血站實驗室酶聯免疫吸附試驗室內質控的實施與探討

鄧曉琴，楊茂，劉穎，田智，薛薇，楊永紅

(四川省樂山市中心血站，四川樂山614000)

血站實驗室酶聯免疫吸附試驗室內質控的實施與探討

鄧曉琴，楊茂，劉穎，田智，薛薇，楊永紅

(四川省樂山市中心血站，四川樂山614000)

目的探討血站實驗室酶聯免疫吸附試驗(ELISA)實施統計學室內質控的可行性、質控方法、質控規則與控制目標。方法收集2006～2011年樂山市中心血站實驗室實施即刻法和Levey-Jennings質控圖(L-J法)室內質控的情況，統計分析室內質控結果，評價現行統計學室內質控方法，討論ELISA室內質控的控制目標。結果即刻法和L-J法簡便易行，可為ELISA實驗是否在控提供客觀依據，有助于提高實驗室檢測能力;ELISA室內質控的變異系數(CV%)，批間小于20%為控制目標。結論即刻法和L-J法等統計學質控可監控ELISA實驗的精密度變化，是一種保證檢測結果可靠性的有效技術手段;統計學室內質控并非ELISA質量控制的全部，作用有限，全面質量管理有賴于實驗室質量體系的建立、實施、監控和持續改進。

血站;酶聯免疫吸附試驗;質量控制;室內質控

醫學實驗室自1950年代開始采用質控圖進行統計學室內質控起，經過不斷完善，定量實驗的室內質控已成為一種必要的質量保證技術手段。為保證臨床血液用血的質量，衛生部《血站實驗室質量管理規范》13.4款明確要求血站實驗室建立并實施與檢測項目相適應的室內質控程序。定性酶聯免疫吸附試驗(ELISA)是血站實驗室的主要檢測項目，至今無完善的室內質控方法，一些實驗室嘗試將統計學方法用于ELISA室內質控［1，2］。樂山市中心血站實驗室1998年開始應用即刻法和Levey-Jennings質控圖(L-J法)［2］等實施ELISA室內質控，取得了良好效果，積累了大量數據和經驗。本文就ELISA實施統計學室內質控的可行性、質控方法、規則、控制目標，和一些值得探究的技術問題，進行交流和探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料樂山市中心血站實驗室2006年1月至2011年12月的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP ELISA項目的室內質控記錄數據。

1.2 檢測方法與儀器加樣儀器為GENESIS RSP/150/瑞士ML STAR/8CH，檢測儀器為瑞士ML F.A.M.E.24/20，檢測按各檢測項目的SOP進行，每一檢測微板定義為1批，每批設1孔質控位并以其S/CO值作為質控值。質控品購自衛生部臨床檢驗中心和康徹斯坦生物，檢測結果呈弱陽性(S/CO值為2～5)，正式使用前的確認內容包括質控品檢測S/CO值，批內和批間結果的重復性等。更換試劑廠家與批號，或更換質控品廠家、批號與濃度時，前20次質控采用即刻法，第21次后采用L-J質控圖法，質控規則選用Westgard多規則［2］，包括22S、13S、R4S、41S、7X和7↑↓，符合1個以上規則即判為“失控”，以12S為警告規則。

1.3 分析方法按檢測項目、檢測試劑、質控品、檢測時間段等，分別統計和分析HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的質控數據。質控數據包括質控檢測批數、質控品檢測值、質控品檢測值的精密度(以變異系數CV%計)、“失控”率及失控類型等。分別統計和分析不同廠家生產的同種試劑，同廠家不同批號試劑的質控結果。質控品檢測值以吸光度值與cut off值的倍數即S/CO值計算。檢測結果差異的顯著性檢驗采用配對資料的t檢驗，計量資料以均數±標準差表示，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的質控結果類似，各項目質控值的變異系數均較恒定，各批次質控值的批間CV%大多在20%以內，平均CV%均小于20%，結果見表1。不同廠家試劑對相同質控品的檢測值差異有統計學意義(P＜0.05)，同廠家不同批號試劑對相同質控品的質控結果差異也有統計學意義，部分批號差異顯著(P＜0.05)。有1個批次某國產HBsAg試劑在使用前確認時發現對相同質控品的質控值和陽性對照檢測值均顯著低于前一批號(P＜0.05)，給予了退貨處理。2010年10月后生產的國產試劑由一步法改為兩步法后，對同種同濃度質控品的檢測值明顯增大，質控品選擇了更低濃度，提示試劑方法學改變后檢測靈敏度有提高。資料統計中還發現，同批試劑對同廠家標示濃度相同但批號不同的質控品的檢測值差異也有統計學意義(P＜0.05)，可能因為NCU/ml是相對而非絕對濃度單位，質控品生產廠家隨市售檢測試劑的改變而對質控品的相對濃度單位作了調整。

