亞貢葉中總酚酸提取工藝研究

趙松松，竇德強(qiáng)

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116620）

中藥工業(yè)

亞貢葉中總酚酸提取工藝研究

趙松松，竇德強(qiáng)*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116620）

目的：確定亞貢葉中總酚酸提取工藝。方法：確定以溶媒量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，水回流法提取總酚酸，采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)確定最佳提取工藝。結(jié)果：最佳提取工藝為水回流法提取3次，每次10倍量水提取20 min。結(jié)論：該工藝條件穩(wěn)定，簡(jiǎn)便易行，重現(xiàn)性好，適于亞貢葉中總酚酸提取。

亞貢；綠原酸；酚酸；正交設(shè)計(jì)

亞貢Smallanthus sonchifolius（Piepp.et Endl.）H.Robinson為菊科Smallanthus屬多年生草本植物，原產(chǎn)于南美洲安第斯山脈，俗稱(chēng) “雪蓮果”、“雅龍果”，英文名為 “YACON”，是當(dāng)?shù)厝说膫鹘y(tǒng)根莖食品［1-2］。其塊根素有 “糖尿病人水果”之稱(chēng)。目前日本是引種亞貢最多的國(guó)家，20世紀(jì)90年代引種到中國(guó)，目前在我國(guó)遼寧、云南、海南、四川、臺(tái)灣等地均有種植。亞貢的傳統(tǒng)用藥部位為其塊根及其莖葉，莖葉在當(dāng)?shù)刈鳛榻堤遣鑱?lái)飲用，其中以綠原酸、咖啡酸及其衍生物為主的酚酸類(lèi)成分被認(rèn)為是亞貢中的主要活性成分之一［3］。本實(shí)驗(yàn)采用分光光度法對(duì)亞貢葉中總酚酸的提取工藝進(jìn)行研究，以期對(duì)其資源進(jìn)行合理的開(kāi)發(fā)利用。

1 試藥與儀器

1.1 試藥

綠原酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110753-200413）；甲醇、95%乙醇、三氯化鐵、鹽酸、鐵氰化鉀、十二烷基硫酸鈉均為分析純；亞貢葉采自遼寧省海城市，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院王冰教授鑒定為菊科亞貢Smallanthus sonchifolius的葉。

1.2 儀器

FA-1004分析天平（上海精科天平廠）；Unico-2100紫外分光光度計(jì)（上海尤尼柯儀器有限公司）；U3010紫外分光光度計(jì)（日本東芝公司）；DZF-6050真空恒溫干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；HH-S水浴鍋（鞏義市予華儀器有限公司）；DZHW電熱套（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 綠原酸對(duì)照品溶液的配制

精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品以50%甲醇定容，配成0.139 2 mg·mL－1對(duì)照品溶液，待用。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱(chēng)取亞貢葉粉末0.1 g，置100 mL圓底燒瓶中，加入50 mL水加熱回流提取0.5 h，濾過(guò)，濾液蒸干，真空干燥至恒重，以50%甲醇定容至50 mL容量瓶中，待用。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的確定

精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液、供試品溶液和50%甲醇溶液各1.0mL，分別置于25mL容量瓶中，加甲醇5 mL，加0.3%十二烷基硫酸鈉2 mL及0.6%FeC13－0.9%K3［Fe（CN）6］（1∶1）混合溶液1 mL，混勻，避光放置5 min，以0.1 mol·L－1的鹽酸溶液定容至刻度，混勻，避光放置20 min。以上述50%甲醇溶液瓶為空白，采用U3010紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)其進(jìn)行掃描，可見(jiàn)對(duì)照品與樣品吸收光譜基本一致，其最大吸收波長(zhǎng)為λmax＝760 nm。因此，采用該波長(zhǎng)下樣品溶液吸光度計(jì)算總酚酸含量。

2.4 提取溶媒的確定

精密稱(chēng)取亞貢葉5.0 g，共5份，分別以50 mL的水，30%、50%、70%、95%乙醇回流提取0.5 h，將提取液過(guò)濾，濾液濃縮，真空干燥至恒重。計(jì)算不同濃度乙醇提取的出膏率和總酚酸含量，其計(jì)算公式如下。

出膏率（%） ＝干膏重/提取藥材重量×100%

式中：A為樣品溶液的吸光度，m為干膏重量（g），M為藥材重量（g），V為定容的體積（mL）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以水作提取液溶媒所得的總酚酸的含量最高，故以水為提取溶媒對(duì)亞貢葉中總酚酸進(jìn)行提取。

