載脂蛋白B基因3'VNTP的多態性與冠心病關系的研究

車艷苓 丑廣程

冠心病又稱冠狀動脈性心臟病，是由于動脈粥樣硬化病變造成的白色斑塊，而這些斑塊漸漸增多造成動脈腔狹窄，使患者的血流受阻，導致心臟缺血，產生心絞痛的一種疾病。隨著社會經濟的發展以及社會老齡化的來臨，冠心病漸漸成為影響人們健康的危險因素，該病的主要誘因是冠狀動脈粥樣硬化，但是動脈粥樣硬化的原因尚未完全清晰［1］。目前醫學上對于該病的研究尚在繼續，大多醫學專家認為它是一種由多因素引起的疾病。而載脂蛋白B基因3'VNTP的多態性在一定程度上和脂質的代謝、心血管等疾病有著較大可能的聯系，脂質代謝的變異目前已被證實是造成動脈粥樣硬化的因素，而載脂蛋白B基因3'VNTP的多態性很可能是導致冠心病的因素。本文通過檢測兩組對象的載脂蛋白B基因的3'VNTP等位基因，研究它的多樣性與冠心病之間的關系，現將結果報道如下。

資料與方法

1.一般資料:選取的我院2009年1月至2011年6月收治的80例冠心病患者中，男50例，女30例，平均年齡為(50.5±13.3);健康組經體檢發現均沒有冠心病患者，其中，男60例，女40例，平均年齡為(46.5±10.4)。所選的所有對象沒有血緣關系，也無糖尿病、肝病等疾病。

2.方法

(1)標本的采集:采集標本前囑咐所有受檢人員需在空腹的情況下采取靜脈血液，血液量為1.5ml到3ml，用2%的絡合劑乙二胺四乙酸(EDTA)進行抗凝，采用3%的明膠將白細胞分離出來，經SDS破膜以及乙醇沉淀等多個步驟來將DNA提取出來［2］。

(2)PCR技術:PCR的特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物，PCR由變性－－退火(復性)－－延伸三個基本反應步驟構成:①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至90℃ ～95℃一定時間后，使經過PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈與引物結合;②模板DNA與引物的退火:模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃～60℃，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸:DNA模板－－引物結合物在DNA聚合酶的作用下，于70℃ ～75℃，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性－－退火－－延伸三過程［3］。

(3)對3'VNTP等位基因的判定:在樣品的緩沖液中加進10毫升的擴增產物，然后用12%聚丙烯酰胺凝膠電泳觀測擴增的結果。通過圖片軟件判別結果，依據每條DNA段落在凝膠內的泳動距離，以串聯重復序列的拷貝數=(片段長度－151bp)/15bp公式計算出等位基因的堿基對數，憑借偶數命名等位基因的原則就能夠得到各類基因型。

3.統計學方法:所有數據均采用SPSS12.0數據處理系統，計數資料采取X2檢驗，數據比較差異具有統計學意義(P＜0.05)。

結 果

1.冠心病組與健康組在臨床資料上的比較，見表1。兩組調查對象在甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL－C)、脂蛋白a(LP(a))方面具有明顯的差異，且冠心病組的TG、Lp(a)明顯高于健康組，而在HDL－C上低于健康組。兩組在ApoB上沒有表現出明顯的差異。其中，對低密度脂蛋白(LDL)的處理公式為:LDL=TC－HDL－TG/5。

表1 兩組在TC、HDL－C、TG等方面的比較

2.兩組載脂蛋白B基因3'VNTP的多態性:經檢測發現兩組對象的等位基因在分布頻率方面體現了呈現雙峰型的特點，現在主要根據 HVE32、HVE34、HVE38來對等位基因進行亞組對比研究，結果顯示B基因在健康組的出現率低于冠心病組。詳見表2(僅是部分數據)。

表2 冠心病組與健康組載脂蛋白B基因3'VNTP等位基因頻率分布情況

討 論

1.載脂蛋白B是低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白的組成要素，和動脈粥樣硬化有著極為重要的聯系，另一方面動脈粥樣硬化是冠心病的主要誘因［4］。同時由于地區的差異，載脂蛋白B基因3'VNTP等位基因分布頻率也存在區別。就目前看來，根據許多學者對載脂蛋白B基因的多態性的研究顯示，APOB基因的多態性和冠心病的發生有著極為緊密的關系，通過本文對ApoB的基因3'VNTP的分析看，大等位基因的分布頻率在冠心病組與健康組間有著明顯的差別，說明大等位基因跟ApoB基因的表達調換了，導致血脂代謝出現了紊亂的現象。此次研究說明了大等位基因在一定程度上參與了導致冠心病發生的過程，但是大等位基因是不是一定引起冠心病的發生，還需要進一步研究。

1 張樂，曾藝，楊期東，等.載脂蛋白B基因3'VNTP多態性與長沙地區腦血管病的關系研究［J］.實用預防醫學，2005，1(12):57－59.

2 張宏偉，許虹，向輝華，等.湖北恩施土家族地區人群載脂蛋白B基因3'VNTP與患冠心病相關性的臨床分析［J］.甘肅醫學，2010，4(29):364 －366.

3 顧云，王綠婭，吳桂賢，等.冠心病和腦梗塞患者載脂蛋白B基因多態性研究［J］.中華心血管病雜志，2001，27(1):13 －16.

4 杜珙，薛紅，吳剛，等.血漿載脂蛋白B基因3'端可變數目串聯重復序列的結構研究［J］.中華醫學遺傳學雜志，2006，3(23):335－338.