腫瘤轉移相關基因1與抑制基因KISS-1在胰腺癌中的表達及意義

劉 勇 劉建生 李居劍 王 艷

山西醫科大學第一醫院普外科，山西太原 030001

胰腺癌是消化系統常見的惡性腫瘤，具有局部侵襲力高、淋巴結轉移早的特點，目前認為手術是其唯一的可治愈性手段，然而85%的胰腺癌患者就診時已屬晚期或發生遠處轉移，手術切除率僅為10%～15%[1]，故控制轉移是提高患者預后的關鍵。近年來有關腫瘤轉移相關基因1（metastasis associated 1，MTA1）和腫瘤轉移抑制基因 KISS-1與腫瘤浸潤和轉移的關系日益受到人們的關注。筆者運用免疫組化法檢測胰腺癌組織中MTA1與KISS-1蛋白的表達情況，在此基礎上探討其與胰腺癌病理指標的關系及二者的相關性，為胰腺癌的研究提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象

山西醫科大學第一醫院2005年1月～2010年12月行手術切除并經病理證實的胰腺癌標本36例。其中，男23例，女13例，年齡45～77歲。高分化組11例，低中分化組25例。淋巴結轉移組13例，無轉移組23例。按2007年UICC標準TNM臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期21例。所有患者術前均未接受放化療治療，臨床資料完整。另取10例經病理證實的癌旁胰腺組織作為對照。

1.2 試劑與方法

MTA1兔抗人多克隆抗體，KISS-1兔抗人多克隆抗體以及二抗PV-6001均購自北京中杉金橋生物技術公司。所有石蠟標本均行4 μm連續切片，脫蠟至水后3%H2O2去離子水孵育，EDTA緩沖液加熱修復抗原，依次滴加一抗二抗，用PBS液代替一抗做陰性對照，DAB顯色，蘇木素復染，樹脂封片。每例均行Envision免疫組化二步法染色和HE染色，光鏡觀察。

1.3 結果判斷

MTA1的表達主要在細胞核，而KISS-1的陽性表達則位于細胞質，均呈棕黃色顆粒。陽性結果判定方法參照劉源等[2]的標準，以染色強度及陽性細胞數綜合判定。陽性細胞百分數：無細胞染色為0分，<10%為1分，10%～30%為2分，>30%為3分；顯色強度：不顯色或顯色不清為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深棕色為3分。二項乘積0～1為陰性（-），2～3 為弱陽性（+），4～5 為中度陽性（++），>5 為強陽性（+++）。

1.4 統計學方法

應用SPSS 13.0統計軟件包，進行χ2檢驗及Spearman等級相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MTA1與KISS-1在胰腺癌中的表達情況

MTA1陽性染色主要位于細胞核中，部分位于胞漿，呈棕黃色。胰腺癌組織中的陽性表達率為77.8%（28/36），而在對照組癌旁胰腺組織中的表達為20.0%（2/10），二者相比較差異具有統計學意義（χ2=11.517，P ＜ 0.01）。

KISS-1蛋白陽性表達為細胞質中出現棕黃色顆粒物質。在36例胰腺癌組織中的陽性表達率[38.9%（14/36）]明顯低于癌旁正常胰腺組織的 90.0%（9/10），（χ2=8.178，P ＜0.01）。

2.2 MTA1、KISS-1的表達與胰腺癌病理指標的關系

MTA1蛋白的陽性表達在不同的分化組、淋巴結轉移組及臨床分期組差異有統計學意義（P＜0.05），且隨腫瘤分化程度的降低、淋巴結轉移的產生及臨床分期的提高而增高。而KISS-1蛋白的陽性表達則隨分化程度的降低、淋巴結轉移的出現及臨床分期的進展而降低。同時，二者的表達均與患者的年齡、性別及腫瘤的部位無關（P＞0.05）。見表1。

