乳腺癌中HER-2異常表達的臨床病理學意義

黃文濤

（上海交通大學附屬第六人民醫院病理科，上海 200233）

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，我國的乳癌每年發病率大約是20/10萬，在女性惡性腫瘤中位列第三位，且呈逐年上升的趨勢。最新研究表明[1]，人表皮生長因子受體2（HER-2）在25%～30%的原發性浸潤性乳腺癌中有基因擴增和蛋白的過度表達。HER-2的高表達可提高乳腺癌細胞的轉移潛能，被認為是乳腺癌獨立的預后指標之一。近年來隨著醫療技術的進步,以HER-2為靶點的靶向治療藥物應用于HER-2高表達的乳腺癌患者，顯著減少了腫瘤轉移和復發率, 提高了患者的生存質量。因此在臨床病理診斷中，準確檢測HER-2的表達具有重要的治療和預后價值。本文收集了155例浸潤性乳腺癌病例，對其進行HER-2的免疫組織化學（IHC）和熒光原位雜交（FISH）檢測，分析乳腺癌中HER-2異常表達的臨床病理學意義。

1 材料與方法

1.1 組織標本

收集本院病理科診斷的2009年至2011年間浸潤性乳腺癌標本155例，均為女性，術前未接受過放療、化療。患者年齡27～84歲，平均年齡56歲。所有標本均為4%中性甲醛固定石蠟包埋組織。

1.2 IHC檢測方法

采用免疫組織化學EnVision方法。兔抗人多克隆抗體C-erbB-2（HER-2，Dako公司），工作濃度1∶500。采用PBS代替一抗做陰性對照，已知強陽性乳腺癌標本做陽性對照，操作流程按說明書進行。IHC結果判斷參照乳腺癌HER-2檢測指南[2]：0+（無染色或＜10%細胞膜染色），1+（＞10% 瘤細胞有不完整胞膜染色），2+（＞10% 瘤細胞有輕度至中度完整胞膜染色），3+（＞10% 細胞膜有完整胞膜強染色者）。

1.3 FISH檢測方法

1.3.1 主要試劑和設備

HER2/CSP17 探針試劑盒購自北京金菩嘉醫療科技有限公司。實驗步驟:按試劑盒說明書進行。

1.3.2 結果的判定

計數30個細胞核內橘紅色的HER-2 熒光信號和17號染色體著絲粒的綠色熒光信號, 計算30個細胞核中紅色信號與綠色信號總數之比值。比值＜1.8為陰性，提示無基因擴增，比值＞2.2時為HER-2基因擴增，若比值介于1.8～2.2之間，則需要再計數30個細胞核中的信號重新計數。

1.4 統計學處理

選用SPSS11.0統計學軟件進行數據處理，用kappa檢驗進行統計學分析，P＜0.05具有統計學意義。

2 結 果

2.1 IHC檢測結果

IHC陽性信號定位于腫瘤細胞胞膜，部分病例伴有胞質內著色。155例浸潤性乳腺癌標本中，HER-2蛋白表達0+有8例，59例為1+，75例為2+，13例為3+，其表達率分別為5.2%、38%、48.4%及8.4%。

圖1 HER-2基因擴增（FISH法 ×1000）

2.2 IHC和FISH檢測HER-2表達的比較

155例乳腺癌標本中，FISH法檢測HER-2有擴增（陽性）42例（圖1），無擴增（陰性）113例（圖2）。8例IHC（0+）中有8例FISH陰性，59例IHC（1+）者中有53例FISH陰性，75例IHC（1+）者中有52例FISH陰性，13例IHC（3+）者中12例為FISH陽性。4組中IHC和FISH符合率分別為100%、89.8%、69.3%和92.3%。一致性檢驗證明兩者結果符合率為80.6%，存在一致性（Kappa=0.363，P=0.000）。其相互關系詳見表1。

圖2 HER-2基因無擴增（FISH法 ×1000）

表1 FISH與IHC檢測結果比較

3 討 論

HER-2基因是表皮生長因子受體家族成員之一。HER-2基因位于染色體17q21，編碼相對分子量為185000的跨膜蛋白，在結構域上有胞外區、跨膜區和胞內區，具有酪氨酸激酶活性。HER2基因擴增將導致轉錄上調，增加蛋白合成并激活癌基因，從而誘發腫瘤發生[3]。研究發現，具有Her-2基因擴增的患者應用受內分泌（他莫昔芬）治療后的死亡率明顯增高，提示此類患者可能不適合應用內分泌治療[4]。2002年美國FDA批準了一種全新的分子靶向藥物Herceptin，在臨床治療中應用此類靶向藥物，對那些具有HER-2基因擴增的患者具有良好的治療效果，而對于低度擴增或者是不擴增的患者療效不顯著。因此臨床用藥前，準確檢測Her-2基因表達具有重要的臨床病理意義。

