松乳菇菌絲體純培養特性研究*

薛振文 應國華 呂明亮 李伶俐 張 坤 高鳳娟 葉和軍

(1.麗水市林業科學研究院,浙江 麗水 323000;2.興和縣農業局,內蒙古 興和 013650;3.麗水學院,浙江 麗水 323000;4.麗水白云生態林場,浙江 麗水 323000)

松乳菇 [Lactarius deliciosus(L.ex.Fr.)Gray]是一種外生菌根食用菌,又名美味松乳菇,俗稱烏松菌、松菌、茶花菌、雁來菌、寒菌,屬紅菇科,乳菇屬。其味道鮮美,營養豐富。在浙江西南部山區有大量分布,繁殖季節為春秋兩季,當地農民有采食并上市場交易的習慣。松乳菇目前尚不能進行人工栽培,市場供應全依賴于野生采集,由于過度采摘,產地自然資源破壞嚴重,產量逐漸減少。

項目組在成功實現褐環粘蓋牛肝菌人工栽培的基礎上,利用菌根學原理進一步研究松乳菇的人工栽培技術。現將松乳菇菌絲體部分研究工作報道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌株 菌種為麗水市林業科學研究院食用菌研究所在麗水采集、分離、保藏,編號L4,經中國林科院熱帶林業研究所分子鑒定為松乳菇。

1.2 供試培養基 母種培養基為:馬鈴薯20%、麩皮1%、葡萄糖2%、蛋白胨0.3%、磷酸二氫鉀0.15%、硫酸鎂0.05%、維生素B10.001%、瓊脂2.1%、水1 L、pH自然。

碳源基礎培養基:基礎配方為馬鈴薯 10%、蛋白胨0.3%、磷酸二氫鉀0.15%、硫酸鎂0.05%、維生素B10.001%、瓊脂2.1%、水1 L,pH自然;分別加葡萄糖、白糖、紅糖、D-果糖作為處理組;以不加碳源的培養基為對照。

氮源基礎培養基:基礎配方為馬鈴薯20%、葡萄糖2%、磷酸二氫鉀0.15%、硫酸鎂0.05%、維生素B10.001%、瓊脂2.1%、水1 L、pH自然;分別加氯化銨、酒石酸胺、蛋白胨、酵母浸膏粉、乙二胺四乙酸、牛肉浸膏、豆胨、硝酸鈉、葉酸、煙酸、鹽酸硫胺、L-谷氨酸作為處理組;以不加氮源的培養基為對照。

1.3 pH值梯度試驗 設4、6、8、10四個pH梯度,采用母種培養基配方,用鹽酸和氫氧化鈉調節培養基pH。

1.4 不同培養溫度梯度試驗 采用母種培養基配方,設15℃、22℃、27℃、32℃四個梯度為培養溫度。

1.5 試驗方法 采用半固體平板培養法:按照無菌操作要求,挑取活化的菌種塊約0.5 cm2接種于固體平板中央,封口標記,每處理設5個重復。溫度梯度試驗組培養皿置于各溫度培養箱中避光靜置培養,其余均置于27℃恒溫培養箱中培養。分別于接種后第7天和第19天采用十字交叉法測量菌落直徑,觀察生長情況并予以記錄。采用DPS和Microsoft Office Excel軟件進行數據處理分析。

2 結果與分析

2.1 不同碳源對松乳菇菌絲生長的影響

(1)菌絲日均生長量。從表1可以看出,相比不加碳源培養基 (CK),加碳源培養基對松乳菇菌絲生長效應明顯,其中以葡萄糖為碳源的菌絲日均生長量較大,為4.406 mm,與其他碳源培養基有極顯著差異;其次是以白糖為碳源,日均生長量為4.052 mm;以D-果糖和紅糖為碳源的生長效應無顯著差異,菌絲日均生長量較少,分別為3.683 mm和3.608 mm。表明不同碳源對松乳菇菌絲體生長的影響有明顯差異。

(2)菌落形態特征。以菌絲濃密、菌皮厚、有氣生菌絲、菌落顏色呈淡黃色或白色為長勢良好。從表1可見,松乳菇以葡萄糖和D-果糖為碳源的菌絲長勢較好,表現為菌落凹凸不平,呈橙黃色,菌皮較厚,菌絲濃密。其次為白糖和紅糖,表現為菌落較平整,菌皮較薄,菌絲較密,無氣生菌絲,菌絲中間橙黃色前端白色。在不加碳源的培養基上長勢差,菌絲稀淡,菌皮薄,緊貼培養基生長,無氣生菌絲,菌落平整,呈白色。

