腹腔注射阿霉素誘導(dǎo)實驗擴張型心肌病大鼠模型的建立

秦保鋒，嚴(yán)世蕓

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，上海200021；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海201203）

擴張型心肌病（Dilated cardiomyopathy，DCM）是以心肌細(xì)胞壞死、間質(zhì)纖維化、心肌間質(zhì)膠原重構(gòu)為主要病理特征，以心腔［左心室和（或）右心室］擴大、心肌收縮功能障礙為主要特征的原因不明性心肌疾病，也是除冠心病和高血壓以外導(dǎo)致心力衰竭的主要病因之一。DCM是國際醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的難題，一直被定義為“原因不明的心肌疾病”，其病因復(fù)雜，可能與特發(fā)性、家族性或遺傳性、病毒性、免疫性、酒精性或中毒有關(guān)［1］。近年來，DCM發(fā)病有上升趨勢，歐美資料顯示［2］：心肌病年發(fā)病率為3／10萬－6／10萬，其中擴張型心肌病占40%－60%，在美國每年有上萬人死于DCM，5年生存率不足50%，且男性的發(fā)病率是女性的2.5倍，在我國發(fā)病率為13／10萬－84／10萬不等，病死率較高，且有逐年上升的趨勢［3］。目前，仍需對其發(fā)病機制及治療進行進一步研究。因此需要建立穩(wěn)定、成熟的DCM的動物模型以供試驗研究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和主要試劑

24只清潔級雄性SD大鼠（上海西普爾－必凱實驗動物有限公司），體重180－200g。鹽酸阿霉素（深圳萬樂藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字：H44024360，批號：1012E2），大鼠血漿腦鈉素（BNP）ELISA 試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）。

1.2 建立DCM動物模型

大鼠隨機分為正常組（n＝12）和DCM組（n＝12）。DCM 組予腹腔注射阿霉素2.5mg／（kg·week），生理鹽水稀釋濃度1mg／ml，正常組腹腔注射等量生理鹽水。每周根據(jù)體重調(diào)整阿霉素劑量，用藥6周。

1.3 記錄大鼠體重的變化及死亡率

每周測量兩組大鼠的體重，觀察大鼠的狀態(tài)及死亡情況。

1.4 超聲心動圖檢查

于第6周末對存活大鼠及正常對照組大鼠用苯巴比妥麻醉后行超聲心動圖檢查。記錄大鼠左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左室短軸縮短率（FS）。

1.5 血漿BNP檢測

造模第6周，將正常組和DCM組大鼠腹主動脈取全血，靜置30min后，離心分離血漿，按試劑盒說明檢測BNP。

1.6 心肌病理切片

正常組和DCM組大鼠處死后迅速打開胸腔，獲取心臟，用刀片橫切心臟，用10%多聚甲醛固定后，取左心室前壁心肌進行切片，HE染色。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS11.5軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，本文結(jié)果均用（）表示，兩組數(shù)據(jù)間比較用兩樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常組與模型組大鼠體重變化及死亡率

造模前兩組大鼠體重?zé)o差異，給藥后1周，模型組大鼠逐漸出現(xiàn)懶動，少食，腹瀉等癥狀，體重逐漸下降，部分大鼠出現(xiàn)腹水。第6周末，DCM大鼠體重（226.67±14.72）g明顯低于正常組（420±25.88）g，P＜0.01。模型組大鼠于給藥第4周開始，出現(xiàn)第一只大鼠死亡（腹瀉），至造模第6周，共死亡2只。死亡率為16.7%，正常對照組大鼠全部存活。

2.2 正常組與模型組大鼠超聲心動圖檢查結(jié)果

正常組與模型組超聲心動圖檢查結(jié)果：EF（%）、FS（%）正常組分別是86.17±3.82、52.67±3.27，模型組分別是63.83±3.49、34.67±3.5，EF、FS比較有顯著差異（P＜0.01）。

2.3 正常組與模型組大鼠血漿BNP（pg／ml）水平

模型組大鼠血漿BNP水平（644.68±44.79）高于正常對照組（206.07±20.15），兩組具有顯著性差異P＜0.01。

2.4 正常組與模型組大鼠心肌病理切片

正常組心肌HE染色：心肌纖維排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞核明顯，呈圓形或類圓形，無心肌纖維斷裂，胞質(zhì)均勻豐富，心肌間血管豐富，心肌間質(zhì)無異常改變。見圖1。

模型組心肌HE染色：心肌纖維排列紊亂，心肌纖維斷裂，細(xì)胞間隙增寬、水腫，部分空泡變性，心肌組織中小血管擴張充血，間質(zhì)出血，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤，心肌細(xì)胞輕度腫脹。見圖2。

圖1 正常組大鼠心?。℉E）（×200倍）

圖2 模型組大鼠心?。℉E）（×200倍）

3 討論

擴張型心肌病的發(fā)病與多種因素有關(guān)，發(fā)病原因比較復(fù)雜，建立理想的動物模型是研究擴張型心肌病發(fā)病機理的重要手段，目前常用的有尾靜脈注射阿霉素、口服呋喃唑酮、腹腔注射多柔比星、腹腔注射柯薩奇病毒、轉(zhuǎn)基因等誘導(dǎo)的擴張型心肌病模型［4－8］。阿霉素（adriamycin，ADR）可引起類似擴張型心肌病樣病理、生理改變以及在此基礎(chǔ)上發(fā)生的充血性心力衰竭。因此，阿霉素誘導(dǎo)心肌病模型應(yīng)用廣泛。

阿霉素誘導(dǎo)擴張型心肌病模型的方法由于取材方便，方法簡單，結(jié)果滿意，應(yīng)用較廣，但同時也存在缺點，即動物死亡率高，模型周期長。目前尚無統(tǒng)一的給藥標(biāo)準(zhǔn)。文獻報道［9］阿霉素誘導(dǎo)大鼠擴張型心肌病模型成功的累計藥量為15mg／kg，目前給藥方法主要有經(jīng)尾靜脈注射和腹腔注射兩種途徑。經(jīng)尾靜脈注射由于滲漏可造成嚴(yán)重的靜脈炎以及周圍組織的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致管腔堵塞而影響實驗的進行。經(jīng)腹腔注射方法簡單，容易操作，可避免上述缺點。短期大量給藥，動物死亡率高，模型成功率低；長期小量給藥，造模周期長，死亡率并無明顯降低，同時不利于實驗研究，本研究顯示用阿霉素2.5mg／（kg·week），連續(xù)6周腹腔注射給藥，模型死亡率僅16.7%，各項觀察指標(biāo)包括超聲心動圖檢查、血漿BNP水平、心肌病理切片等結(jié)果均符合擴張型心肌病的改變。模型成功率為83%，與文獻報道基本一致［10］。本研究結(jié)果顯示，該制造擴張型心肌病動物模型的方法成功率高，造模周期較短，結(jié)果可靠，可以做為擴張型心肌病基礎(chǔ)研究的動物模型。

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［10］周 巖，趙麗蓉，楊思睿.阿霉素誘導(dǎo)大鼠擴張型心肌病模型的建立［J］.中國實驗診斷學(xué)，2010，14（3）：331.