人附睪蛋白4（HE4）在泌尿系統移行細胞癌中的表達

時春雷，朱 強，韓莎莎，張海峰

（吉林大學白求恩第一醫院，吉林 長春130021）

移行細胞癌是腎盂、輸尿管及膀胱移行上皮的惡性腫瘤，主要發生在膀胱，是男性和女性較為常見的泌尿系統腫瘤，臨床上移行細胞癌可以分為：淺表性／非浸潤性膀胱癌和浸潤性膀胱癌，對于前者治療的目的是減少復發，防止腫瘤進展。而后者需要決定保留膀胱是否會影響生存率。移行細胞癌因為缺乏有效的早期預測指標，仍然是威脅我們健康的重要因素。因此我們迫切需要一個敏感性高、特異性強的檢測指標，人附睪蛋白4（HE4）作為一種潛在的腫瘤標志物值得我們關注。

目前關于HE4與泌尿系統移行細胞癌相關性的研究極少。本項研究目的在于將HE4作為移行細胞癌的一種潛在的腫瘤標志物，討論HE4的水平與泌尿系統移行細胞癌的關系。

1 材料和方法

1.1 一般資料

本研究觀察的是2010年9月至11月我院收治的45名入院行手術治療的移行細胞癌患者，入院前患者均未接受放化療及免疫治療，該研究中，還包括20例良性泌尿生殖系統疾病的患者和10名健康對照者。惡性腫瘤組中，男性31例，女性14例，平均年齡63.4歲（34－88歲）。腫瘤組中肌層浸潤性移行細胞癌19例，非浸潤性的26例；腫瘤位于腎盂的3例，輸尿管的6例，膀胱的36例；腫瘤單發28例，多發17例。

1.2 分組與試驗方法

本研究將所觀察患者分為三組：移行細胞癌組，泌尿系統良性疾病組，健康對照組。所有觀察者均排除其他系統或組織的惡性腫瘤疾病。所有病例的最終診斷均以病理學診斷為準。標本獲取后，在1kg離心力下離心10分鐘，血清采集后在－80℃儲存，直到測試。試劑盒購自瑞典Fujirebio Diagnostis公司，在20℃－25℃環境下，采用酶聯免疫法檢測受試者血清中的HE4水平。

1.3 統計學方法

三組之間采用單因素方差分析的方法進行了比較。HE4水平組間的比較，采用獨立樣本t檢驗的比較方法。術前和術后的HE4水平比較，采用配對樣本t檢驗的比較方法。HE4臨界值、敏感度及特異度的測定采用的繪制ROC曲線的方法，以P＝0.05為標準值。統計分析采用SPSS軟件。

2 結果

三組之間年齡和性別差異，沒有統計學意義（P＞0.05）。HE4水平在移行細胞癌的平均水平為280.88pmol／L，顯著高于良性泌尿系統疾病78.14 pmol／L（P＜0.05）和健康對照組79.82pmol／L（P＜0.05）（如表1、表2）。良性泌尿系統疾病78.14 pmol／L和健康對照者79.82pmol／L之間無顯著差異（P＞0.05）。對于膀胱惡性腫瘤的患者手術后，HE4平均水平為176.43pmol／L低于術前的280.88pmol／L，差 異 顯 著 有 統 計 學 意 義 （P＜0.05）。非肌層浸潤型 HE4平均水平為290.08 pmol／L，顯著高于良性泌尿系統疾病（P＜0.05）和健康對照組（P＜0.05）。

以74.1pmol／L為判斷標準，一般情況中，如年齡、性別間差異不顯著，在不同的臨床病理特征方面，腫瘤位置、數量、級別、分期之間差異不顯著。

運用SPSS軟件繪制出ROC曲線，通過ROC分析發現HE4水平在本研究人群中的最佳診斷分界點為 74.1pmol／L。在 HE4 水平大于 74.1 pmol／L時HE4用于診斷的敏感性為80.0%和特異性為75.0%。

表1 泌尿系統良性與移行細胞癌HE4水平比較

表2 移行細胞癌與健康組HE4水平比較

3 討論

人附睪蛋白4又稱HE4，其基因的cDNA最早由Kiehhoff等［1］從附睪的上皮遠端分離，編碼主要由WAP類型的4個二硫鍵核心組成的蛋白質，與細胞外蛋白酶抑制劑存在很高同源性［2］。鑒于與HE4同源的、可比較的已知轉錄介質 WFDC的蛋白質家族是白細胞中的蛋白酶抑制劑，推斷HE4在自然免疫中也可能有一定作用。在WAP結構域中有一個抑制性的環結構，此環結構通過插入到蛋白酶活性結構區以抑制蛋白酶功能，HE4含有類似的結構域，但是仍然需要進一步研究來探索其是否存在蛋白酶抑制功能。在惡性腫瘤之中，HE4在卵巢癌基因高表達［3］，并有研究發現單獨作為腫瘤標志物，HE4診斷卵巢癌的敏感度達72.9%，特異度達95%，使其有機會在腫瘤診斷中得到應用。目前HE4在移行細胞癌、良性疾病及健康人群的表達尚未被研究。HE4主要分布于卵巢組織，并在肺臟、上呼吸道、結腸黏膜、乳腺上皮及泌尿系統中有所分布，因其在泌尿系統中腎臟遠曲小管上皮中度表達，使得通過從血清中檢測HE4含量來監測移行細胞癌成為一種可能。

