Survivin在胃癌組織中的表達及臨床意義

孫延霞，石張鎮，盧振霞，張文龍

（吉林大學中日聯誼醫院1.血液腫瘤科；2.病理科，吉林 長春130033）

胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，發病率和死亡率居惡性腫瘤之首。其發生是一個漸進過程，發病機制目前尚未完全清楚，多數研究發現其發生與細胞凋亡受阻有關。Survivin是近年來發現的新的凋亡抑制分子，在凋亡和細胞周期的基因調控中發揮重要作用［1，2］。本實驗采用免疫組化方法檢測了胃癌、癌旁及正常胃粘膜組織Survivin蛋白表達，探討其在病理分期、淋巴結轉移、侵襲程度、預后等臨床特征方面的意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

實驗標本取自我院2003年1月－2008年5月胃癌手術切除標本54例，男35例，女19例，年齡最大90歲，最小46歲，平均52歲。術前術后均未行化療和放療。按2010年TNM分期標準分期，其中Ⅰ期12例，Ⅱ期17例，Ⅲ期15例，Ⅳ10例。其中腹主動旁淋巴結轉移陽性者18例，陰性者36例。病理分化程度：高分化癌29例，低分化癌25例。27例癌旁組織取自距癌組織0.5厘米－1.0厘米。10例正常胃粘膜，取自正常胃粘膜。以上組織均用10%福爾馬林固定，切片HE染色，由臨床病理專家閱片作出病理診斷。

1.2 試劑 Survivin兔抗人多克隆抗體為Santa Cruz公司產品。二抗及其相應試劑購于邁新公司。

1.3 方法 10%福爾馬林固定標本，石蠟包埋，切成4μm厚切片。采用鏈酶親和素－生物素－過氧化物酶復合物（SP）法（SP試劑盒 邁新公司產品），石蠟切片用二甲苯脫蠟，梯度酒精水化后用微波檸檬酸鈉修復20min，用過氧化物酶阻斷劑（A試劑）阻斷內源性過氧化物酶的活性，正常動物血清（B試劑）封閉非特異性抗體，滴加1∶25Survivin多克隆抗體（Santa Cruz公司產品sc－10811），4℃過夜。次日滴加生物素標記的第二抗體（C試劑）、鏈霉菌抗生素蛋白－過氧化物酶溶液（D試劑）、新鮮配制的3，3－二氨基聯苯胺（DAB）顯色，蘇木素復染，脫水、中性樹膠封固。已知陽性胃癌切片作為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定

以胞核、胞漿棕黃染色為陽性細胞，400倍鏡下計數500個細胞，≥10%為陽性，＜10%為陰性。由有經驗的兩名病理科專家判定結果。

2 結果

2.1 隨訪 隨訪至2008年12月31日，隨訪期6－104個月，中位隨訪期為36個月，死亡21例，生存27例，失訪6例，隨訪率88.8%，失訪率11.2%。

2.2 所有陽性片主要是胞核，部分胞漿棕黃色染色，陰性片不著色。Survivin蛋白在正常胃粘膜中無表達，在癌旁組織陽性率為14.8%，而在胃癌組織中陽性率達38.7%，兩者比較差異有顯著性意義（P＜0.01）（見表1）。在胃癌中表達的高低與其臨床分期、有無淋巴結轉移無相關性（P＞0.05）。但與腫瘤的惡性程度有明顯相關性（P＜0.05）（見表2）。

2.3 Survivin表達與預后的關系 Survivin高表達組與低表達組3年生存率分別為48.23%和21.45%，兩者比較差異有顯著性意義（P＜0.05）。

表1 胃癌組織、癌旁及正常胃粘膜中Survivin蛋白的表達

表2 Survivin胃癌中表達與臨床分期、有無淋巴結轉移及病理分級的關系

3 討論

腫瘤發生的過程與細胞增殖，分化及凋亡等密不可分。近年來研究發現細胞凋亡受抑是正常細胞演變成惡性細胞關鍵的一步［1，2］。參與細胞凋亡的基因較多，其中凋亡蛋白抑制因子（IAP）家族是一類抑制凋亡的因子，Survivin是新近發現的凋亡抑制因子，屬于IAP家族成員，其基因定位于17q25，編碼蛋白質分子量為16.5kD，它主要通過與Caspase3和Caspase7結合抑制其活性而阻斷細胞凋亡。研究表明其與胃癌的發生發展密切相關。Survivin在胚胎組織及大多數人類腫瘤組織中表達，而在正常組織中不表達，但在惡變時再次高表達［3.4］。

本實驗結果顯示在正常胃粘膜中檢測不到Survivin蛋白，癌和癌周組織中Survivin蛋白明顯升高，癌組織較癌周組織更高。與Kania等［5］結果一致，提示Survivin的存在代表著細胞生物學轉化的中間環節，其水平變化在正常胃粘膜向胃癌轉化中起重要作用［6］。

國外研究資料顯示，Survivin表達水平與卵巢癌、肝癌、非小細胞肺癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌、乳腺癌的預后相關。惡性腫瘤及臨界腫瘤的表達率明顯高于良性病變，并且與腫瘤細胞的增殖活性之間具有正相關性，過度表達者生存期短［7，8］。本研究結果顯示，Survivin表達與性別、年齡、淋巴結轉移、臨床分期均無關，而與病理分級及生存預后有關。Survivin高表達組3年生存率明顯低于低表達組。提示Survivin高表達細胞凋亡指數低，預后差。

總之，Survivin蛋白的過度表達在胃癌的發生、發展中起重要作用，有可能成為胃癌早期診斷及判斷預后的一個指標。

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