雞大腸桿菌的分離鑒定

李本科 （山東省濱州市畜牧獸醫局 256600）

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雞大腸桿菌的分離鑒定

李本科 （山東省濱州市畜牧獸醫局 256600）

本研究用菌采自濱州市某雞場疑似大腸桿菌病死雞的心血，肝臟，腎臟。進行病原菌的分離，鑒定，生化試驗動物試驗和藥敏試驗，結果顯示，引起該雞場發病的病原菌為大腸桿菌，該菌株有較強的致病性，對阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素敏感，對環丙沙星，諾氟沙星，卡那霉素中度敏感，而紅霉素、青霉素、氨芐西林，頭孢唑啉，頭孢噻吩和復方新諾明對分離菌有耐藥性。表明該雞場出現了耐藥的致病性大腸桿菌，在以后的肉雞生產中應慎用抗生素，在使用藥物治療大腸桿菌病時，應根據藥敏試驗結果，選擇敏感藥物，且應注意交替用藥，按療程投藥。

大腸桿菌 分離鑒定 致病性 生化試驗 藥敏實驗

雞大腸桿菌病是由大腸埃希氏菌的某些血清型引起的雞的傳染病。作為各種動物體內的常駐菌，大腸桿菌在自然環境中幾乎無處不在，由其引起的大腸桿菌病流行分布極為廣泛和普遍，給養雞業帶來巨大的經濟損失。本病一年四季均有發生，沒有明確的季節性，尤其冬季和春季多發，該病癥狀一般均呈典型經過。幼雛多發臍帶炎，突然死亡。大部分雞只體溫升高、精神委頓、羽毛蓬亂、呼吸困難和食欲廢絕。黃、白、綠稀便交替出現。急性型往往發病后一周內即死亡，亞急性或慢性型多發于成年蛋雞，患病的雞精神不振，食欲減少，飲水量增加，逐漸消瘦和下痢，但死亡率不高。除此之外，常見氣囊炎的發生，表現程度不一的呼吸道癥狀。有的雞關節腫大呈跛行和胸臥姿勢。還有出現眼球炎及母雞卵巢炎、輸卵管炎等。剖檢可見氣囊壁渾濁增厚，肝臟腫大變綠，表面有纖維素樣物質覆蓋，腸黏膜出血及產蛋母雞卵巢變性成瘤塊狀[1]。為了控制該大腸桿菌對雞群的危害，筆者對送檢的疑似大腸桿菌病料進行了分離鑒定，并通過藥敏實驗確定了敏感性藥物，為有效防治大腸桿菌病提供了依據。

1 材料和方法

1.1 病料來源 濱州市某養雞場疑似感染大腸桿菌所致死亡雞4只。

1.2 細菌分離 無菌采取其肝臟，心血和肺臟的組織，分別劃線接種到馬丁平板，麥康凱平板，37 ℃培養20h。

1.3 細菌形態學觀察 取在麥康凱瓊脂平板上培養20h的新鮮菌落，涂片進行革蘭氏染色鏡檢。

1.4 生化試驗 糖發酵及生化反應按常規進行[2]。

1.5 致病力測定 （1）菌液制備：將麥康凱平板上的分離菌落用馬丁肉湯洗下，4℃保存備用。（2）動物試驗：未免疫過的健康雞隨機分為A、B兩組，每組5只。A組為試驗組，B組為對照組。A組頸部皮下接種馬丁肉湯菌液，每只0.5ml；B組頸部皮下接種相同劑量的滅菌馬丁肉湯，隔離飼養。

1.6 藥敏試驗 按K-B紙片擴散法將被檢細菌涂布接種于普通瓊脂平板上，間隔一定距離貼上各種藥敏試紙，于37℃培養24h，結果判斷依據《紙片法抗菌藥物敏感試驗操作標準(第四版)》進行。

2 結果

2.1 病雞及病死雞的病理剖檢變化 病雞肝臟腫大、質脆，有點狀壞死灶，表面覆蓋有黃白色的纖維素性滲出物；脾臟腫大，肺充血、淤血，腎臟腫大，有尿酸鹽沉積；十二指腸有出血性腸炎變化。

2.2 細菌培養 在營養瓊脂平板上37 ℃培養18 h后，形成中等大小，圓形微凸起，表面光滑濕潤，淺灰白色半透明菌落。在麥康凱瓊脂平板上，形成中等大小，表面光滑濕潤的粉紅色菌落。

