丹參對急性胰腺炎大鼠腸黏膜屏障功能和免疫功能的影響

高允海

（遼寧中醫藥大學第一附屬醫院普外科，遼寧 沈陽 110032）

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）是臨床常見急腹癥，進來研究認為AP并非細菌感染所致，但在臨床上死亡的病例中80%是由胰腺繼發感染所致，而繼發感染的機制主要為腸黏膜屏障功能受損、腸道細菌移位，使腸道內細菌和毒素侵入系統循環，同時AP使腸道免疫功能處于嚴重抑制狀態，使機體抗感染能力下降，病情惡性循環最終出現全身炎性反應，甚至出現MODS，最終死亡。因此保護腸道黏膜屏障功能，并提高腸道免疫功能是治療和改善AP預后的關鍵措施之一。中藥丹參在這方面有著良好的作用，丹參治療AP的臨床報道較多，但就丹參對AP腸黏膜屏障和免疫功能的實驗研究報道較少。本研究通過制作大鼠AP模型，動態觀察大鼠外周血 D-乳酸（D-Lac）、二胺氧化酶（DAO）和腸組織的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的變化，以判定丹參對AP腸黏膜屏障和免疫功能的治療作用，為臨床應用提供一定的理論和實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

健康 SD大鼠 90只，雌雄不限，10～12周齡，體質量250～300g，由遼寧中醫藥大學動物實驗中心提供，實驗前標準顆粒混和飼料喂養1周。隨機分為9組，分別為假手術（F）1、3、5天組（F1d、F3d、F5d組）；胰腺炎（AP）對照1、3、5天組（AP1d、AP3d、AP5d組）；丹參治療（SM）1、3、5天組（SM1d、SM3d、SM5d組），每組10只。

1.2 試劑

牛磺膽酸鈉購自美國Sigma公司。二胺氧化酶（DAO）試劑盒：北京 304 醫院創傷研究所提供。丹參注射液：由哈藥集團中藥二廠生產，批號：Z10970093。

1.3 模型制備

參照 Aho等[1]的方法并加以改進，采用膽胰管內注射5%牛磺膽酸鈉溶液的方法制備AP模型。丹參治療組關腹后立即尾靜脈注射丹參注射液，注射量為10ml/kg，每12h給藥一次，連續給藥5天。假手術組、胰腺炎組均在相應的時間段用等量生理鹽水尾靜脈注射，各組均在相應時間點取材。

1.4 觀察指標及方法

F1d、AP1d、SM1d組在術后第1d；F3d、AP3d、SM3d組在術后第3d，F5d、AP5d、SM5d組在術后第5d分批抽靜脈血處死大鼠，用改良的酶學分光光度法[2]測定D-乳酸、二胺氧化酶，在空腸上段截取3cm長腸組織標本，用免疫放射分析法測定sIgA含量。每組每個時間點10只。

1.5 統計方法

2 結 果

2.1 試驗指標

2.1.1 血清二胺氧化酶（DAO）

假手術組術后5天DAO值無明顯變化（P＞0.05），AP1d組較F1d組升高（q=6.7844，P＜0.01），AP3d與AP5d無差異（q=0.0214，P＞0.05），但均較AP1d進一步升高（P＜0.05），與F3d、F5d比較均顯著升高（P＜0.01），說明胰腺炎模型大鼠造模后1天DAO開始升高，隨著時間延長DAO值升高并保持在一定水平；經丹參治療1天后DAO值較F組升高（q=6.7844，P＜0.01），與AP1d無差異（P＞0.05），丹參治療3天后DAO較SM1d組下降（q=4.3001，P＜0.01），較AP3d明顯下降（q=11.2495，P＜0.01），但仍高于F3d組（q=3.709，P＜0.05），丹參治療5天后DAO較SM3d組進一步下降（q=4.3748，P＜0.01），明顯低于AP5d（q=15.0318，P＜0.01），與F5d組無明顯差異（q=1.0226，P＞0.05），說明丹參治療1天DAO值無變化，隨著治療時間延長DAO逐步下降，到第5天DAO值下降至正常水平（表1）。

表1 各組大鼠的血清二胺氧化酶（DAO）（ku/L）

2.1.2 循環D-乳酸（D-Lac）

術后各時間點檢測F各組D-Lac值無明顯變化（P＞0.05），造模后1天D-Lac 值就較F1d組升高（q=6.7603，P＜0.01），第3天、第5天較第1天進一步升高，差異顯著（P＜0.01），與F3d、F5d比較升高更為明顯（P＜0.01），AP3d與AP5d無明顯差異（q=2.0843，P＞0.05），說明胰腺炎大鼠循環D-Lac隨時間逐漸升高，并保持在一定水平；經丹參治療后第1天較F1d組升高（q=6.1688，P＜0.01），與AP1d無差異（q=0.5915，P＞0.05），SM3d組較SM1d組下降（q=3.，4216，P＜0.05），較AP3d明顯下降（q=12.7719，P＜0.01），與F3d組無差異（q=0.1888，P＞0.05），SM5d組與SM3d組無差異（q=0.3575，P＞0.05），明顯低于AP5d（q=10.9156，P＜0.01），與F5d組無明顯差異（q=0.1299，P＞0.05），說明丹參治療1天循環D-Lac無變化，治療3天后D-Lac已降至正常組水平，并保持在這一水平至第5天（表2）。

