用HPLC－電化學法測定鹽酸腎上腺素預灌封注射劑中腎上腺素的含量

黃 娟，朱全剛，曹 潔，張玲娟＊

(1.第二軍醫大學長海醫院護理部，上海200433；2.第二軍醫大學長海醫院藥學部，上海200433)

[本文編輯]蘭 芬

預灌封注射劑是近年來悄然興起的一種新型、實用的藥品包裝形式，系將藥物溶液直接無菌灌裝在可帶注射針頭的玻璃注射器中，注射器和藥液包裝容器合二為一。使用時無需反復抽吸、安裝針頭等操作，具有使用方便、劑量準確、減少污染等優點[1]，比使用安瓿包裝的藥品節約一半的時間，從而為戰創傷、災害救治及臨床一線搶救危重病人爭取寶貴時間。鹽酸腎上腺素是一種直接作用于腎上腺素α、β受體的擬交感胺類藥，具有擴張支氣管、興奮心臟、升高血壓及收縮局部血管作用，常用于心跳驟停和過敏性休克的搶救，也可用于支氣管痙攣、蕁麻疹等嚴重過敏反應的治療。因此，研制鹽酸腎上腺素預灌封注射劑對于縮短臨床搶救時間，提高搶救成功率具有重要意義[2]。本研究制備了鹽酸腎上腺素預灌封注射劑，并建立了測定其含量的 HPLC－電化學(electrochemical detection，ECD)法。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 LD－10ADvp高效液相色譜儀(日本島津制作所)，包括 LC－10ADvp泵、Class vp色譜工作站、CBM－20A系統控制器、SIL－10ADvp自動進樣器、L－ECD－6A電化學檢測器、CTO－10ACvp柱溫箱和 C－R8A記錄儀；FA－2004萬分之一電子天平(上海天平儀器廠)；預灌封注射器組合件(山東威高集團醫用高分子制品股份有限公司，批號111122，見圖1)；SDJ－ZS生物超凈工作臺(上海淀山湖凈化設備廠)。

圖1 預灌封注射器的示意圖

1.2 藥品和試劑 腎上腺素對照品(99.7%，中國食品藥品檢定研究院，批號100154－2011－04)；鹽酸腎上腺素注射液(規格1mg／1ml，上海禾豐制藥有限公司，批號110605)；甲醇(色譜純，美國Tedia公司)；乙二胺四乙酸二鈉(EDTA，批號20100201)和冰乙酸(批號20100903)由上海凌峰化學試劑有限公司提供；庚烷磺酸鈉(上海安譜科學儀器有限公司，批號CAEQ－4－020007－0100)；水為重蒸餾水(第二軍醫大學長海醫院藥學部自制)。

2 方法和結果

2.1 預灌封注射劑的制備 取鹽酸腎上腺素注射液1支，將預灌封注射器組合件脫去外包裝后置于生物超凈工作臺，在無菌條件下將注射液灌裝入玻璃針管，壓入活塞，將藥液密封，然后加裝推桿，進行包裝，即得到鹽酸腎上腺素預灌封注射液(批號120207、120208、120209)，在室溫、避光條件下保存。

2.2 溶液的制備 (1)供試品溶液 精密量取預灌封注射劑適量(約相當于腎上腺素0.5mg)，置50ml量瓶中。流動相：水相[含0.11%庚烷磺酸鈉溶液(含0.1mmol／L EDTA)和5%冰乙酸溶液 (用1mol／L NaOH溶液調節pH值至3.4)]－甲醇(80:20)；加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成濃度約為10μg／ml的供試品儲備液。精密量取該儲備液1ml，置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。(2)對照品溶液 精密稱取腎上腺素對照品10.0mg，置100ml量瓶中，加流動相溶解稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為100μg／ml的對照品儲備液。精密量取該儲備液0.05、0.25、0.5、1、5ml，分別置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，即得系列濃度分別為0.05、0.25、0.5、1、5μg／ml的對照品溶液。

2.3 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；采用電化學檢測器，以玻碳電極為工作電極，銀／氯化銀電極為參比電極，工作電位為＋0.65V；柱溫20℃，流動相見2.2項，流速1.0ml／min，進樣量20μl。取供試品溶液和濃度為1μg／ml的對照品溶液分別進樣，得到色譜圖見圖2。由圖2可見，鹽酸腎上腺素色譜峰不受其他組分干擾，峰形良好。

