上皮鈣黏蛋白及C－erbB－2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

王鳳玲，隋小芳，楊永清，陳尚君＊

（1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 老年病科，黑龍江 佳木斯154002；2.惠東縣人民醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，廣東 惠州516300）

大量研究表明，上皮鈣黏蛋白E－cadherin（E－cad）、β－catenin（β－cat）等黏附分子以及癌基因cerbB－2在肺癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要作用［1，2］。E－cad與β－cat等蛋白形成 E－cad／cat復(fù)合體，共同維持組織細(xì)胞的黏附平衡，而腫瘤病人細(xì)胞中E－cad與β－cat表達(dá)出現(xiàn)異常減少，而癌基因cerbB－2在腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，從而破壞 E－cad／cat復(fù)合體，造成腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)采用SP法檢測(cè)41例手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）標(biāo)本中E－cad、β－cat及 C－erbB－2的表達(dá)情況，來(lái)探討上述三者與NSCLC臨床分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 收集2009年1月～2010年12月佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科保存的NSCLC標(biāo)本41例，均經(jīng)福爾馬林固定、石蠟包埋處理。其中男30例，女11例。按組織類型分鱗狀細(xì)胞癌25例，腺癌16例；病理分級(jí)中Ⅰ＋Ⅱ級(jí)26例，Ⅲ級(jí)15例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例，無(wú)轉(zhuǎn)移19例；PTNM的臨床分期中Ⅰ＋Ⅱ期22例，Ⅲ＋Ⅳ期19例。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑及檢測(cè)方法 鼠抗人E－Cadherin單克隆抗體、鼠抗人β－catenin單克隆抗體、鼠抗人C－erbB－2單克隆抗體、S－P免疫組化廣譜試劑盒（通用）、DAB顯色劑等，均來(lái)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。應(yīng)用SP方法分別檢測(cè)E－cad、β－cat及C－erbB－2在NSCLC中的表達(dá)情況。試驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照S－P試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用已知的E－cad、β－cat及C－erbB－2的陽(yáng)性切片（福州邁新生物技術(shù)有限公司提供）作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS作為一抗做陰性對(duì)照。

圖2 β－cat在肺鱗癌中的表達(dá)（×200）

圖1 E－cad在肺鱗癌中的表達(dá)（×200）

1.2.2 結(jié)果判斷 E－cad及β－cat染色結(jié)果根據(jù)熊家安［3］等人的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，正常細(xì)胞中的E－cad及β－cat主要定位于細(xì)胞膜，免疫組化染色示連續(xù)性分布的棕黃色顆粒狀為陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞膜不著色或單純胞漿著色為陰性，切片中染色癌細(xì)胞≤25%為（＋），26%～75%為（＋＋），≥76%為（＋＋＋）。其中（＋＋～＋＋＋）為高表達(dá)，（－～＋）為低表達(dá)或異常表達(dá)。

C－erbB－2染色結(jié)果根據(jù)劉萍［4］等人的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，C－erbB－2染色在細(xì)胞漿和（或）胞膜中呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，顯微鏡下，切片中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為（－），5%～24%為（＋），25%～49%為（＋＋），≥50%為（＋＋＋），每張切片計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。其中（－～＋）為低表達(dá)，而（＋＋～＋＋＋）為高表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用χ2檢驗(yàn)對(duì)計(jì)數(shù)資料作比較分析，相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 E－cad、β－cat及 C－erbB－2的表達(dá)與 NSCLC 的臨床病理特征

在 正 常 對(duì) 照 組 E－cad、β－cat 均 為 高 表 達(dá)（100%）。在41例NSCLC免疫組化染色結(jié)果中E－cad及β－cat低表達(dá)率分別占60.98%（高表達(dá)39.02%）及53.66%（高表達(dá)46.34%）；兩指標(biāo)分別在兩組間對(duì)比χ2＝6.83和χ2＝7.92，P均＜0.05。

