HPLC法同時測定維康松乳膏中氯霉素、地塞米松磷酸鈉含量

第四軍醫大學西京醫院藥劑科 （西安710032）

王 超 肖 茜△ 楊志福 劉 渝 關 月朱艷榮 趙 超 文愛東▲

維康松乳膏為我院研制的院內制劑，已在第四軍醫大學第一附屬醫院臨床應用近20年，其配方根據臨床經驗以及現代研究的不斷改進而為含氯霉素、地塞米松磷酸鈉等成分的外用復方制劑。為進一步控制維康松乳膏的質量，本文成功建立了以高效液相色譜法同時測定維康松乳膏中的兩種主要成分氯霉素和地塞米松磷酸鈉的方法。經方法學驗證，所建立的方法具有良好的精密度和回收率，現報告如下。

儀器與試藥

1 儀器 高效液相色譜儀Shi maduz LC-10 Avp（日本島津）；紫外分光光度計Spectronic Genesys 2（美國）；PHS-3C型精密PH計（上海雷磁儀器廠）

1.1 試劑：維康松乳膏、空白乳膏基質（第四軍醫大學西京醫院藥劑科制備）；氯霉素對標品（中國藥品生物制品檢定所，100016-200813），地塞米松磷酸鈉對照品（中國藥品生物制品檢定所，30555-200602），甲醇（色譜純，天津彪仕奇科技發展有限，09099501）。

1.2 色譜條件：分析柱 Dia monsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：0.2%三乙胺（磷酸調p H至2.8）∶乙腈＝70∶30；檢測波長240n m；流速：1.0 ml／min；室溫；進樣量：10μl。在此色譜條件下，主峰的理論塔板數為2326。

2 溶液的制備

2.1 對照品溶液的制備：精密稱取氯霉素對照品2.0001 mg、地塞米松磷酸鈉對照品2.0150 mg，分別置50 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，既得對照品儲備溶液。

2.2 樣品溶液的制備：精密稱取維康松乳膏2g，置100 ml量瓶中，加甲醇80 ml，置80℃水浴中加熱至溶解，取出冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，迅速冷卻2h以上，取出后立即濾過，取續濾液備用。

2.3 空白對照品溶液的配制：精密稱取按處方量制備的不含各成分的空白基質0.5g，按樣品溶液的制備方法操作，制成空白對照溶液。

3 檢測波長的確定 按2010版藥典中載錄，氯霉素的最佳檢測波長為277n m，地塞米松磷酸鈉的最佳檢測波長為242n m。依據維康松乳膏中，氯霉素含量比地塞米松磷酸鈉較高，且響應值也較高，故采用240n m作為檢測波長。

4 HPLC法專一性考察 分別將對照品溶液、空白基質溶液和樣品溶液10μl注入高效液相色譜儀，在240n m處測定吸收峰面積，保留時間分別為3.8 min和4.9 min，其對照品，空白基質及樣品的HPLC圖譜見附圖。

附圖 氯霉素對照品（A）、供試品（B）、氯霉素陰性對照品（C）、地塞米松磷酸鈉對照品（D）、地塞米松磷酸鈉陰性對照品（E）的HPLC色譜圖 （3.9 min：地塞米松磷酸鈉的峰；4.9 min：氯霉素的峰）

5 標準曲線的制備 精密吸取上述對照品溶液，分別用甲醇制成含量為0.21 mg／m1，0.30 mg／m1，0.41 mg／m1，0.52 mg／m1，0.60 mg／m1的氯霉素標準溶液以及0.10 mg／m1，0.15 mg／m1，0.20 mg／m1，0.26 mg／m1，0.31 mg／m1的地塞米松磷酸鈉標準溶液，在上述色譜條件下進行分析（n＝6），以標準對照品濃度（C）對峰面積進行線性回歸，分別得：氯霉素回歸方程：y＝79725x+53085，r＝0.9991；地塞米松磷酸鈉回歸方程：y＝125800x+129315，r＝0.999。求得分別求得氯霉素的含量為10.80 mg／g，地塞米松磷酸鈉的含量為5.44 mg／g。