2.4 線性關系考察 精密量取2.2項下各濃度對照品溶液，按2.3項下色譜條件分別進樣20μl，測定峰面積(A)。以濃度(c)為橫坐標，A為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為A＝1.56×106c＋7.44×104(r＝0.999 9，n＝5)，表明鹽酸腎上腺素在0.05～5μg／ml范圍內線性關系良好。

2.5 精密度實驗 分別精密量取低、中、高濃度(0.05、0.5、5μg／ml)的對照品溶液各20μl，按2.3項下色譜條件，同1天內每隔4h重復進樣，共3次，記錄峰面積，計算得到低、中、高濃度的日內 RSD 分別為1.35%、1.14%和1.61%(n＝3)。每天進樣一次，連續3d，記錄峰面積，計算得到低、中、高濃度的日間 RSD 分別為3.68%、2.99%和3.63%(n＝3)，表明日內、日間精密度良好。

2.6 重復性實驗 取同一批供試品溶液(批號120208)6份，按2.3項下色譜條件測定峰面積并計算含量，得到RSD＝1.11%(n＝6)。

圖2 鹽酸腎上腺素預灌封注射劑的HPLC譜圖

2.7 穩定性實驗 分別于配制后0、2、4、6、8、12h，精密量取2.2項下的供試品溶液20μl，按2.3項下色譜條件進樣測定峰面積，計算得到RSD＝3.11%(n＝6)，表明供試品溶液在配制后12h內穩定。

2.8 加樣回收率實驗 精密量取適量2.2項下已知濃度為0.5μg／ml的供試品溶液3份，分別加入濃度為0.25、0.5、1μg／ml的對照品溶液1ml，得到低、中、高濃度分別為0.625、1、3μg／ml的混合溶液。按2.3項下色譜條件進樣測定并計算含量。結果低、中、高濃度的加樣回收率分別為(100.03±1.54)%、(104.60±1.15)%和(98.64±2.49)%(n＝3)，表明該方法的回收率滿足測定要求。

2.9 樣品含量測定 分別取3批預灌封注射劑(批號為120207、120208、120209)，制備供試品溶液，按2.3項下色譜條件進樣，測定峰面積，計算腎上腺素的含量，并求算其相當于標示量的百分比。結果得到3批樣品中腎上腺素的含量分別為標示量的(99.04±1.94)%、(97.26±2.78)%和(100.51±1.15)%(n＝3)，均在標示量的85%～115%范圍內，符合《中華人民共和國藥典》2010版鹽酸腎上腺素注射液的含量檢測要求[3]。

3 討 論

鹽酸腎上腺素的含量測定方法有滴定法、紫外分光光度法和HPLC法等。《中華人民共和國藥典》采用的是RP－HPLC法，以紫外檢測為手段，靈敏度低，需較大進樣量，易造成色譜柱容量過載。鑒于腎上腺素是具有電活性的酚類物質，本研究選用ECD為檢測手段，靈敏度顯著提高，可滿足常規測定需要[4]。

腎上腺素為極性化合物，在非極性色譜柱上保留較弱。在酸性流動相中加入離子對試劑后，腎上腺素作為一種有機胺類物質，能與庚烷磺酸鈉形成離子對，在固定相上保留增強，從而實現有效分離。研究過程中還考察了工作電位對檢測靈敏度的影響，發現在酸性條件下以＋0.65V測定靈敏度高，峰形佳，因此選擇＋0.65V為工作電位。本研究建立的HPLC－ECD法準確快速，靈敏度高，重現性好，能用于鹽酸腎上腺素預灌封注射劑的含量測定。

[1]Nishiyama J，Suzuki T，Murata T，etal.A questionnaire survey on operability of syringe pumps for prefilled syringes[J].Tokai J Exp Clin Med，2010，35(3)：95－98.

[2]Kerddonfak S，Manuyakorn W，Kamchaisatian W，etal.The stability and sterility of epinephrine prefilled syringe[J].Asian Pac J Allergy Immunol，2010，28(1)：53－57.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.2010版 二部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：460.State Pharmacopoeia Committee.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010ed.Volume 2[S].Beijing：Chinese Medical Science Press，2010：460.Chinese.

[4]金 薇，彭興盛，陳 陽，等.HPLC－ECD測定重酒石酸去甲腎上腺素的有關物質[J].藥物分析雜志，2011，31(8)：1485－1488.Jin Wei，Peng XingSheng，Chen Yang，etal.HPLC－ECD determination of related substances of norepinephrine bitartrate[J].Chin J Pharm Anal，2011，31(8)：1485－1488.Chinese with abstract in English.