表2 各組大鼠的血清D-乳酸（D-Lac）（mg/L）

2.1.3 分泌型免疫球蛋白A（sIgA）

術后各時間點檢測F各組sIgA值無明顯變化（P＞0.05），造模后1天腸組織中sIgA值就較F1d組下降（q=4.0477，P＜0.05），第3天、第5天較第1天逐步下降，差異顯著（P＜0.05），與F3d、F5d比較均顯著下降（P＜0.01），說明胰腺炎大鼠腸組織中sIgA含量隨病程延長逐漸下降；經丹參治療后第1天、3天、5天sIgA值均與AP1d無差異（P＞0.05），SM3d組較AP3d升高（q=3.0380，P＜0.05），但仍低于F3d組（q=3.4311，P＜0.05），SM5d組較AP5d組顯著升高（q=5.1177，P＜0.01），但仍低于F5d組（q=5.7055，P＜0.01），說明丹參治療后腸組織中sIgA含量雖較正常組下降，但一直保持在一定的水平，并未出現sIgA含量隨病程延長逐漸下降情況（表3）。

表3 各組大鼠腸組織的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）（mg/mL）

3 討 論

目前越來越多的學者認識到AP時腸黏膜屏障功能下降，腸黏膜通透性增加，使腸道內的大量細菌、毒素通過受損腸黏膜進入循環系統，引起繼發感染，導致全身炎性反應。因此 認為控制好炎性反應及維護好腸道屏障是治療AP的關鍵[3]。同時李云[4]及Curley[5]等大量研究表明AP時機體免疫功能下降，使感染更加難以控制。兩者的相互影響惡性循環導致AP的治療復雜、預后差。

本實驗是通過檢測血清DAO和D-Lac的變化，反應出腸黏膜損害程度及其通透性的變化，了解腸道屏障功能的改變。實驗結果表明，胰腺炎大鼠DAO及D-Lac均升高，并隨著病程延長逐漸升高，說明胰腺炎可使腸黏膜屏障功能受損，腸黏膜通透性增加，為腸道細菌移位、毒素吸收入血提供條件。經丹參治療后第1天DAO和D-Lac變化不明顯，經過持續丹參治療3天后兩項指標均出現下降，隨著治療時間延長下降趨勢更為明顯，至第5天已降至正常水平，DAO和D-Lac兩項指標呈現基本一致的變化趨勢。說明丹參能修復胰腺炎大鼠受損腸黏膜，改善腸黏膜通透性，保護腸道屏障功能。

sIgA是腸黏膜主要的免疫球蛋白，研究表明[6]，其分泌減少，一方面降低腸道抵御細菌和毒素入侵的能力，易致腸源性感染；另一方面易激活細胞炎性因子，產生過度炎性反應，進一步損害腸黏膜，而引起全身炎性反應綜合征。因此，sIgA是觀察和評估腸黏膜免疫屏障功能的關鍵指標。

本實驗研究表明急性胰腺炎時腸組織中sIgA含量下降，腸道免疫功能隨病程延長下降趨勢明顯，經丹參治療后，雖sIgA沒有恢復到正常水平，但明顯抑制了sIgA含量隨病程延長而下降的趨勢，說明丹參能夠促進胰腺炎大鼠腸黏膜sIgA的合成和分泌，進而增強腸道免疫功能，保護腸黏膜的完整性。

總之，丹參作為一種傳統中藥，已廣泛用于AP的治療，有效降低AP的死亡率，減少AP的并發癥，其療效顯著[7]。本實驗研究認為丹參能夠明顯改善胰腺炎大鼠腸黏膜通透性，保護腸黏膜屏障功能，同時能促進腸黏膜sIgA的合成與分泌，增強腸道免疫功能，由此推斷丹參能通過這兩方面作用進而有效控制胰腺炎繼發感染，避免出現全身炎性反應綜合征，這可能就是丹參治療急性胰腺炎的機制之一。

[1]Aho HJ,Koskensalo SM,Nevalainen TJ.Experimental pancreatitis in the rat.Sodium taurocholate induced acute haemorrhagic pancreatitis[J].Scand J Gastroenterol,1980,15(4):411-416.

[2]黎君友,于燕.分光光度法測定血和小腸組織二胺氧化酶活性[J].氨基酸和生物資源,1996,18(4):28-30.

[3]呂農華.重癥急性胰腺炎的內科綜合治療[J].胃腸病學,2005,10(2):125.

[4]李云,錢家勤,秦仁義,等.急性胰腺炎患者的免疫功能變化[J].世界華人消化雜志,2000,8(8):923-925.

[5]Curley P,Nestor M,Collins K,et al.Decreased interleukin-2 production in murine acute pancreatitis:potential for immunomodulation[J].Gastroenterology,1996,110(5):583-588.

[6]Ikeda S,Zaizaur BL,Johnson CD,et al. Total parenteral nutrition supplem entation with glutamine improves survival after gut ischemia reperfusion[J].JPEN J Parenter Enteral Nutr,2002,26(3):169-174 .

[7]阮利群,蔡愛群.丹參注射液治療重癥胰腺炎72例療效觀察[J].浙江預防醫學,2003,15(1):78.