芳香療法對大鼠偏頭痛療效的實驗研究

第四軍醫(yī)大學基礎部教學實驗中心 （西安710032）

孫湘桐 蔡國洪 陳健康 于軍 張海鋒 趙玉峰 鐵 茹▲

偏頭痛是臨床常見多發(fā)病，以反復發(fā)作的偏側(cè)或雙側(cè)頭痛為特征，主要是遺傳特征和內(nèi)外因素作用的結(jié)果［1］。目前關于偏頭痛的發(fā)病機制研究尚無定論，針對偏頭痛的防治手段也各有利弊，而該病的發(fā)病率仍居高不下，國內(nèi)外患者所付出的物質(zhì)或精神方面的代價也相當巨大，因此防治偏頭痛藥物研究成為當今醫(yī)學研究的一項熱點。在研究偏頭痛的過程中人們發(fā)現(xiàn)，某些嗅覺刺激會誘發(fā)偏頭痛，一些患者在偏頭痛發(fā)作的先兆期也會出現(xiàn)嗅幻覺。美國芝加哥市味覺與嗅覺基金會一項研究證明：聞蘋果香可以有效緩解偏頭痛。專家分析這主要是因為偏頭痛與嗅覺會相互影響?；谝陨系挠^點，我們認為通過嗅覺刺激來治療偏頭痛具有廣闊的天地。

硝酸甘油型偏頭痛模型在國內(nèi)外均有報道，此模型方法簡單經(jīng)濟，機制單一，可在短期內(nèi)大量復制［2，3］。本實驗用SD大鼠進行硝酸甘油偏頭痛動物模型制作，用適宜氣味刺激，探討嗅刺激治療偏頭痛臨床治療的可行性，希望對臨床偏頭痛提供多樣的個體化和低副作用的治療方法。

材料和方法

1 動物及分組 24只SD大鼠，雄性，體重200±20g（由第四軍醫(yī)大學動物實驗中心提供），隨機分為四組，每組6只，分別為模型對照組、天舒膠囊治療組、氣味治療組、空白組。

2 實驗試劑 天舒膠囊1盒（每粒0.34g，臨用前用蒸餾水配成3.74g／100 ml）［4］、硝酸甘油注射液，每支5 mg／ml（由北京益民藥業(yè)有限公司提供，批準文號：國藥準字 H11020289）、小磨芝麻香油1瓶（250 ml）、香葉醇百里香1瓶（5.75 ml）、青蘋果氣味香水1瓶（DEMETER香水）。

3 實驗方法

3.1 SD大鼠偏好氣味篩選：將24只SD大鼠隨機分為四組，每組6只，編號為A、B、C、D。A組聞香葉醇香精，B組聞青蘋果香味香水，C組聞芝麻香油，D組聞燒焦的頭發(fā)。將香葉醇香精、青蘋果味香水、芝麻香油均勻噴涂在脫脂棉球上，放在鼠籠上進行香味刺激，觀察記錄每只大鼠在10 min內(nèi)聞氣味的次數(shù)，通過次數(shù)的多少來篩選大鼠偏好的氣味。

3.2 建立硝酸甘油偏頭痛模型：將上一步使用過的大鼠再隨機分為四組，分別為模型對照組、天舒膠囊治療組、氣味治療組、空白組。天舒膠囊治療組提前3d灌胃天舒膠囊溶液1次1 ml／100g體質(zhì)量；空白組皮下注射生理鹽水10 mg／kg；模型對照組、天舒膠囊治療組及氣味治療組大鼠皮下注射硝酸甘油注射劑10 mg／kg，建立硝酸甘油偏頭痛模型，前三組出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁搔頭、爬籠次數(shù)增多證明造模成功［5］，第四組不出現(xiàn)任何癥狀。

3.3 施加氣味刺激：在造模30 min后，模型對照組灌胃蒸餾水10 ml／kg，天舒膠囊治療組灌胃天舒膠囊1次1 ml／100g體質(zhì)量，氣味治療組給予大鼠喜好的的氣味刺激。

3.4 觀察方法：造模30 min后觀察各組大鼠撓頭、爬籠情況。撓頭是觀察大鼠造模后撓頭出現(xiàn)和消失的時間。撓頭出現(xiàn)時間以大鼠出現(xiàn)連續(xù)撓頭次數(shù)達5次以上為標志，消失時間以一個時間段中大鼠撓頭次數(shù)少于5次并出現(xiàn)倦怠、疲乏的表現(xiàn)為標志。從造模后每30 min作為一個時間段，采用持續(xù)時間分段計數(shù)方法觀察大鼠造模后在每一時間段撓頭、爬籠的次數(shù)。

4 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件進行分析。

結(jié) 果

1 經(jīng)過篩選實驗 發(fā)現(xiàn)大鼠在10 min內(nèi)聞香葉醇、青蘋果香及芝麻油香的次數(shù)都明顯多于聞燒焦的頭發(fā)，并且對于前三種氣味會反復嗅聞，對于燒焦的頭發(fā)則沒有此種情形。因此確定香葉醇香、青蘋果香、芝麻油香作為SD大鼠的喜好氣味用于后續(xù)實驗。

2 爬籠次數(shù) 氣味治療組與模型組在0-30 min、60-90 min、90-120 min、120-150 min時段內(nèi)有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），結(jié)果見表1。