表1 腫瘤轉移相關基因1、腫瘤轉移抑制基因KISS-1的表達與胰腺癌病理指標的關系（例）

2.3 MTA1與KISS-1在胰腺癌組織中表達的相關性

染色結果還發現，在28例MTA1表達陽性的胰腺癌組織中，僅有7例KISS-1亦表達陽性。經Spearman相關性分析表明MTA1與KISS-1的表達呈明顯負相關（r=-0.533，P＜ 0.01）。 見表 2。

表2 腫瘤轉移相關基因1與抑制基因KISS-1在胰腺癌中（例）

3 討論

3.1 MTA1與胰腺癌的關系

該基因是1993年從鼠的乳腺癌細胞株中克隆出來的，因其參與腫瘤的轉移，故命名為腫瘤轉移相關基因1（metastasis associated 1，MTA1）。它是核小體重構及組蛋白脫乙酰基酶復合物NuRD （nucleosomeremodeling and histone deacetylase）的一個亞基。NuRD是一種具有染色質重構與組蛋白去乙酰化活性的多亞單基復合物[3]。MTA1蛋白在NuRD復合物中與去乙酰化酶（histone deacetylases，HDACs）緊密結合，并作為組蛋白去乙酰化酶的輔助啟動因子，抑制轉錄過程。MTA1通過對細胞表面黏附分子、細胞骨架蛋白轉錄水平的調控使細胞間黏附力的下降，從而參與腫瘤細胞侵襲轉移過程[4-7]。目前已有實驗證實，MTA1基因表達與乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、非小細胞肺癌、前列腺癌等許多惡性腫瘤的浸潤轉移有密切關系[3]。本實驗發現在胰腺癌組織中MTA1的陽性表達率為77.8%，高于癌旁組織中的表達。MTA1的陽性表達與胰腺癌的分化程度、淋巴結轉移情況及臨床分期有關，且隨腫瘤分化程度的降低、淋巴結轉移的產生及臨床分期增加而升高。提示臨床上檢測MTA1的表達可能有助于評估胰腺癌的分化程度及判斷患者的預后。

3.2 KISS-1與胰腺癌的關系

該基因是在1996年發現的一個腫瘤轉移抑制基因，可抑制腫瘤細胞的趨向性和侵襲性，并限制其遷移能力，從而抑制惡性腫瘤的侵襲與轉移[8]。盡管到目前為止，KISS-1基因抑制腫瘤轉移的具體機制尚未明確，但最新研究表明可能與信號傳導途徑有關，一方面它通過抑制MMP-9的活性和MAPK途徑抑制細胞的移行能力；另一方面也可通過G蛋白耦聯途徑激發鈣動員抑制腫瘤細胞增殖[9]。KISS-1在正常組織中如腦、胎盤、睪丸、肝臟和小腸中都有不同水平表達，而在多種存在轉移的腫瘤組織中表達缺失[10]。大量研究已經證明KISS-1與黑素瘤、甲狀腺癌、膀胱癌以及子宮內膜癌的轉移密切相關[11-12]。本實驗研究發現，KISS-1在胰腺癌組織中的陽性表達率38.9%顯著低于癌旁胰腺組織的90.0%，并隨分化程度的降低、淋巴結轉移的出現及臨床分期增加而降低。這說明KISS-1在胰腺癌的發生、發展及侵襲轉移中起著重要作用，同時也預示KISS-1可能成為新的預測胰腺癌惡性潛能的標記物。

3.3 MTA1與KISS-1在胰腺癌組織中的關系

本實驗結果表明MTA1和KISS-1存在負相關性，證實了二者在胰腺癌的浸潤和轉移過程中起著重要的相互作用。

總之，MTA1和KISS-1的異常表達與胰腺癌的發生、發展有密切關系。聯合檢測MTA1與KISS-1有望為預測胰腺癌侵襲和轉移能力、選擇臨床治療方案以及評價患者預后提供參考。

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