北京某地區奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗

曹授俊 蔡澤川 （北京農業職業學院 北京 房山 102442）

姜小平 （北京市房山區動物疫病預防控制中心）

奶牛乳房炎是指奶牛的乳房受到了物理、化學、微生物等因素刺激所引起的一種炎癥，表現為乳汁發生理化性質和細胞學性質的變化、乳腺組織發生病理學變化等。該病是奶牛的常發病之一，可引起奶牛產奶量下降、奶品質降低、奶牛過早淘汰等[1]。發病奶牛的乳汁中所含有病原微生物及其毒素和治療后的藥物殘留等，對人類健康危害極大[2]。目前已知的奶牛乳房炎的致病性微生物已超過150種，其中包括球菌、桿菌、支原體、真菌、酵母菌和病毒等[3]。大部分是由細菌感染引起的，如革蘭氏陽性的無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌等，規模化養殖場中大腸埃希氏菌等革蘭氏陰性菌的感染也很普遍[3]。本試驗對北京市某區的7個奶牛場進行了隱性乳房炎普查、病原細菌分離鑒定和主要病原菌的體外藥敏試驗，對該區奶牛隱性乳房炎的防控提供了理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 BMT檢測試劑由北京市奶牛公司提供；鮮血營養瓊脂培養基、普通營養瓊脂培養基、卻甫曼瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基、細菌生化微量鑒定管和藥敏紙片購自北京吉普騰生物技術有限公司。

1.2 隱性乳房炎的普查 用BMT檢測試劑對北京市某區的7個奶牛場的1560頭泌乳奶牛（無臨床型乳房炎癥狀）進行隱性乳房炎普查。收集奶樣時，先用高錳酸鉀清洗乳房，棄去頭3把奶，然后以無菌操作方法擠出約10ml奶樣于滅菌試管中。無菌取出2ml于診斷盤上，在每一個托盤中加入2mlBMT檢測試劑，搖勻，30s后觀察結果。根據反應現象依照BMT判定標準（表1）進行判斷。將陽性乳樣標明牛號和日期后，隨即帶回實驗室進行病原菌的分離鑒定。

表1 BMT法檢測隱性乳房炎的判斷標準 （萬/ml）

1.3 病原菌的分離鑒定 將隱性乳房炎陽性乳樣搖勻后，無菌取適量的試管中部乳樣，涂布于鮮血平板瓊脂上，37℃培養24～48h，觀察細菌的生長情況及其菌落特征。對不同形態的菌落進行挑菌純培養后，涂片染色鏡檢[4]。根據菌體形態和染色特性，初步判定細菌類屬，然后分別進行培養特性和生理生化鑒定。

1.4 主要病原菌的藥敏試驗 采用藥敏紙片擴散法對主要病原菌進行藥物敏感性試驗，即將分離鑒定到的主要病原菌分別均勻涂布于鮮血瓊脂平板上，然后均勻貼藥敏紙片于其上，置37℃恒溫箱培養24h，測量抑菌圈直徑，進行抑菌效果判定。

2 結果與分析

2.1 隱性乳房炎 普查該區7個奶牛場共有奶牛存欄2830頭，其中檢測泌乳奶牛1560頭，采用BMT檢測試劑對其乳樣進行隱性乳房炎的排查，結果顯示陽性乳樣343份（頭），陽性率為21.9%。結果見表2。2.2 隱性乳房炎的乳汁中細菌分離鑒定的結果 隨機選取隱性乳房炎陽性乳樣40份，涂布在鮮血營養瓊脂平板上，37℃培養24～48h后，結果每份乳樣均有細菌菌落的存在，細菌檢出率為100%。在不同培養基上主要有3類不同的菌落，對這三類菌落進行革蘭氏染色，并于不同培養基上進行分離培養，結果見表3。

表2 奶牛隱性乳房炎感染情況 （頭、%）

對第一類細菌進行兔血漿凝固酶試驗、過氧化氫酶試驗、三糖鐵試驗、0/F試驗等；對第二類細菌進行CAMP試驗、溶血試驗、七葉苷水解試驗、美藍牛乳試驗、甘露醇、山梨醇、血清菊糖發酵試驗等；對第三類細菌進行尿素酶試驗、糖類發酵試驗、枸櫞酸鹽利用試驗、明膠液化試驗等[5]。經以上生化鑒定，結果見表4。

