高效液相色譜法測定小兒清熱口服液中綠原酸的含量

王新曉 盧建峰 河南省葉縣中醫院（河南葉縣467200）

小兒清熱口服液是本院主任中醫師宋耀民近65年行醫之驗方，為醫院制劑室生產的院內制劑，由金銀花、青蒿、薄荷、連翹、冰片5味藥材組成。臨床上對小兒高熱效果明顯，為了控制其質量，本文采用了高效液相色譜法對綠原酸進行含量測定，現報道如下。

1 儀器與試藥 采用美國Waters510高效液相譜泵；Waters490E檢測儀；Waters745數據處理機。綠原酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號110753－200608。各種藥材均經漯河市藥檢所中藥鑒定專家呂斌教授鑒定。所用試劑均為分析純。

2 綠原酸的含量測定 2.1色譜條件 YWGC18柱（4.0mm×150mm，10μm）；流動相甲醇－水－四氫呋喃－冰醋酸（2.5：97：5：1.5）；流速1.5mm·min－1；檢測波長327nm；靈敏度0.05AUFS；紙速0.1mm·min－1。

2.2 綠原酸對照品溶液的配制 精密稱取綠原酸對照品10.1mg，置10mL容量瓶中，加入50%甲醇稀釋至刻度，搖勻即得Ⅰ號液。精密量取Ⅰ號液1mL置10mL容量瓶中，加入50%甲醇稀釋至刻度，搖勻即得Ⅱ號液。

2.3 供試樣品液的配制 精密量取樣品試液1mL，置50mL容量瓶中，加入50%甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.4 陰性液的配制 取除金銀花外的其余藥材，按制劑工藝制成陰性樣品，并按樣品供試液方法制成陰性藥液，再精密量取陰性藥液1mL，置50mL容量瓶中，加入50%甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.5 藥材液的配制 精密稱取藥材0.15g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻即得。

2.6 標準曲線的繪制 精密量取綠原酸對照品Ⅱ號溶液2、4、5、6、8μl進樣測定，以綠原酸進樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪圖。其回歸方程為：Y＝781483.90，X－15316.87，r＝0.9999，綠原酸標準品在0.201～0.807μg與峰面積有良好的線性關系。

2.7 精密度試驗 按照測定方法重復進樣5次，綠原酸峰面積積分值相對標準偏差RSD＝1.33%。

2.8 重現性試驗 按照測定方法重復測定5份樣品，綠原酸含量的相對標準偏差RSD＝0.4%

表1 小兒清熱口服液中綠原酸的回收率測定結果

2.9 加樣回收率試驗 精密量取5份樣品（批號：110618）各0.5mL，置50mL容量瓶中，精密吸取各樣品液，分別精密加入綠原酸對照品Ⅱ號溶液0.90、1.09、1.00、1.04、1.00mL，用50%甲醇定容至刻度，搖勻即得。按上述色譜條件測定，以下式計算回收率，結果如表1結果表明，本方法具有良好的回收率。

2.10 樣品測定 精密量取樣品液10μL進樣，依照上述色譜條件進行含量測定，結果見表2。

表2 綠原酸含量測定結果

3 結 論 3.1 綠原酸的HPLC的含量測定中曾用甲醇－水－乙腈－冰醋酸（3∶97∶12∶3）為流動相

但在測定過程中發現樣品分離不好，綠原酸峰拖尾現象比較嚴重，故調整流動相中各組分比例，把乙腈改為四氫呋喃，分離效果良好。

3.2 試驗中綠原酸的含量測定方法結果較好，與其它成分均可基線分離。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：205－206.

［2］韓長柏，王靜竹.黃梔花口服液質量標準研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，1996，（7）4：34.

［3］康庭國.中成藥薄層色譜鑒別［M］.北京：人民衛生出版社，1995：142.

［4］孫 瑩，呂 潔.藥物分析［M］.北京：人民衛生出版社，2010：81－85.