利用氣相色譜法同步測定飼料香味劑中四種成分的研究

李會榮

（山東省飼料質量檢驗所 濟南 250022）

飼料香味劑作為誘食劑，能把動物吸引到飼料周圍，并使之產生饑餓感、自在感，刺激唾液和消化液的分泌；能提高適口性，保證動物在高溫、斷奶、運輸、疾病等應激狀態下的采食量；能有效掩蓋飼料中的不良味道，使飼料充滿香甜氣味；能產生均一的氣味，使畜禽順利適應飼料配方和飼料原料的改變，促進幼齡動物提前斷奶，提早采食；還可以作為一種產品標記，使飼料產品更具競爭力。

國內外香味劑的檢測，主要是以氣相色譜或液相色譜為核心的檢測技術，近幾年我國食品行業也相繼發布了一些單一香味劑的產品標準及檢測方法。我國市場上銷售的飼料香味劑種類眾多，但目前尚無單一飼料香味劑的產品標準及檢測方法，更沒有飼料香味劑中多種成分同步檢測的方法。本研究針對飼料香味劑添加成分繁多復雜的特性，參照食品中單一香味劑的檢測方法，建立了氣相色譜法同步檢測飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的方法，同時對方法的檢出限、準確度和精密度等進行了試驗驗證。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 分析純無水乙醇。

1.1.2 儀器和設備 分析天平（感量0.1mg）；Agilent6890N氣相色譜儀（具有FID檢測器和可程序升溫的柱溫箱）。

1.1.3 標準物質 乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯標準品純度大于98%。（1）乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準貯備溶液：準確稱取乙基香蘭素0.1000g、乙基麥芽酚0.1000g于10ml棕色容量瓶中，加5ml無水乙醇溶解后，再準確量取椰子醛0.10ml、乙酸異戊酯0.10ml，用無水乙醇定容。該溶液中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的濃度均為10mg/ml。2～8℃保存，保質期1個月。（2）乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準中間溶液：準確移取乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準貯備溶液1ml，置于10ml棕色容量瓶中，用無水乙醇定容。該溶液中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的濃度均為1mg/ml。2～8℃保存，保質期1周。（3）乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準工作溶液：準確移取適量乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標準貯備溶液（1）和混合標準中間溶液（2），分別配制成濃度為0.01、0.10、0.20、0.50、1.00和2.00mg/ml的混合標準工作溶液。現用現配。

1.2 方法

1.2.1 氣相色譜參考條件 色譜柱：HP-5或同等效果的柱子，30m×0.25μm；進樣口溫度：240℃；不分流進樣；載氣流速：8.0ml/min；柱溫箱溫度：起始60℃，保持2min，以30℃/min的速率升溫至200℃，保持2min；檢測器溫度：260℃。試驗結果見圖1。結果表明：該色譜條件均能滿足色譜分析的需要。

圖1 乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯混合標樣圖譜

1.2.2 提取條件的確定 由于檢測的四種物質均能溶解于無水乙醇[1-5]，因此選用無水乙醇作為提取劑。用空白的載體，添加不同濃度的乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯，選用振蕩器、旋渦混合器和手動振搖三種不同的方法提取后，上機測定其回收率。由于不同提取方式的回收率幾乎相同，且考慮到檢測的這四種物質均有揮發性，處理的步驟越簡單越好。因此，選用處理簡單且不需要其它輔助設備的手動振搖提取方式。即準確稱取試樣適量（精確至0.0002g）（使待測溶液中所測物的含量控制在0.01～2.00mg/ml之間），置于10ml棕色容量瓶中，加5ml無水乙醇，振蕩混勻，用無水乙醇定容至刻度。混勻后靜置。取上清溶液，溶液過0.45μm的微孔濾膜，供上機測定。

2 結果

2.1 方法的線性范圍

將標準工作溶液依次從低濃度到高濃度進樣，每一濃度進樣三針，按其所得峰面積的平均值與對應的標準溶液濃度（mg/ml）作標準曲線，計算出回歸方程和相關系數。試驗結果見圖2。結果表明：乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯標準工作溶液在0.01～2.00MG/ML濃度范圍內有良好的線性關系，相關系數均達到0.99以上。

圖2 乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯標準曲線

2.2 標準溶液重復性

用1.00mg/ml乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的混合標準中間溶液連續進樣6次。試驗結果見表1。結果表明：同一濃度的標準溶液有較好的重復性，其RSD%均小于5.0%。

表1 混合標準中間溶液重復性檢測 （%）

2.3 最低定量限的確定

在空白載體中分別添加乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯各100mg/kg，試驗結果見圖3和表2。結果表明：在添加量為100mg/kg時，其回收率為80%以上，而添加量為100mg/kg以上其它濃度的回收率也均在80%以上。由于該方法中采用程序升溫的色譜條件，當添加量小于100mg/kg時，其信噪比不能滿足定量的要求，所以，將該方法的最低定量限定為100mg/kg。目前市場上常見的飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的配方含量在2～100g/kg之間。所以，該定量限完全可以滿足實際生產中產品含量檢測的要求。

圖3 空白載體中添加乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯100mg/kg色譜圖

表2 方法最低定量限確定的檢測結果回收率 （%）

2.4 方法的準確度和精密度的測定

在空白載體中分別添加各100mg/kg、1000mg/kg、2000mg/kg、3000mg/kg、4000mg/kg、5000mg/kg和10000mg/kg濃度的乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯，每個濃度做4次重復，分別計算回收率。試驗結果見表3。在添加不同濃度的乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯時，不同的添加濃度均可得到較高的回收率，且相對標準偏差均小于10%。

2.5 方法的適用范圍

為考察本方法的適用性，從市場上收集了3個生產廠家的6個飼料香味劑樣品，其中2個果香型，2個奶香型，但這4個樣品無具體的含量規定；另2個樣品有標簽，測定結果均大于樣品添加含量的標示量。檢測結果見表4。結果表明：不同的生產廠家、不同成分的香味劑均可用該方法檢測。

表3 空白載體中添加回收的檢測結果 （%）

表4 方法適用范圍的驗證含量 （mg/kg）

2.6 干擾試驗

為考察其它香味劑是否對該方法有干擾，分別用濃度為2.00mg/ml桃醛（丙位十一內酯）和丁位葵內酯標準溶液，在與乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯相同的提取和色譜條件下上機測定，各種香味劑的出峰時間見表5，桃醛和丁位葵內酯的圖譜見圖4和圖5。試驗顯示，乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯與桃醛和丁位葵內酯的色譜峰有很好的分離，且對其定量無影響。結果表明：桃醛和丁位葵內酯對乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯的測定均無干擾。

表5 各種香味劑及出峰時間

圖4 桃醛（丙位十一內酯）圖譜

圖5 丁位葵內酯圖譜

3 結論

以上試驗結果表明：本研究建立的飼料香味劑中乙基香蘭素、乙基麥芽酚、椰子醛和乙酸異戊酯同步檢測方法，色譜條件易于掌握，儀器性能穩定，測試數據重復性好，回收率高，精密度和準確度均能滿足分析要求，且具有較好的定量限。