表1 大鼠不同時間段爬籠次數(shù)

3 撓頭次數(shù) 空白組只在少數(shù)幾個時間段內(nèi)有偶發(fā)的一兩次撓頭。而模型組、藥物治療組、氣味治療組在造模后開始出現(xiàn)頻繁的撓頭。經(jīng)統(tǒng)計后發(fā)現(xiàn)，氣味治療組與模型組只有在150-180時段內(nèi)具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。由于氣味的刺激，大鼠的撓頭現(xiàn)象和爬籠現(xiàn)象并不同步，結(jié)果見表2。

表2 大鼠不同時間段撓頭次數(shù)

4 撓頭的出現(xiàn)時間和消失時間 氣味治療組與模型組差異不具有統(tǒng)計學意義，表明氣味治療并不能減短病程，結(jié)果見表3。

表3 2組療效比較

討 論

由于硝酸甘油在血管壁通過酶或非酶的生物激活途徑生成一氧化氮（NO），NO強烈地擴張腦血管，造成無菌性炎癥而誘發(fā)偏頭痛。NO具神經(jīng)毒性作用，可激發(fā)三叉神經(jīng)-血管反射，引起腦血管擴張，產(chǎn)生偏頭痛［6］。通過建立SD大鼠硝酸甘油偏頭痛模型，隨機分組后給予不同的治療方法，記錄爬籠次數(shù)和撓頭次數(shù)，發(fā)現(xiàn)氣味治療組比模型組爬籠次數(shù)明顯減少，而與藥物治療組效果相當，表明給予大鼠適宜的氣味刺激對大鼠的偏頭痛癥狀有所緩解。說明氣味刺激對大鼠偏頭痛的緩解有一定的功效。這是因為嗅覺與其他行為相互作用，構(gòu)成嗅覺參與腦功能影響的復雜過程［7］。鼻腔黏膜的嗅上皮含有嗅感覺神經(jīng)元（OSN），在OSN膜上存在G蛋白耦聯(lián)嗅覺受體（OR），當氣味與特異性的OR結(jié)合后，引出嗅覺感受器電位，由嗅感覺神經(jīng)元的軸突傳遞至嗅球，嗅球又將信號通過嗅束投射到初級嗅皮質(zhì)。這樣嗅覺感受器、嗅球和大腦嗅覺中樞就三位一體地形成了嗅覺感受和傳導路線。這種復雜的途徑和通路可能是嗅覺調(diào)控和影響許多重要腦功能的基礎，這也正是適宜氣味刺激緩解偏頭痛的基礎。

偏頭痛與掌管人情緒、記憶等的大腦邊緣系統(tǒng)關系密切，適宜氣味通過神經(jīng)傳遞給邊緣系統(tǒng)，良好的體驗使邊緣系統(tǒng)得以整合患者的情感，減輕患者頭痛時的焦慮情緒，并分散注意力，使頸部、頭部肌肉由緊張收縮變得松弛，從而起到鎮(zhèn)痛作用［8］。實驗發(fā)現(xiàn)氣味刺激對SD大鼠偏頭痛模型的爬籠癥狀有所緩解，但是對撓頭及病程并沒有明顯的緩解作用，說明適宜氣味對SD大鼠偏頭痛具有一定的緩解效果，但不能縮短病程。

通過不斷重復實驗鞏固強化，可能會建立起一種嗅覺反射，即施加一種適宜的氣味刺激可以明顯緩解偏頭痛，各項檢測指標與相同氣味第一次刺激時具有顯著差異。這種可能性有待進一步研究，希望為臨床治療偏頭痛提供一種簡便、有效、實惠的方式，

［1］趙永烈，王愛成，陳錦鋒等.硝酸甘油型偏頭痛模型評述.中國康復理論與實踐，2005，6（11）：455-456.

［2］Cristina T，Rosaria G，Wang DC，etal.Nitroglycerin induces hyperalgesia in rats-ati me-course study［J］.Eur J Phar macol，2003，464（2）：159-162.

［3］龍 軍，方泰惠.實驗性偏頭痛動物模型研究進展［J］.中風與神經(jīng)疾病雜志，2003，20（2）：187-188.

［4］楊德功，劉紅權(quán)，黃厚才，等.鼻療法噴劑對偏頭痛大鼠模型5-HT、NO、多巴胺含量的影響.中國實用醫(yī)藥，2008，3（24）：81-83.

［5］付先軍，宋旭霞，周永紅，等.硝酸甘油型實驗性偏頭痛大鼠模型行為癥狀學評價［J］.中華神經(jīng)醫(yī)學雜志，2005，4（5）：449-451.

［6］周永紅，王新陸，胡懷強，等.逍遙滴鼻液對實驗性偏頭痛模型大鼠行為癥狀的影響［J］.中國比較醫(yī)學雜志，2005，15（3）：157-160.

［7］汪 莉，韓春庚，楊愛紅，等.薰衣草精油通過嗅覺通路對大鼠血壓的影響.安徽醫(yī)科大學學報，2009，44（2）：221-223.

［8］任永欣，彭 成，姚 于.頭風飲對實驗性偏頭痛動物模型c-f0s、c-jun基因表達的影響［J］.成都中醫(yī)藥大學學報，2000，23（3）：34-36.