我們的研究證明，移行細胞癌患者術前的HE4水平明顯高于術后，兩者相比較差異有統計學意義，為排除手術前血清HE4水平存在的干擾，術后的血清標本我們一般在術后第三天獲取。HE4基因在具有高度自主繁殖細胞中表達增加，進而HE4水平增加，而在腫瘤切除后HE4合成減少，還需要一個長期的前瞻性研究來檢測再次復發及多次復發病人血清腫瘤標志物的表達。

另外我們還發現HE4腫瘤標志物在移行細胞癌各個分期中的表達均增高，非肌層浸潤性腫瘤與泌尿系統良性疾病組和健康對照組差異顯著（P＜0.05），但是非肌層浸潤性移行細胞癌的HE4水平略高于肌層浸潤病例，但兩相比較無顯著差異，因此我們可以得出結論：HE4有可能成為泌尿系統移行細胞癌的早期檢測的篩選方法。

在健康人群中存在HE4的表達，這與胡曉舟［4］等的研究一致，他們通過大樣本統計發現健康中國女性的HE4水平在小于40歲者為59.6pmol／L，大于40歲者為67.6pmol／L，這與本次試驗所用試劑說明書中標準值并不一致，可能是不同地區之間差異導致，我們的實驗中發現，排除其他干擾HE4分泌的因素，男性與女性之間HE4水平不存在差異，各年齡之間也不存在顯著差異。

關于HE4與腫瘤特征的相關性，盧仁泉等［5］研究了28例女性卵巢癌患者后，發現HE4水平與腫瘤的發展存在正相關性，有助于腫瘤分級及預后，而我們研究結果與之有所差異，我們未發現腫瘤數目、位置等腫瘤學特征與HE4存在相關性，可能是研究樣本數偏小導致。

我們發現，血清HE4在ROC線之下的面積為0.819［95%CI：0.707－0.932］（如表3）。因此，HE4作為泌尿系統移行上皮癌的腫瘤標志物是有一定準確性的。通過ROC分析我們還發現HE4水平在本研究人群中的最佳診斷臨界點為74.1pmol／L，當HE4水平高于74.1pmol／L時診斷移行細胞癌時的敏感性是80.0%和特異性是75.0%。所有這些結果證明，血清HE4是一個較好的的診斷性腫瘤標志物。

表3 HE4水平的ROC分析

但是在這項研究中，總體樣本量相對較小，其中移行細胞癌組45例，良性的泌尿生殖系統疾病20例，健康對照組的病人10例。ROC曲線所得的臨界值、敏感度及特異度具有數量依賴性，因此不同的病例數可能存在不同的研究結果，我們在這項研究中使用的HE4的標準值，也需要更大的后續研究來進一步證實。因此，我們仍需要更大樣本的研究來證實我們的一系列結果，包括早期移行細胞癌、良性疾病和高風險者等。

此外，HE4是一個小的分泌糖蛋白［5］，因此，HE4存在由腎臟過濾到尿液中的可能，我們未能排除HE4也可能是一個潛在的可進行膀胱癌尿液測試的目標，并且也可以將HE4的檢測結合膀胱腫瘤抗原、核基質蛋白、存活素等腫瘤標志物以及病理免疫組化研究中Ki－67、P53等相互結合，增加其在腫瘤的早期診斷，預后指導等方面的應用。

［1］Kirchhoff C，Habben I，Ivell R，et al.A major human epididymisspecific cDNA encodes a protein with sequence homology to extracellular proteinase inhibitors［J］.Biol Reprod，1991，45：350.

［2］Moore RG，Brown AK，Miller MC，et al.Utility of a novel serum tumor biomarker HE4in patients with endometrioid adenocarcinoma of the uterus［J］.Gynecol Oncol，2008，110：196.

［3］Gilks CB，Vanderhyden BC，Zhu S，et al.Distinction between serous tumors of low malignant potential and serous carcinomas based on global mRNA expression profiling［J］.Gynecol Oncol，2005，96：684.

［4］胡曉舟，崔麗艷，張 捷，等.健康人群血清HE4水平參考區間的初步探討［J］.中華檢驗醫學雜志，2009，32（12）：1376.

［5］盧仁泉，郭 林，沈燁紅，等.HE4在卵巢癌診治中的臨床應用評價［J］.中國癌癥雜志，2010，20（9）：380.