臨床病理診斷中，檢測HER-2蛋白與基因的常用方法是免疫組織化學（IHC）和熒光原位雜交法（FISH）。IHC法具有簡便、廉價、快速等特點，能在蛋白水平觀察HER-2的表達，并與形態相結合觀察其定位。另一方面，由于IHC 還有自身缺陷，如組織固定使抗原丟失，固定液種類和儲存時間對染色強度的影響，不同批號抗體之間的差異等都將影響IHC檢測的準確性。FISH法具有快速、檢測信號強、雜交特異性高和可以多重染色等特點，可直觀地觀察細胞核內特異性染色體或基因異常，并可與形態學結合，是腫瘤診斷的一個重要輔助手段。但FISH結果會受到一些因素的影響，如標本長時間固定、烤片溫度過高、蛋白消化不當等，都會造成熒光信號減弱或無信號。固定液的使用也非常重要，FISH的標本應選用4%中性甲醛固定，經乙醇等其他固定液實驗效果不佳[5]。因此在臨床病理檢測HER-2表達時，宜將IHC和FISH方法結合，可取長補短，增加檢測的準確率。在本研究中，IHC0+的患者有8例，FISH 檢測均為陰性，符合率100%。IHC1+的患者有59例，FISH 檢測陰性率89.8%（53/59）。既往研究發現[6]IHC0/1+的病理與FISH檢測的符合率可達95%以上，與本研究結果基本一致，對于少數IHC1+病例有FISH陽性，分析原因可能與乳腺癌基因的低拷貝數有關。IHC3+的患者有13例，FISH 檢測陽性率92.3%（12/13），前期研究表明[7]IHC3+的病例與FISH檢測的符合率達90%以上，與本研究結果相吻合。另外有1例IHC3+，FISH檢測陰性，可能與17號染色體非整體性有關。乳腺癌患者17號染色體非整體性是乳腺癌的遺傳學特征，即癌細胞中17號染色體數多于或少于2個。而這種非整體會造成一部分患者的IHC假陽性結果，這樣的患者在使用Herceptin時效果并不理想。FISH檢測技術加入了17號染色體著絲粒探針作為對照探針，因此能明確檢測出患者腫瘤細胞的倍體性，避免了Her-2擴增是由于17號染色體非整體性造成的假陽性結果。本研究兩組間的檢測差異主要在IHC2+組，IHC2+的患者有75例，FISH 檢測陽性率僅有30.7%（23/75）。前期研究也顯示[8]IHC2+的乳腺癌病例中基因擴增的比率為8%-32%，與本組數據一樣存在明顯差異。因此，在臨床病理診斷中，IHC檢測為2+的病例，如需應用靶向藥物治療時，建議加做FISH檢測。

綜上所述，Her2在乳癌患者的診療過程中起著關鍵的作用，它可以用于評估患者預后，并能指導臨床靶向藥物的選擇。因此，準確檢測乳腺癌中HER-2的表達具有重要的臨床病理學意義。

[1]Ross JS,Gray GS.Targeted therapy for cancer: the HER-2/neu and Herceptin story[J].Clin Leadersh Manag Rev,2003,17(6):333-340.

[2]乳腺癌HER2檢測指南(2009版)[J].中華病理學雜志,2009,38(12):631-633.

[3]Strauss B.Best hope or last hope: access to phase III clinical trials of HER-2/neu for advanced stage breast cancer patients[J].J Adv Nurs,2000,31(2):259-266.

[4]Ellis MJ,Coop A,Singh B,et al.Letrozole inhibits tumor proliferation more effectively than tamoxifen independent of HER1/2 expression status[J].Cancer Res,2003,63(19):6523-6531.

[5]Petersen BL,Sorensen MC,Pedersen S,et al.Fluorescence in situ hybridization on formalin-fixed and paraffin-embedded tissue:optimizing the method[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol,2004,12(3):259-265.

[6]Dowsett M,Bartlett J,Ellis IO,et al.Correlation between immunohistochemistry (HercepTest)and fl uorescence in situ hybridization(FISH)for HER-2 in 426 breast carcinomas from 37 centres[J].J Pathol,2003,199(4):418-423.

[7]Kovacs A,Stenman G.HER2-testing in 538 consecutive breast cancer cases using FISH and immunohistochemistry[J].Pathol Res Pract,2010,206(1):39-42.

[8]Owens MA,Horten BC,Da SM.HER2 ampli fi cation ratios by fl uorescence in situ hybridization and correlation with immunohistochemistry in a cohort of 6556 breast cancer tissues[J].Clin Breast Cancer,2004,5(1):63-69.