2.3 細菌形態學觀察 挑取病死雞肝、腎在馬丁平板和麥康凱平板上的菌落分別涂片革蘭氏染色鏡檢，均可見兩端鈍圓，多數散在排列的革蘭氏陰性短桿菌。

2.4 生化試驗結果 生化試驗結果顯示，此次分離的大腸桿菌對甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖、蕈糖、果糖產酸產氣，MR、棉子糖、山梨醇、鳥氨酸結果陽性，VP、衛矛醇、肌醇、硝酸鹽、酒石酸鹽、水楊素、精氨酸水解酶、側金盞酰、阿拉伯醇、血清菊糖、鳥氨酸精氨酸脫羧酶、丙氨酸鹽、ONPG、乙酰胺結果陰性，符合大腸桿菌的生化特征。

2.5 動物試驗 A組3只36h內死亡，2只1周后耐過，剖檢可見肝臟腫大，有出血點和壞死點，腸嚴重膨氣且內容物稀薄，心包淤血，肺出血，脾臟腫大。腎臟腫大，有尿酸鹽沉積；十二指腸有出血性腸炎變化。采取A組死雞的心血、肝和腎臟接種在普通瓊脂平板和麥康凱平板，37℃培養20h，長出與分離的病料相似的菌落。革蘭氏染色及生化鑒定表明此菌與接種細菌為同種細菌。表明該菌對雞具有較強的致病力。B組飼養7d后沒有明顯的臨床變化，剖檢未見病變。

2.6 藥敏試驗 結果見附表。

由附表可見，此次分離的大腸桿菌對阿米卡星、鏈霉素、慶大霉素敏感，對環丙沙星，諾氟沙星，卡那霉素中度敏感，而紅霉素、青霉素、氨芐西林，頭孢唑啉，頭孢噻吩和復方新諾明對分離菌產生耐藥性。

附表 藥敏試驗結果 (mm)

抗菌藥物名稱代號抑菌圈直徑結果 紅霉素E8R 青霉素P9R 頭孢唑啉CZ10R 環丙沙星CIP16M 諾氟沙星NOR14M 阿米卡星AN20S 鏈霉素S18S 慶大霉素GM21S 氨芐西林AM8R 頭孢噻吩CF12R 卡那霉素K15M 復方新諾明SXT10R

注：R代表耐藥，M代表中度敏感，S代表敏感

3 討論

（1）近十幾年，為了控制大腸桿菌及某些細菌感染，在飼料添加劑及治療中盲目使用一些抗菌藥物，導致耐藥菌株越來越多并日趨嚴重。而且大腸桿菌可通過菌毛將其抗藥性質粒傳遞給其他大腸桿菌，所以大腸桿菌的抗藥性形成較快，環境中大腸桿菌耐藥性菌株越來越多[3]。藥敏試驗結果可以看出，曾對大腸桿菌比較敏感的環丙沙星、諾氟沙星、痢特靈、頭孢唑啉鈉等隨著不斷的應用均產生了不同程度的抗藥性。所以，在使用藥物治療大腸桿菌病時，應根據藥敏試驗結果，選擇敏感藥物，且應注意交替用藥，按療程投藥，才能收到較好的治療效果。（2）大腸桿菌是條件性致病菌，大腸桿菌病的發生和流行與氣候環境條件及飼養管理水平等許多應激因素密切相關，特別是雞舍的衛生狀況很差，糞便污染，潮濕擁擠，空氣不流通，過冷過熱都能明顯地促使本病發生。有些雞場和雞群由于這些原因而導致的大腸桿菌病發病率高達50%以上。因此防制該病的關鍵在于加強飼養管理，做好各個環節的衛生消毒，消除各種發病誘因。日常要提供全價優質飼料，并足量補充維生素和電解質；夏季還要注意防暑，應添加飼料添加劑，如碳酸氫鈉、桿菌肽鋅、維生素C等；通過消毒創造一個沒有致病微生物生存和繁殖的良好的養殖環境。殺滅和抑制已經產生的致病微生物，減少其對動物的感染機會。（3）做好免疫工作。由于各地大腸桿菌的血清型存在差異，有效而通用的菌苗尚未出現，因此篩選地區性免疫原性優良的大腸桿菌菌株制作菌苗的疫苗進行免疫效果較好。

[1] 陳懷套, 許東仁. 獸醫病理學[M]. 北京: 中國農業出版社, 2005.

[2] 塞弗. 禽病學(第11版)[M]. 北京: 中國農業出版社, 2005.

[3] 中國畜牧獸醫學會禽病學分會第十一次學術研討會論文集，某大型雞場的病原性大腸桿菌常見血清型及其穩定性[D]. 2002,10.

（2011–09–29）

S852.61+2

A

1007-1733(2012)01-0017-02