在正常對(duì)照組中C－erbB－2均無(wú)表達(dá)，在41例NSCLC中C－erbB－2有23例出現(xiàn)高表達(dá)，高表達(dá)率為56.10%，兩組差異顯著χ2＝7.84，P＜0.05。

E－cad及β－cat在NSCLC的不同病理分級(jí)間、不同臨床分期間、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間的高表達(dá)率見(jiàn)表1及圖1－3。

2.2 E－cad、β－cat及C－erbB－2三者之間的相互關(guān)系

在41例NSCLC中三者之間的相互關(guān)系見(jiàn)表2、表3。經(jīng)Spearman相關(guān)分析表明 E－cad、β－cat與C－erbB－2之間呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01和P＜0.05），E－cad與β－cat之間呈正相關(guān)（P＜0.05）。

表1 41例NSCLC患者E－cad和β－cat及C－erbB－2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

表2 C－erbB－2與 E－cad、β－cat相關(guān)性分析

表3 E－cad與β－cat相關(guān)性分析

3 討論

有研究顯示，在肺癌中E－cad及β－cat的表達(dá)明顯降低，其低表達(dá)與腫瘤的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)聯(lián)［5，6］。我們的研究發(fā)現(xiàn)，E－cad及β－cat的表達(dá)與NSCLC的病理分級(jí)，臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與腫瘤的組織分型不相關(guān)，兩者的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。在41例的NSCLC中，E－cad及β－cat低表達(dá)或異常表達(dá)率高達(dá)61.0%及53.7%，在低分化及Ⅲ～Ⅳ期肺癌中表達(dá)更為明顯下調(diào)，在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中兩者的表達(dá)水平也存在顯著的差異性，兩者在腫瘤中的異常表達(dá)，破壞了E－cad／cat結(jié)構(gòu)的完整性，黏附功能喪失而最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。

C－erbB－2（Her－2，Neu）是 表 皮 生 長(zhǎng) 因 子 受 體（EGFR）家族的重要成員之一。在正常組織細(xì)胞中C－erbB－2蛋白基本不表達(dá)，而在腫瘤細(xì)胞中C－erbB－2蛋白成高表達(dá)，但是在不同類型的癌癥中C－erbB－2蛋白的高表達(dá)與腫瘤的分級(jí)及臨床分期相關(guān)性研究結(jié)果并不一致［7］。在本實(shí)驗(yàn)中，C－erbB－2有23例出現(xiàn)高表達(dá)，且其表達(dá)水平與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有顯著相關(guān)性，與腫瘤的組織分型及臨床病理特征無(wú)明顯相關(guān)。另外，本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)C－erbB－2高表達(dá)且與E－cad及β－cat的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。C－erbB－2的高表達(dá)參與多種腫瘤細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)，使細(xì)胞有絲分裂相關(guān)的蛋白或酶的活性持續(xù)增加，細(xì)胞增殖周期縮短，細(xì)胞過(guò)度增殖，惡性表現(xiàn)增強(qiáng)以及抗凋亡能力增強(qiáng)，同時(shí)，它還促使E－cad基因的表達(dá)下調(diào)，改變E－cad的黏附特性。另一方面高表達(dá)的C－erbB－2還影響E－cad／cat復(fù)合體的穩(wěn)定性而致其解聚，最終造成腫瘤細(xì)胞的脫落轉(zhuǎn)移，浸潤(rùn)能力進(jìn)一步增強(qiáng)。

本研究表明，E－cad、β－cat及 C－erbB－2與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展中是密切相關(guān)的，并在此過(guò)程中起到重要的調(diào)控作用。因此聯(lián)合檢測(cè)上述三者的表達(dá)，對(duì)判斷病情和預(yù)后有一定價(jià)值。

［1］易明福 魏曉梅.C－erbB－2在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的研究［J］.臨床肺癌雜志，2008，13（4）：409.

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