各項目室內質控，符合前述規則的年“失控”率均小于5%，“失控”情形最多的是x +3s(包括即刻法SI大于n3s)，失控原因大都因孵育時間延長所致，其他符合規則的“失控”依次是7X、22S、41S、R4S、7↑↓和-3s，實驗室通常只對符合-3s規則(L-J法)和SI下限值小于x -3s(即刻法)的“失控”整批重檢，其他“失控”多因對照品檢測結果正常“實驗有效”未予特別處理，見表1。

表1 2006年1月至2011年12月室內質控情況

3 討論

3.1 ELISA質控的控制目標定量實驗有可以溯源和比對的標準物質，實驗室技術文件對其允許誤差等有明確的控制要求，但ELISA實驗尚無統一的控制目標，即便權威的美國臨床實驗室改進修正法案CLIA'88對臨床免疫學定性檢測的質控也僅要求“至少設置一個陽性對照和一個陰性對照，對照品檢測結果符合預期”。因ELISA實驗缺少可溯源的標準物質，質控品和控制要求均由實驗室自行規定，控制目標有較大的隨意性。變異系數CV%的大小與L-J質控圖控制限有關，CV%太大不易發現“失控”，CV%太小則易出現過多假“失控”，本文資料顯示，嚴格控制實驗條件和檢測參數時，ELISA實驗的批間變異在20%以內，可作為ELISA實驗CV%控制的最低目標［5］。

3.2 ELISA質控方法與規則血站實驗室需最大限度防止陽性結果“漏檢”，即靈敏度要求高于特異性要求。ELISA質控可用即刻法和L-J法，但質控規則應與定量實驗有別，并非所有符合Westgard規則的“失控”都有意義，應重點關注質控值低于-3s的情形，其余“失控”應結合試劑盒內控制品檢測結果和實驗的“有效性”綜合考慮。目前市售ELISA質控品濃度多為相對定量單位，質控品濃度選擇時宜將其吸光度值選在弱陽性范圍，S/CO值以2～5為宜，S/CO值太大時易降低質控意義，太小會增加質控難度。另外，不同試劑cut off值有較大區別，不能簡單地把質控品檢測S/CO值的高低等同于靈敏度來評價試劑。

3.3 ELISA質控ELISA為多反應、多試劑和多步驟的檢測方法，操作難度較大。權威工具書對ELISA質控僅要求使用試劑盒內提供的控制品［4］，控制品檢測OD值符合要求即表明試劑有效，結果正確。統計學質控可監控實驗的精密度變化，“在控”結果可使實驗者對標本結果更有信心，量化的室內質控數據，有利于管理者了解實驗條件的控制和實驗的批間變異情況，有助于試劑的選擇與客觀評價，L-J法和即刻法等質控方法簡便易行，實用有效，值得推廣應用。

［1］張永俊.ELISA法室內質控模式的建立［J］.公共衛生與預防醫學，2008，19(5):69-70.

［2］王玲玲，汪全民，董玲鳳.探討即刻法在ELISA室內質控應用中的局限性［J］.實驗與檢驗醫學，2008，26(6):703-704.

［2］鄭懷競，李金明，邢文革，等.免疫學檢驗室間質評及室內質控［M］.北京:北京醫科大學，中國協和醫科大學聯合出版社，1997:38-63.

［4］陶義訓.酶聯免疫技術［M］//李影林.中華醫學檢驗全書.北京:人民衛生出版社，1996:2141-2150.

［5］李金明.臨床酶聯免疫測定技術［M］.北京:人民軍醫出版社，2006:169-173.

The Implementation and Exploration of ELISA Internal Quality Control in Blood Bank Labo-ratory

DENG Xiao-qin，YANG Mao，LIU Ying，TIAN Zhi，XUE Wei，YANG Yong-hong(Leshan Blood Bank，Leshan 614000，China)

ObjectiveTo explore the feasibility，quality control method，regulations and objectives of statistical quality control in ELISA experiment.MethodsThe IQC situations of Grubbs and Levey-Jennings applied by blood testing laboratory in Leshan Blood Bank from 2006 to 2011 were reviewed，the IQC results were statistically analyzed，the existing statistical quality control methods were evaluated and the requirements of ELISA IQC were discussed.ResultsGrubbs and Levey-Jennings are simple and easy to implement，can provide objective basis for judging whether ELISA is in control and improve detectability of the laboratory.When IQC is applied in ELISA，inter-assay CV%is less than 20%.ConclusionStatistical quality control methods such as Grubbs and Levey-Jennings can monitor the precision change of ELISA and they are effective and reliable techniques to ensure test results.Statistical IQC which has some limitations can not control the whole quality of ELISA.The all-sided quality control depends on the establishment，implementation，monitoring and improvement of laboratory quality system.

Blood Bank;ELISA;Quality control;Internal quality coutrol

R19;R197.323;R446.63

A

1672-6170(2012)05-0090-03

2012-03-26;

2012-06-26)