6 精密度試驗 分別選擇高、中、低3個標準濃度的氯霉素和地塞米松磷酸鈉溶液，分別在日內和日間測定3次，計算日內和日間RSD%，結果見表1。

7 加樣回收率試驗 精密稱取維康松乳膏2.0g，置100 ml容量瓶中，加甲醇80 ml，置80℃水浴加熱至溶解，取出冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45？m）濾過，取續濾液。按同時測定色譜條件進樣10？l測定峰面積，計算含量。取已知含量的樣品溶液分別精密加入對照品溶液適量，攪勻后，按樣品測定方法測定含量，計算回收率，結果見表2、表3。

8 樣品測定 取精密稱取3批維康松樣品2.0g，按樣品溶液制備方法配制后，在相同色譜條件下測定峰面積，帶入回歸方程計算含量。結果3批樣品氯霉素含量分別為10.91 mg／g，10.72 mg／g，10.77 mg／g，5.74 mg／g，5.12 mg／g，5.45 mg／g。

表1 兩組療效比較

表2 氯霉素回收率測定結果（n＝6）

討 論

目前，關于治療各種皮膚疾病乳膏制劑的報道較多［1］，而在治療用藥上多選用氯霉素和地塞米松磷酸鈉等。維康松乳膏是經多年的臨床使用并不斷改進的院內制劑，其主要成分中就含有用氯霉素和地塞米松磷酸鈉。但能夠同時測定這兩種成分的方法卻尚未見報道。

表3 地塞米松磷酸鈉回收率測定結果（n＝6）

首先，本實驗為了增加維康松乳膏的質量可控性，使實驗操作更加方便，我們對乳膏的制樣方法進行了優化。結果證明，本實驗中所采用的制樣方法不僅操作簡單而且可將樣品中的有效成分完全提取。80℃水浴對主要成分氯霉素和地塞米松磷酸鈉均不產生影響，而甲醇的沸點是64.8℃，在這種情況下，樣品很快溶解［2］。而且，由于重力和甲醇蒸汽的原因瓶壁上的樣品快速溶解，而且較為充分。將溶解完全的液體迅速冷卻靜置2h后過濾，可使乳膏中的基質充分析出，排除了基質的干擾［3］。與此同時，還可以保護色譜柱，防止堵塞，大大延長了使用壽命［4，5］。

在該制樣方法的基礎之上，樣品中的成分相對較為純化，這就為使采用高效液相色譜法同時測定氯霉素和地塞米松磷酸鈉更加容易實現。根據氯霉素和地塞米松磷酸鈉的紫外吸收以及這兩種成分在維康松乳膏中的含量我們選擇240n m為檢測波長，使同時檢測的兩個峰高接近。同時我們堅持流動相最簡單的原則基礎之上用磷酸調節p H使峰形得到了有效矯正。

［1］姬存武，胡文慧，姬文晨.派瑞松乳膏加特定電磁波輻射治療濕疹療效觀察［J］.陜西醫學雜志，2009，7：903.

［2］馬惠玲，楊秀萍，左 瑩.蘋果渣蒸餾酒中甲醇去除方法的探究［J］.食品科學，2006，27：138-142.

［3］錢曉娟.紫外分光光度法測定鹽酸丁卡因注射液的含量［J］.西北藥學雜志，2003，18：6-7.

［4］Valenta C，Lexer A，Spiegl P.Analysis of clotri mazole in oint ments by high-perfor mance liquid chro matography［J］.Phar mazie，1992，47（8）：641-642.

［5］Di-Pietra A M，Cavrini V，Andrisano V，etal.HPLC analysis of i midazole anti m ycotic in drugs phar maceutical f ot mulations［J］.J Phar m Bio med Amal，1992，10（10-12）：873-879.