綜合分析松乳菇菌絲體的單因子碳源試驗結果,以葡萄糖為最佳。

2.2 不同氮源對松乳菇菌絲生長的影響

(1)菌絲體日均生長量。從表2看,氮源為氯化銨和葉酸的菌絲日均生長量較大,分別為4.458 mm和4.450 mm;其次為鹽酸硫胺、酒石酸胺、L-谷氨酸、硝酸鈉,日均生長量分別為4.083 mm、3.95 mm、3.875 mm、3.65 mm、3.442 mm。相比空白對照,蛋白胨對菌絲生長的效應較小,煙酸、酵母浸膏粉、豆胨、乙二胺四乙酸、牛肉浸膏無效應或是負效應。差異顯著性分析結果顯示,氯化銨、葉酸與其他氮源處理之間存在極顯著差異,其他各氮源之間存在顯著差異。表明不同氮源對松乳菇菌絲體生長有顯著的影響。

(2)菌落形態特征。從表2看出,以氯化銨、葉酸、鹽酸硫胺和蛋白胨為氮源的處理,菌絲生長情況好,表現為菌落凹凸不平,顏色呈淡黃色,菌皮較厚,菌絲較密,前端或中間菌絲氣生。以酒石酸胺、L-谷氨酸、硝酸鈉為氮源,菌絲體生長情況較好:菌落凹凸不平,菌皮較薄,菌絲較淡,前端菌絲氣生或無氣生。以煙酸、酵母浸膏粉和豆胨為氮源的菌落生長情況較差:菌落平整,菌皮薄,菌絲淡,無氣生菌絲,與空白對照無明顯區別。松乳菇菌絲塊在以乙二胺四乙酸和牛肉浸膏為氮源的培養基上不萌發。

表1 不同碳源的松乳菇菌絲體日均生長量及菌絲生長情況

表2 不同氮源的松乳菇菌絲體日均生長量及菌絲生長情況

表3 不同培養溫度下松乳菇菌絲體日均生長量及菌絲生長情況

表4 培養基不同pH值條件下松乳菇菌絲體日均生長量及菌絲生長情況

綜合分析松乳菇菌絲體的單因子氮源試驗結果,以氯化銨和葉酸為佳。

2.3 不同培養溫度對松乳菇菌絲生長的影響

(1)菌絲體日均生長量。表3結果表明,培養溫度在27 ℃時,菌絲日均生長量較大,為4.025 mm;其次為32℃和22℃,日均生長量分別為3.96 mm、3.675 mm;在15℃時,菌絲生長較慢,日均生長量僅為1.225 mm。

差異顯著性分析結果顯示,培養溫度27℃與其他處理之間存在顯著差異;22℃、27℃、32℃處理與15℃處理之間,有極顯著差異。

(2)菌落形態特征。從表3看,在不同培養溫度下,菌落形態和顏色無明顯區別,生長較好,表現為菌絲濃密,菌落凹凸不平,菌皮較厚,有氣生菌絲。

綜合分析松乳菇菌絲體在22～32℃培養溫度下都能較好生長,以27℃為適。

2.4 培養基不同pH值對松乳菇菌絲生長的影響

(1)菌絲體日均生長量。從表4可見,pH值為6時,菌絲體日均生長量最大,為 4.278 mm;其次是 pH值為 8、10、4,日均生長量分別為3.331 mm、3.167 mm、2.889 mm。

差異顯著性分析結果,pH值為6處理與其他處理有極顯著差異,其他各處理之間存在顯著差異。表明培養基的酸堿度也是影響松乳菇菌絲體生長的重要因子,其最適pH值為6。

(2)菌落形態特征。從表4看,pH為4的培養基加瓊脂不能凝固,pH為10時培養基顏色呈紅褐色,其他各處理均屬正常。菌落顏色,pH為6時呈淡黃色,菌絲較強壯;pH為8、10、4時呈橙黃色和橙紅色,菌絲較弱,有衰老現象。從菌落形態看,pH為4和10時,無明顯氣生菌絲,表明在過酸或過堿培養基上,菌絲生長較差。pH為6和8的處理,菌絲濃密,菌落凹凸不平,菌皮較厚,有氣生菌絲,表明接近中性培養基適于菌絲體生長。

3 結果與討論

根據本試驗結果,松乳菇L4菌株菌絲體生長的最佳碳源為葡萄糖,最佳氮源為氯化銨和葉酸,最適培養溫度為27℃,最適pH值為6。與以往文獻報道的研究結果[1～4]有所差異,原因可能是與菌株個體差異和所用的研究方法不同有關。在試驗過程中,保證接種菌齡一致性、接種菌塊大小一致性和接種部位的確定性,也許可以提高試驗結果的準確性。本研究是在單因子條件下測試的碳、氮營養,而多因子的交互效應尚待研究。

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