積為8 667，RSD為0.48%。

2.7 樣品含量測定 分別吸取樣品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各20μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄峰面積，并計算樣品溶液中黃芩苷含量，再重復操作2次，記錄結果，見表1。

由試驗結果可知，不同炮制方法對黃芩中黃芩苷成分的影響較大，生黃芩、酒炒黃芩、焦黃芩、黃芩炭中黃芩苷的含量依次降低。

表1 黃芩及其炮制品中黃芩苷的含量（%）

2.8 加樣回收率試驗 稱取5份已知黃芩苷含量的生藥粉末0.1g，分別加入精密稱定的黃芩苷標準品0.55mg，然后按樣品溶液制備方法處理，在同樣的色譜條件下測定其中黃芩苷的含量，并計算回收率和RSD，記錄結果，見表2。

表2 生黃芩中黃芩苷的回收率

3 討論

3.1 在一定溫度和濕度條件下，黃芩苷可被黃芩酶酶解成葡萄糖醛酸和黃芩苷元，而黃芩苷元不穩定，易被氧化。

3.2 黃芩酶以冷水浸潤時其活性最大，故炮制前不能用冷水浸潤處理，應沸水煮10min左右，以殺酶保苷。

3.3 黃芩苷遇光、熱易分解變化。因此，提取時應控制受熱溫度、縮短受熱時間，提取液應低溫避光保存。

3.4 測定黃芩苷含量，須選用快速準確的測定分析方法－高效液相色譜法，既提高了黃芩苷的分離效果，與紫外分光光度計測定法相比，試驗的準確度和精密度也得到提高。

3.5 黃芩苷有一定的脂溶性。在提取時采用醇作溶劑，大大增加了黃芩苷的溶出率。文獻報道黃芩中黃芩苷的提取，可用70%乙醇［10］或50%甲醇［8］作溶劑，前者回流提取時間約3h，后者約需1h，由于本試驗所用流動相中含有甲醇，所以選用50%甲醇為提取溶劑。

3.6 甲醇－磷酸水溶液為分離黃芩苷常用的流動相，通過試驗得出0.04%的磷酸水溶液即可有效分離黃芩苷，此法簡便可靠，故本試驗采用甲醇－水－磷酸（47∶53∶0.2）作為流動相，效果較好。

4 結論

試驗結果表明，生黃芩飲片中黃芩苷含量最高，酒炒黃芩、焦黃芩、黃芩炭飲片中黃芩苷含量依次下降，表明不同的炮制方法對黃芩中黃芩苷的含量有很大的影響。

［1］《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編（上冊）［M］.北京：人民衛生出版社，1975：759.

［2］Fusen.Studies on the Constitents of Scutellaria Species VI，on the Flavonoid Constitents of the Root of Scutellaria baicalensis GEORGI（5）Quantitative Analysis of Flavonoids in Scutellaria Root by High－Performance Liquid Chromatography［J］.Chromatography，1995，10（5）：148.

［3］K.Sagara.Simultaneous Determination of Baicalein，wogonin，oroxylin－a and their glucuronides in scutellariae radix by ionpair high－performance liquid chromatography［J］.Chromatography，1985，32（8）：289.

［4］王孝濤.歷代中藥炮制法匯編［M］.南昌：江西科學技術出版社，1998：127.

［5］葉定江，張世臣.中藥炮制學［M］.北京：人民衛生出版社，1999：375.

［6］王慕鄒.常用中草藥高效液相色譜分析［M］.北京：科學出版社，1999：319.

［7］相樂.用高效液相色譜法對黃芩中黃芩苷的定量［J］.醫藥品研究，1996，27：243.

［8］季逸云，黃啟娟，劉柏年.高效液相色譜法測定茵梔黃注射液中黃芩苷的含量［J］.中成藥，1997，19（3）：9.

［9］狄留慶，徐樞.HPLC法測定止喘霧化液中黃芩苷的含量［J］.中國現代應用藥學，2000，17（1）：42.

［10］傅桂蘭.HPLC法測定黃芩及其復方制劑中黃芩苷的含量［J］.中國中藥雜志，1994，19（12）：731.