正交試驗優(yōu)選治傷靈顆粒劑的水提醇沉工藝

張世波 曹清遠

(1 瀘州市中醫(yī)院，四川 瀘州 646000；2 四川瀘州食品藥品檢驗所，四川 瀘州 64600）

治傷靈顆粒劑是由某醫(yī)院老中醫(yī)在臨床十多年醫(yī)學實踐基礎(chǔ)上，由血府逐瘀方演生而來，該藥主要由桃仁、紅花、當歸、川芎、生地、骨碎補、赤芍、牛膝、柴胡、枳殼、桔梗、甘草等組成，具有活血化瘀，溫經(jīng)行氣，定痛止血，斂瘡生肌之功效，用于瘀血內(nèi)阻，頭痛胸痛，內(nèi)熱憋悶，跌打損傷，失眠多夢，經(jīng)痛及經(jīng)行不暢等癥。根據(jù)方中各藥味的化學成分及藥理作用，對提取純化工藝進行優(yōu)選，以保證其療效。

圖1 芍藥苷HPLC色譜圖

1 儀器與試劑

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；AE 200電子天平（Mettler公司）；實驗藥材（成都吉安康藥業(yè)有限公司，經(jīng)成都軍區(qū)總醫(yī)院藥檢室劉永勝鑒定與《中國藥典》2005版一部正品相符。）；芍藥苷標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200731）；95%乙醇；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 芍藥苷含量測定方法學考查

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱（ 4.6 mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇：水（35∶65）；流速：1.0mL/min；紫外檢測波長：λ=230nm[1]；進樣量：4μL；柱溫：30℃。

2.1.2 對照品溶液制備

精密稱取芍藥苷對照品10mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋置刻度，搖勻后作為對照品溶液（每1mL中含芍藥苷0.1mg）。

2.1.3 供試品溶液的制備

精密稱取治傷靈干浸膏1g，以甲醇水溶液稀釋至10mL，用微孔濾膜（0. 45μm）濾過，取其續(xù)濾液，制得供試品溶液。

2.1.4 陰性干擾實驗

取處方組成份量，按制備工藝同供試品溶液制備方法制成缺赤芍的陰性供試品溶液，精密進樣4μL，結(jié)果在7～10min之間無明顯的峰出現(xiàn)，即無干擾。結(jié)果見圖1。

2.1.5 標準曲線的制備

精密吸取上述對照品溶液2μL、4μL、8μL、10μL、12μL、16μL按上述色譜條件測定，以峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程：Y = 1449.9x+8.2337（R =0.9999）。結(jié)果表明芍藥苷進樣量在為0.2～1.6μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。見圖2。

圖2 標準曲線圖

2.1.6 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液，重復進樣5次，測得其峰面積的RSD%= 0.766，表明精密度良好。

2.1.7 加樣回收率試驗

精密量取已知含量的同一批樣品9份，向每份樣品中精密加入適量的對照品（0.1mg/mL）溶液，按供試品溶液的制備項下操作，再按色譜條件項下的色譜條件測定，測得芍藥苷平均回收率為99.76%，RSD%=0.64，結(jié)果見表1。

2.1.8 樣品中芍藥苷含量測定

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=9）

將標準品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件分別精密進樣4μL，測定峰面積，根據(jù)標準曲線或外標法求得各供試品溶液中芍藥苷的含量。

2.2 正交試驗與結(jié)果

經(jīng)預試驗，選擇影響提取效果的主要因素：加水倍數(shù)（A）、提取時間（B）、煎煮次數(shù)（C）、醇沉濃度（D）作為考察對象，每個因素擬定3個水平（見表2），進行L9（34）正交實驗[2]。以芍藥苷含量和干膏率的綜合評價為評價指標，進行評價，篩選出最佳提取純化工藝[4]。正交設計因素水平表見表2，正交試驗結(jié)果見表3，方差分析見表4、表5。

表2 正交設計因素水平表

由表3進行直觀分析，按芍藥苷含量為0.6，干膏率為0.4的權(quán)重系數(shù)綜合分析可知，治傷靈顆粒劑的水提工藝條件以A2B1C2D3為佳，即加8倍量水煎煮2次，每次1 h，醇沉濃度70%，同時由表3可得，影響水提效果的主要因素是醇沉濃度和煎煮次數(shù)，其次是加水量，因提取時間影響最小，故可用其為誤差項進行方差分析[5]。

2.3 驗證試驗

按優(yōu)選的工藝進行驗證試驗，測得芍藥苷的含量分別為2.21、2.18、2.23 mg/g，RSD為1.14%，干膏率分別15.95、16.01、15.88%，RSD為0.41%。測得值基本優(yōu)于正交表中的試驗結(jié)果，認為驗證結(jié)果較為滿意，表明該工藝穩(wěn)定可行。

3 討 論

表3 正交試驗設計的計算結(jié)果表

赤芍為方中主藥之一，主要含芍藥苷，藥理研究證明具有清熱涼血，散瘀止痛的作用。用高效液相色譜法來測定其含量，干擾較小、靈敏度高、專屬性強、操作簡便。故本試驗采用芍藥苷含量和干膏出膏率作為正交試驗的考核指標[1-4]。

本試驗采用正交設計的試驗方法對治傷靈顆粒劑的提取純化工藝進行優(yōu)化篩選，確認治傷靈顆粒劑的水提醇沉最佳工藝條件為：加8倍量水，煎煮2次，每次1h，醇沉濃度70%。確定的提取工藝科學，可行，為以后該制劑的制備工藝提供依據(jù)。

表4 芍藥苷含量方差分析表

表5 干膏率方差分析表

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