從表4中可看出，在40份隱性乳房炎陽性乳樣中，共分離出細菌87株，其中金黃色葡萄球菌22株（25.4%）、表皮葡萄球菌11株（12.6%）、腐生葡萄球菌12株（13.8%）、無乳鏈球菌11株（12.6%）、停乳鏈球菌6株（6.9%）、乳房鏈球菌4株（4.7%）、糞鏈球菌1株（1.1%）、大腸桿菌14株（16%）及其他菌6株（6.9%）。由此可見，引起該地區奶牛隱性乳房炎的主要致病菌為革蘭氏陽性球菌，特別是葡萄球菌屬的金黃色葡萄球菌及鏈球菌。還有相當一部分革蘭氏陰性的大腸桿菌。

表3 三類不同菌落在培養基上的生長性狀

表4 隱性乳房炎病原菌的分離鑒定結果

2.3 藥敏試驗 采用藥敏紙片瓊脂擴散法對主要病原菌進行藥物敏感性試驗，觀察7種主要病原球菌對7種不同抗生素的敏感性（測量其抑菌圈直徑），結果見表5。

表5 分離細菌藥敏試驗結果（抑菌圈直徑） （mm）

藥敏試驗結果顯示，對葡萄球菌屬致病菌，頭孢噻呋鈉、氟哌酸、頭孢拉定以及慶大霉素的抑菌效果較好，卡那霉素和新霉素亦有抑菌效果；對鏈球菌屬致病菌，頭孢噻呋鈉、氟哌酸、頭孢拉定、慶大霉素、卡那霉素和新霉素的抑菌效果較好，而其他抗生素的抑菌效果不理想。

3 討論

（1）本試驗采用BMT檢測試劑對北京某區7個奶牛場的1560頭泌乳奶牛進行隱性乳房炎調查，結果發現隱性乳房炎的發病率約為22%。經調查發現，隱性乳房炎感染率的高低與飼養管理、環境衛生條件、病原菌致病力強弱等因素有直接的關系。飼養管理較好的兩個牛場檢出隱性乳房炎陽性數和強陽性數均比較少，而飼養管理較差的牛場，不僅檢出率高，陽性數與強陽性數也相對較高。由此可見，加強奶牛飼養管理，保持環境衛生清潔，消除環境因素影響，對預防和控制奶牛隱性乳房炎的發生與流行有積極的意義。（2）引起奶牛發生隱性乳房炎的病原細菌很多。本試驗對北京某區7個奶牛場的40份隱性乳房炎乳樣進行細菌的分離鑒定，共檢出87株，主要是革蘭氏陽性球菌，包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌和大腸桿菌等，這與吳國娟等[9]報道的結果基本一致，說明北京地區奶牛隱性乳房炎致病菌中的細菌種類變化不大，個別牛場出現的差異，可能與該奶牛場的衛生條件和環境因素有關。（3）控制奶牛隱性乳房炎，大多奶牛場都以應用抗生素為主。從本次藥敏試驗結果來看，頭孢噻呋鈉、氟哌酸、頭孢拉定、慶大霉素、卡那霉素和新霉素等藥物對隱性乳房炎的主要致病菌具有良好的抑菌效果，但在生產中常用的抗生素如青霉素類、鏈霉素等對該致病菌己產生比較強的耐藥性。頭孢噻呋鈉在臨床上使用治療奶牛隱性乳房炎，具有很好的抑菌效果，但價格昂貴，尤其個體養牛戶常負擔不起。（4）隨著抗菌藥物在大量使用，耐藥菌株也越來越多，使得藥物療效下降，同時，抗菌藥物在牛奶中大量殘留直接影響人類健康。因此，使用中藥防治[10]奶牛乳房炎，如使用公英散、炎康注射液等中藥制劑，能調節奶牛全身機能，提高機體免疫力，尤其對奶牛隱性乳房炎有明顯的治療作用。