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液0.25，0.5，0.75，1.0，1.25，1.5，1.75 mL，分別置于25 mL容量瓶中，按上述方法測(cè)定吸光度A。得線性方程：Y＝56.677X＋0.155 7，r＝0.999 6，線性范圍1.39～8.35μg·mL－1。其中Y為吸光度，X為對(duì)照品溶液濃度（mg·mL－1）。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取一定量的供試品溶液共6份，按2.3項(xiàng)下測(cè)定吸光度，結(jié)果RSD＝1.3%，表明精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取樣品0.1 g共6份，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，按上述方法測(cè)定吸光度，結(jié)果RSD＝0.9%，表明重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取一定量的供試品溶液，按上述方法顯色，分別在0，2，4，6，8 h測(cè)定一次吸光度，結(jié)果RSD＝1.4%，表明供試品溶液顯色后8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取樣品粉末0.05 g共5份，精密加入綠原酸對(duì)照品溶液1.5 mL，按供試品溶液的制備方法制得樣品液，按上述方法測(cè)定吸光度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 總酚酸回收率試驗(yàn)

2.10 亞貢葉中總酚酸提取的正交試驗(yàn)

綜合考慮亞貢總酚酸的理化性質(zhì)及生產(chǎn)實(shí)際，確定以溶媒量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，采用水回流法提取總酚酸，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選工藝，因素水平表見(jiàn)表2，采用L9（34）正交表安排試驗(yàn)，制定試驗(yàn)方案。分別稱(chēng)取亞貢葉粉末5 g，共9份，浸泡1 h，按正交試驗(yàn)各試驗(yàn)號(hào)進(jìn)行試驗(yàn)，將提取液濾過(guò)，濾液濃縮，真空干燥至恒重。以出膏率及總酚酸含量為考察指標(biāo)，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表3，方差分析見(jiàn)表4。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表

表3 L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

表4 正交試驗(yàn)方差分析表

以出膏率和總酚酸含量的綜合評(píng)分為指標(biāo)的正交試驗(yàn)直觀分析、方差分析結(jié)果表明，各因素對(duì)水提取影響大小順序?yàn)镃＞B＞A，C項(xiàng)（提取次數(shù)）影響最大，各項(xiàng)差異均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因素水平優(yōu)化組合為A2B3C3，即加10倍量水，提取3次，每次20 min。

2.11 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

按正交試驗(yàn)結(jié)果確定的因素水平優(yōu)化組合做3次平行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)/%

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，出膏率和總酚酸含量均高于正交試驗(yàn)中的最高值，且工藝條件穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

3 討論

酚酸類(lèi)物質(zhì)具有抗氧化、抗腫瘤、降血糖、降血脂、抗菌和抗病毒等作用，其應(yīng)用研究是目前醫(yī)藥界追逐的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用以亞貢出膏率和總酚酸含量的綜合評(píng)價(jià)為指標(biāo)的正交試驗(yàn)，確定最佳提取工藝為：水回流法提取3次，每次10倍量水提取20 min。該工藝條件穩(wěn)定，簡(jiǎn)便易行，重現(xiàn)性好，出膏率可達(dá)33.8%，總酚酸含量可達(dá)6.1%，適于亞貢葉中總酚酸提取。

［1］ ValentováK，UlrichováJ.Smallanthus sonchifoliusand Lep-idium meyenii-prospective Andean crops for the prevention of chronic diseases［J］.Biomed Papers，2003，147（2）：119-130.

［2］ 丘鷹昆，竇德強(qiáng)，康廷國(guó).亞貢及同屬植物化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.中國(guó)現(xiàn)代中藥，2011，13（7）：45-51.

［3］ ValentováK，Cvak L，Muck A，et al.Antioxidant activity of extracts from the leaves ofSmallanthus sonchifolius［J］.Eur JNutr，2003，42（1）：61-66.

The Extraction Procedure of Total Phenolics from Yacon Leaves

ZHAO Song-song，DOU De-qiang
（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，China）

Objective：To confirm the extract method of total phenolic acids in yacon leaves.Methods：Orthogonal design was used for exploring themain factors of extractmethod.Results：The optimal extraction procedure of total phenolicswas established as thematerialswas refluxed with ten times amount ofwater for 3 times，20 minutes for each.Conclusion：The established method showed good stability and reproducibility and could be used as a method for extracting total phenolic acids in yacon leaves.

Smallanthus sonchifolius；Chlorogenic acid；Total phenolic acids；Orthogonal design

2011-11-02）

*［通訊作者］竇德強(qiáng)，E-mail：doudeqiang2003＠yahoo.com.cn